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Texto completo SciELO Chile
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Id: biblio-1142419
Autor: Safari, Fatemeh; Farajnia, Safar; Behbahani, Abbas Behzad; Zarredar, Habib; Barekati-Mowahed, Mazyar; Dehghani, Hesam.
Título: Caspase-7 deficiency in Chinese hamster ovary cells reduces cell proliferation and viability
Fonte: Biol. Res;53:52, 2020. tab, graf.
Idioma: en.
Projeto: Tabriz University of Medical Sciences; . Biotechnology Development Council of the Islamic Republic of Iran.
Resumo: BACKGROUND: Chinese hamster ovary (CHO) cells are the most commonly used mammalian host cell In the commercial-scale production of biopharmaceutical proteins. Modification of genes involved in apoptosis may improve the productivity of CHO cells. Executive caspases, including caspases 3 and 7, play critical roles in apoptosis. The effects of the ablation of the caspase 7 gene on proliferation and viability of CHO cells remains unknown. In this study, we applied clustered regularly interspaced short palindromic repeat (CRISPR/Cas9) to target caspase 7 gene of CHO K1 cell via all in one and homology targeted integration strategies. Consequently, the effect of caspase 7 deficiency on cell proliferation, viability, and apoptosis was studied by MTT assay and flow cytometry. RESULTS: Findings of gel electrophoresis, western blotting, and sequencing confirmed the caspase 7 gene silencing in CHO cells (CHO-KO). Proliferation assay revealed that caspase 7 deficiency in CHO cells resulted in the reduction of proliferation in various CHO-KO clones. Besides, the disruption of caspase 7 had negative effects on cell viability in exposure with NaBu which confirmed by MTT assay. Results of flow cytometry using Anexin V/PI demonstrated that Nabu treatment (11 mM) declined the percentage of live CHO-K1 and CHO-KO cells to 70.3% and 5.79%. These results verified that the CHO-K1 cells were more resistant to apoptosis than CHO-KO, however most of CHO-KO cells undergone early apoptosis (91.9%) which seems to be a fascinating finding. CONCLUSION: These results reveal that caspase 7 may be involved in the cell cycle progression of CHO cells. Furthermore, it seems that targeting caspase 7 is not the ideal route as it had previously been imagined within the prevention of apoptosis but the relation between caspase 7 deficiency, cell cycle arrest, and the occurrence of early apoptosis will require more investigation.
Descritores: Sobrevivência Celular
Apoptose
Proliferação de Células
Caspase 7/deficiência
-Cricetulus
Cricetinae
Células CHO
Caspase 7/genética
Limites: Animais
Responsável: CL1.1 - Biblioteca Central


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Id: biblio-1087166
Autor: Li, Jing; Wei, Suzhen; Cao, Chunlai; Chen, Kangyue; He, Hua; Gao, Guoquan.
Título: Retrovectors packaged in CHO cells to generate GLP-1-Fc stable expression CHO cell lines
Fonte: Electron. j. biotechnol;41:56-59, sept. 2019. tab, graf.
Idioma: en.
Projeto: China Postdoctoral Science Foundation.
Resumo: Background: Chinese hamster ovary (CHO) cells are the most dependable mammalian cells for the production of recombinant proteins. Replication-incompetent retroviral vector (retrovector) is an efficient tool to generate stable cell lines. Multiple copies of integrated genes by retrovector transduction results in improved recombinant protein yield. HEK-293 and their genetic derivatives are principal cells for retrovector production. Retrovectors packaged in HEK-293 cells pose a risk of infectious agent transmission, such as viruses and mycoplasmas, from serum and packaging cells. Results: In this report, retrovectors were packaged in CHO cells cultured in chemically defined (CD) media. The retrovectors were then used to transduce CHO cells. This method can block potential transmission of infectious agents from serum and packaging cells. With this method, we generated glucagon-like protein-1 Fc fusion protein (GLP-1-Fc) stable expression CHO cell lines. Productivity of GLP-1-Fc can reach 3.15 g/L. The GLP-1-Fc protein produced by this method has comparable bioactivity to that of dulaglutide (Trulicity). These stable cell lines retain 95­100% of productivity after 40 days of continuous culture (~48­56 generations). Conclusions: Suspension CHO cells are clean, safe, and reliable cells for retrovector packaging. Retrovectors packaged from this system could be used to generate CHO stable cell lines for recombinant protein expression.
Descritores: Retroviridae
Proteínas Recombinantes/metabolismo
Células CHO/metabolismo
-Fragmentos Fc das Imunoglobulinas
Linhagem Celular
Cromatografia em Gel/métodos
Vetores de Doenças
Peptídeo 1 Semelhante ao Glucagon
Espectrometria de Massas em Tandem
Técnicas de Cultura Celular por Lotes
Responsável: CL1.1 - Biblioteca Central


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Id: biblio-1010296
Autor: Avello, Veronica; Tapia, Bethzabeth; Vergara, Mauricio; Acevedo, Cristian; Berrios, Julio; Reyes, Juan G; Altamirano, Claudia.
Título: Impact of sodium butyrate and mild hypothermia on metabolic and physiological behaviour of CHO TF 70R cells
Fonte: Electron. j. biotechnol;27:55-62, May. 2017. tab, graf.
Idioma: en.
Projeto: FONDECYT; . Universidad Federico Santa Maria.
Resumo: Background: To reduce costs associated with productivity of recombinant proteins in the biopharmaceutical industry, research has been focused on regulatory principals of growth and survival during the production phases of the cell culture. The main strategies involve the regulation of cell proliferation by the modulation of cell cycle control points (G1/S or G2/M) with mild hypothermia and the addition of sodium butyrate (NaBu). In this study, batch culture strategies were evaluated using CHO TF 70R cells producing the recombinant human tissue plasminogen activator (rh-tPA), to observe their individual and combined effect on the cellular physiological state and relevant kinetic parameters. Results: NaBu addition has a negative effect on the mitochondrial membrane potential (ΔΨm), the values of which are remarkably diminished in cultures exposed to this cytotoxic compound. This effect was not reflected in a loss of cell viability. NaBu and mild hypothermic conditions increased the doubling time in the cell cultures, suggesting that these strategies triggered a general slowing of each cell cycle phase in a different way. Finally, the individual and combined effect of NaBu and mild hypothermia produced an increase in the specific rh-tPA productivity in comparison to the control at 37°C without NaBu. Nevertheless, both strategies did not have a synergistic effect on the specific productivity. Conclusions: The combination of NaBu addition and mild hypothermic condition causes an impact on physiological and metabolic state of CHO TF 70R cells, decreasing cell growth rate and improving glucose consumption efficiency. These results therefore provide a promising strategy to increase specific productivity of rh-tPA.
Descritores: Proteínas Recombinantes/metabolismo
Células CHO/metabolismo
Ativador de Plasminogênio Tecidual/metabolismo
Ácido Butírico/metabolismo
Hipotermia
-Ciclo Celular
Sobrevivência Celular
Células CHO/fisiologia
Ativador de Plasminogênio Tecidual/biossíntese
Proliferação de Células
Potencial da Membrana Mitocondrial
Responsável: CL1.1 - Biblioteca Central


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Id: biblio-998850
Autor: de Paula, Gabriella Christina Gonçalves Manini.
Título: Produção da proteína recombinante humana TGF-ß1 (fator do crescimento transformante beta 1) em células de mamífero / Production of recombinant human protein TGF-ß1 (Transforming Growth Factor Beta 1) in mammalian cells.
Fonte: São Paulo; s.n; 2018. 93 p. tab, ilus, graf.
Idioma: pt.
Tese: Apresentada a Universidade de São Paulo. Instituto de Química para obtenção do grau de Mestre.
Resumo: O fator de crescimento transformante beta tipo 1, TGF-ß1, é uma proteína extracelular homodimérica secretada por vários tipos celulares, que pode ter ação parácrina ou endócrina. Essa proteína está envolvida em processos celulares de diferenciação, proliferação, mobilidade e formação de matriz extracelular. Além disso, é parte importante dos processos de regeneração tecidual, atuando, de maneira decisiva, no reparo, atraindo macrófagos e fibroblastos para o local da injúria e estimulando a angiogênese. Assim, considerando o papel desse peptídeo no processo regenerativo, o uso de TGF-ß1 como proteína terapêutica na área de Bioengenharia Tecidual é bastante promissor. Apesar disso, a venda dessa proteína, para fins terapêuticos, é inexistente no mercado e a proteína recombinante vendida, que só pode ser utilizada em pesquisas científicas, não é produzida nacionalmente e chega a custar R$200.000,00/mg. Nesse contexto, o objetivo do presente trabalho é desenvolver uma metodologia de produção do fator recombinante TGF-ß1 em células de ovário de hamster chinês (CHO), visando à obtenção de níveis altos de rendimento, e, futuramente, a transferência da tecnologia de produção para a iniciativa privada, tornando possível seu uso na Medicina Regenerativa, sozinho ou em combinação com outros fatores de crescimento. O cDNA de TGF-ß1 foi amplificado a partir de um banco de cDNA humano e clonado no vetor proprietário pNU1 de expressão de mamífero. A construção pNU1/TGF-ß1 foi utilizada para transfectar estavelmente células CHO DG44 e uma estratégia de co-amplificação foi utilizada para selecionar células transfectantes com maior número de cópias da sequência correspondente a TGF-ß1. Estas culturas foram submetidas ao processo de amplificação gênica com concentrações crescentes de metotrexato. Ensaios de Western Blot e ELISA foram realizados utilizando-se o meio condicionado pelas populações selecionadas e por clones superprodutores. Entre os 41clones obtidos, cinco apresentaram maiores níveis de produção de TGF-ß1, entre 1.000 e 2.000 ng/mL. Estes clones foram selecionados para a realização de testes de atividade in vitro utilizando-se células A549, que permitem avaliar a transição epitélio-mesênquima. Um ensaio de cicatrização de feridas em peles do dorso de camundongos foi padronizado e utilizado para avaliar a atividade in vivo do clone que apresentou melhor resultado in vitro. A proteína TGF-ß1 foi parcialmente purificada por HPLC em uma coluna de afinidade. Portanto, a proteína TGF-ß1 humana recombinante foi produzida, apresentando atividade biológica in vitro e in vivo, sendo capaz de reparar eficientemente feridas cutâneas. Essa iniciativa pode oferecer aos pacientes uma alternativa para o tratamento de lesões teciduais, acelerando a cicatrização de feridas e o reparo de tecidos

The transforming growth factor beta 1, TGF-ß1, is a homodimeric extracellular protein secreted by several cell types, which may have paracrine or endocrine action. This protein is involved in cellular processes of differentiation, proliferation, mobility and formation of extracellular matrix. In addition, it is an important part of the tissue regeneration processes, acting decisively on repair, attracting macrophages and fibroblasts to the site of injury and stimulating angiogenesis. Therefore, considering the role of this peptide in the regenerative process and the use of TGF-ß1 as a therapeutic protein in the field of Tissue Bioengineering is very promising. Despite this, the sale of this protein for therapeutic purposes is nonexistent in the market and the recombinant protein available in the market, which can only be used in scientific research, is not produced nationally and the costs are in the order of R$ 200,000.00/mg. In this context, the objective of the present work is to develop a methodology for the production of the TGF-ß1 recombinant factor in Chinese hamster ovary (CHO) cells, aiming at obtaining high yields, and, in the future, transfering the production technology to the private initiative, allowing its use in Regenerative Medicine, alone or in combination with other growth factors. The TGF-ß1 cDNA was amplified from a human cDNA library and cloned into the proprietary pNU1 mammalian expression vector. The pNU1/TGF-ß1 construct was used to stably transfect CHO DG44 cells, and a co-amplification strategy was used to select transfectant cells with the largest number of gene copies. These cultures were subjected to the process of gene amplification with methotrexate. Western Blot and ELISA were used to assay the conditioned medium obtained from the selected cell populations and from overproducing cell clones. Among the 41 clones obtained, five presented higher levels of TGF-ß1 production, between 1,000 and 2,000 ng/mL. These clones were selected for in vitro activity testing using A549 cells to evaluate the epithelial-mesenchymal transition. Awound healing assay on mouse dorsal skin was standardized and used to evaluate the in vivo activity of the cell clone which displayed the highest result in vitro. The TGF-ß1 protein was partially purified by HPLC on an affinity column. Therefore, the recombinant human TGF-ß1 protein was produced and shown to display biological activity both in vitro and in vivo, being able to eficiently repair cutaneous wounds. This initiative may provide patients with an alternative treatment for tissue damage, accelerating wound healing and tissue repair
Descritores: Células CHO/citologia
Produção de Substâncias, Produtos e Materiais
Medicina Regenerativa/classificação
Fator de Crescimento Transformador beta1/agonistas
Mamíferos
-Técnicas In Vitro
Ensaio de Imunoadsorção Enzimática/estatística & dados numéricos
Western Blotting/estatística & dados numéricos
Cromatografia Líquida de Alta Pressão/instrumentação
Limites: Animais
Camundongos
Responsável: BR40.1 - DBD - Divisão de Biblioteca e Documentacão do Conjunto das Químicas
BR40.1; T574.88, D324p. 30100026177-Q


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Id: biblio-967928
Autor: de Paula, Gabriella Christina Gonçalves Manini.
Título: Produção da proteína recombinante humana TGF-ß1 (fator do crescimento transformante beta 1) em células de mamífero / Production of recombinant human protein TGF-ß1 (Transforming Growth Factor Beta 1) in mammalian cells.
Fonte: São Paulo; s.n; 2018. 93 p. ilus, graf, tab.
Idioma: pt.
Tese: Apresentada a Universidade de São Paulo. Instituto de Química para obtenção do grau de Doutor.
Resumo: O fator de crescimento transformante beta tipo 1, TGF-ß1, é uma proteína extracelular homodimérica secretada por vários tipos celulares, que pode ter ação parácrina ou endócrina. Essa proteína está envolvida em processos celulares de diferenciação, proliferação, mobilidade e formação de matriz extracelular. Além disso, é parte importante dos processos de regeneração tecidual, atuando, de maneira decisiva, no reparo, atraindo macrófagos e fibroblastos para o local da injúria e estimulando a angiogênese. Assim, considerando o papel desse peptídeo no processo regenerativo, o uso de TGF-ß1 como proteína terapêutica na área de Bioengenharia Tecidual é bastante promissor. Apesar disso, a venda dessa proteína, para fins terapêuticos, é inexistente no mercado e a proteína recombinante vendida, que só pode ser utilizada em pesquisas científicas, não é produzida nacionalmente e chega a custar R$200.000,00/mg. Nesse contexto, o objetivo do presente trabalho é desenvolver uma metodologia de produção do fator recombinante TGF-ß1 em células de ovário de hamster chinês (CHO), visando à obtenção de níveis altos de rendimento, e, futuramente, a transferência da tecnologia de produção para a iniciativa privada, tornando possível seu uso na Medicina Regenerativa, sozinho ou em combinação com outros fatores de crescimento. O cDNA de TGF-ß1 foi amplificado a partir de um banco de cDNA humano e clonado no vetor proprietário pNU1 de expressão de mamífero. A construção pNU1/TGF-ß1 foi utilizada para transfectar estavelmente células CHO DG44 e uma estratégia de co-amplificação foi utilizada para selecionar células transfectantes com maior número de cópias da sequência correspondente a TGF-ß1. Estas culturas foram submetidas ao processo de amplificação gênica com concentrações crescentes de metotrexato. Ensaios de Western Blot e ELISA foram realizados utilizando-se o meio condicionado pelas populações selecionadas e por clones superprodutores. Entre os 41clones obtidos, cinco apresentaram maiores níveis de produção de TGF-ß1, entre 1.000 e 2.000 ng/mL. Estes clones foram selecionados para a realização de testes de atividade in vitro utilizando-se células A549, que permitem avaliar a transição epitélio-mesênquima. Um ensaio de cicatrização de feridas em peles do dorso de camundongos foi padronizado e utilizado para avaliar a atividade in vivo do clone que apresentou melhor resultado in vitro. A proteína TGF-ß1 foi parcialmente purificada por HPLC em uma coluna de afinidade. Portanto, a proteína TGF-ß1 humana recombinante foi produzida, apresentando atividade biológica in vitro e in vivo, sendo capaz de reparar eficientemente feridas cutâneas. Essa iniciativa pode oferecer aos pacientes uma alternativa para o tratamento de lesões teciduais, acelerando a cicatrização de feridas e o reparo de tecidos

The transforming growth factor beta 1, TGF-ß1, is a homodimeric extracellular protein secreted by several cell types, which may have paracrine or endocrine action. This protein is involved in cellular processes of differentiation, proliferation, mobility and formation of extracellular matrix. In addition, it is an important part of the tissue regeneration processes, acting decisively on repair, attracting macrophages and fibroblasts to the site of injury and stimulating angiogenesis. Therefore, considering the role of this peptide in the regenerative process and the use of TGF-ß1 as a therapeutic protein in the field of Tissue Bioengineering is very promising. Despite this, the sale of this protein for therapeutic purposes is nonexistent in the market and the recombinant protein available in the market, which can only be used in scientific research, is not produced nationally and the costs are in the order of R$ 200,000.00/mg. In this context, the objective of the present work is to develop a methodology for the production of the TGF-ß1 recombinant factor in Chinese hamster ovary (CHO) cells, aiming at obtaining high yields, and, in the future, transfering the production technology to the private initiative, allowing its use in Regenerative Medicine, alone or in combination with other growth factors. The TGF-ß1 cDNA was amplified from a human cDNA library and cloned into the proprietary pNU1 mammalian expression vector. The pNU1/TGF-ß1 construct was used to stably transfect CHO DG44 cells, and a co-amplification strategy was used to select transfectant cells with the largest number of gene copies. These cultures were subjected to the process of gene amplification with methotrexate. Western Blot and ELISA were used to assay the conditioned medium obtained from the selected cell populations and from overproducing cell clones. Among the 41 clones obtained, five presented higher levels of TGF-ß1 production, between 1,000 and 2,000 ng/mL. These clones were selected for in vitro activity testing using A549 cells to evaluate the epithelial-mesenchymal transition. Awound healing assay on mouse dorsal skin was standardized and used to evaluate the in vivo activity of the cell clone which displayed the highest result in vitro. The TGF-ß1 protein was partially purified by HPLC on an affinity column. Therefore, the recombinant human TGF-ß1 protein was produced and shown to display biological activity both in vitro and in vivo, being able to eficiently repair cutaneous wounds. This initiative may provide patients with an alternative treatment for tissue damage, accelerating wound healing and tissue repair
Descritores: Células CHO/química
Fator de Crescimento Transformador beta1/análise
-Ensaio de Imunoadsorção Enzimática/instrumentação
Western Blotting/instrumentação
Medicina Regenerativa/tendências
Proteínas de Ligação a TGF-beta Latente
Limites: Animais
Camundongos
Responsável: BR40.1 - DBD - Divisão de Biblioteca e Documentacão do Conjunto das Químicas
BR40.1; T574.88, D324p. 30100026177-Q


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Texto completo SciELO Brasil
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Id: lil-741625
Autor: Moratelli, Ricardo; Calisher, Charles H.
Título: Bats and zoonotic viruses: can we confidently link bats with emerging deadly viruses?
Fonte: Mem. Inst. Oswaldo Cruz;110(1):1-22, 03/02/2015. tab, graf.
Idioma: en.
Projeto: PAPES, FIOCRUZ, CNPq; . CNPq/CsF; . FAPERJ.
Resumo: An increasingly asked question is 'can we confidently link bats with emerging viruses?'. No, or not yet, is the qualified answer based on the evidence available. Although more than 200 viruses - some of them deadly zoonotic viruses - have been isolated from or otherwise detected in bats, the supposed connections between bats, bat viruses and human diseases have been raised more on speculation than on evidence supporting their direct or indirect roles in the epidemiology of diseases (except for rabies). However, we are convinced that the evidence points in that direction and that at some point it will be proved that bats are competent hosts for at least a few zoonotic viruses. In this review, we cover aspects of bat biology, ecology and evolution that might be relevant in medical investigations and we provide a historical synthesis of some disease outbreaks causally linked to bats. We provide evolutionary-based hypotheses to tentatively explain the viral transmission route through mammalian intermediate hosts and to explain the geographic concentration of most outbreaks, but both are no more than speculations that still require formal assessment.
Descritores: Antineoplásicos Fitogênicos/isolamento & purificação
Antioxidantes/isolamento & purificação
Ácidos Graxos/análise
Resíduos Industriais/análise
Malus/química
Óleos Vegetais/isolamento & purificação
Sementes/química
-Antineoplásicos Fitogênicos/efeitos adversos
Antineoplásicos Fitogênicos/economia
Antineoplásicos Fitogênicos/farmacologia
Antioxidantes/efeitos adversos
Antioxidantes/economia
Antioxidantes/farmacologia
Linhagem Celular Tumoral
Fenômenos Químicos
Células CHO
Cricetulus
Proliferação de Células/efeitos dos fármacos
Suplementos Nutricionais/efeitos adversos
Suplementos Nutricionais/economia
Ácidos Graxos não Esterificados/efeitos adversos
Ácidos Graxos não Esterificados/análise
Ácidos Graxos não Esterificados/economia
Ácidos Graxos/efeitos adversos
Ácidos Graxos/economia
Conservantes de Alimentos/efeitos adversos
Conservantes de Alimentos/economia
Conservantes de Alimentos/isolamento & purificação
Conservantes de Alimentos/farmacologia
Indústria de Processamento de Alimentos/economia
Frutas/química
Frutas/economia
Índia
Resíduos Industriais/economia
Ácido Linoleico/efeitos adversos
Ácido Linoleico/análise
Ácido Linoleico/economia
Ácido Oleico/efeitos adversos
Ácido Oleico/análise
Ácido Oleico/economia
Óleos Vegetais/química
Óleos Vegetais/economia
Óleos Vegetais/farmacologia
Limites: Animais
Humanos
Tipo de Publ: Research Support, Non-U.S. Gov't
Responsável: BR1.1 - BIREME


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Texto completo SciELO Saúde Pública
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Id: lil-736456
Autor: Langellier, Brent A.
Título: Consumption and expenditure on food prepared away from home among Mexican adults in 2006 / Consumo y gasto en alimentos preparados fuera de casa en adultos mexicanos en 2006
Fonte: Salud pública Méx;57(1):4-13, ene.-feb. 2015. tab.
Idioma: en.
Resumo: Objective. To describe food expenditure and consumption of foods prepared away from home among Mexican adults. Materials and methods. Data were from 45 241 adult participants in the National Health and Nutrition Survey 2006, a nationally-representative, cross-sectional survey of Mexican households. Descriptive statistics and multivariable linear and logistic regression were used to assess the relationship between location of residence, educational attainment, socioeconomic status and the following: 1) expenditure on all food and at restaurants, and 2) frequency of consumption of comida corrida or restaurant food and street food. Results. Food expenditure and consumption of food prepared away from home were positively associated with socioeconomic status, educational attainment, and urban vs. rural residence (p<0.001 for all relationships in bivariate analyses). Conclusions. Consumption of food prepared outside home may be an important part of the diet among urban Mexican adults and those with high socioeconomic status and educational attainment.

Objetivo. Describir los gastos en alimentos y el consumo de alimentos preparados fuera de casa en población mexicana. Material y métodos. Los datos fueron de 45 241 adultos mexicanos en la Encuesta Nacional de Salud y Nutrición de 2006, representativa al nivel nacional. Se utilizaron estadísticas descriptivas y regresión linear y logística para estimar la relación entre el lugar de residencia, el nivel educativo y el nivel socioeconómico, con el gasto en todos los alimentos y en restaurantes, y con la frecuencia de consumo de comida corrida, en restaurantes y de la calle. Resultados. El gasto en alimentos y el consumo de alimentos preparados se asociaron positivamente con el nivel socioeconómico, el nivel educativo y la residencia rural (p<0,001 para todas las relaciones). Conclusiones. El consumo de alimentos preparados puede ser una parte importante de la dieta de los adultos urbanos y de aquéllos con altos niveles socioeconómicos y educativos.
Descritores: Canais de Potássio Corretores do Fluxo de Internalização Acoplados a Proteínas G/química
Doenças Neurodegenerativas/patologia
Medula Espinal/metabolismo
Tirosina/química
-Anisomicina/química
Anticorpos/química
Comportamento
Western Blotting
Linhagem Celular
Linhagem Celular Tumoral
Células CHO
DNA
Relação Dose-Resposta a Droga
Eletrofisiologia
Ensaio de Imunoadsorção Enzimática
Canais de Potássio Corretores do Fluxo de Internalização Acoplados a Proteínas G/fisiologia
Proteínas de Ligação ao GTP/metabolismo
Átrios do Coração/metabolismo
Ventrículos do Coração/citologia
Ventrículos do Coração/patologia
Immunoblotting
Imuno-Histoquímica
Inflamação
Microscopia Confocal
Microscopia de Fluorescência
MICE, INBRED CABDOMENABDOMINAL INJURIESBL
Células Musculares/metabolismo
NIH ABATTOIRSTABATTOIRS CELLS
Neurônios/metabolismo
Fosforilação
Estrutura Terciária de Proteína
Plasmídeos/metabolismo
Estresse Fisiológico
Nervo Isquiático/metabolismo
Medula Espinal/patologia
Xenopus laevis
Limites: Animais
Cricetinae
Feminino
Humanos
Masculino
Camundongos
Tipo de Publ: Research Support, N.I.H., Extramural
Responsável: BR1.1 - BIREME


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Texto completo SciELO Brasil
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Id: lil-720422
Autor: Fratus, Alessandra Sampaio Bassi; Cabral, Fernanda Janku; Fotoran, Wesley Luzetti; Medeiros, Márcia Melo; Carlos, Bianca Cechetto; Martha, Rosimeire dalla; Silva, Luiz Hildebrando Pereira da; Lopes, Stefanie Costa Pinto; Costa, Fabio Trindade Maranhão; Wunderlich, Gerhard.
Título: Antibody recognition of Plasmodium falciparum infected red blood cells by symptomatic and asymptomatic individuals in the Brazilian Amazon
Fonte: Mem. Inst. Oswaldo Cruz;109(5):598-601, 19/08/2014. tab, graf.
Idioma: en.
Projeto: FAPESP; . CNPq.
Resumo: In the Amazon Region, there is a virtual absence of severe malaria and few fatal cases of naturally occurring Plasmodium falciparum infections; this presents an intriguing and underexplored area of research. In addition to the rapid access of infected persons to effective treatment, one cause of this phenomenon might be the recognition of cytoadherent variant proteins on the infected red blood cell (IRBC) surface, including the var gene encoded P. falciparum erythrocyte membrane protein 1. In order to establish a link between cytoadherence, IRBC surface antibody recognition and the presence or absence of malaria symptoms, we phenotype-selected four Amazonian P. falciparum isolates and the laboratory strain 3D7 for their cytoadherence to CD36 and ICAM1 expressed on CHO cells. We then mapped the dominantly expressed var transcripts and tested whether antibodies from symptomatic or asymptomatic infections showed a differential recognition of the IRBC surface. As controls, the 3D7 lineages expressing severe disease-associated phenotypes were used. We showed that there was no profound difference between the frequency and intensity of antibody recognition of the IRBC-exposed P. falciparum proteins in symptomatic vs. asymptomatic infections. The 3D7 lineages, which expressed severe malaria-associated phenotypes, were strongly recognised by most, but not all plasmas, meaning that the recognition of these phenotypes is frequent in asymptomatic carriers, but is not necessarily a prerequisite to staying free of symptoms. .
Descritores: Anticorpos Antiprotozoários/imunologia
/imunologia
ANTIGENS, CDABATTOIRSABDOMEN, ACUTE/imunologia
Eritrócitos/parasitologia
Malária Falciparum/imunologia
Plasmodium falciparum/imunologia
Proteínas de Protozoários/imunologia
-Infecções Assintomáticas
Células CHO
Cricetulus
Adesão Celular/genética
Adesão Celular/imunologia
Eritrócitos/imunologia
Citometria de Fluxo
Perfilação da Expressão Gênica
Malária Falciparum/parasitologia
Proteínas de Protozoários/genética
Reação em Cadeia da Polimerase Via Transcriptase Reversa
Limites: Animais
Humanos
Tipo de Publ: Research Support, Non-U.S. Gov't
Responsável: BR1.1 - BIREME


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Texto completo SciELO Brasil
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Id: lil-685492
Autor: Memorias do Instituto Oswaldo Cruz; Sigle, Leah Theresa; Ramalho-Ortigao, Marcelo.
Título: Kazal-type serine proteinase inhibitors in the midgut of Phlebotomus papatasi
Fonte: Mem. Inst. Oswaldo Cruz;108(6):671-678, set. 2013. tab, graf.
Idioma: en.
Projeto: NIAID.
Resumo: Sandflies (Diptera: Psychodidae) are important disease vectors of parasites of the genus Leishmania, as well as bacteria and viruses. Following studies of the midgut transcriptome of Phlebotomus papatasi, the principal vector of Leishmania major, two non-classical Kazal-type serine proteinase inhibitors were identified (PpKzl1 and PpKzl2). Analyses of expression profiles indicated that PpKzl1 and PpKzl2 transcripts are both regulated by blood-feeding in the midgut of P. papatasi and are also expressed in males, larva and pupa. We expressed a recombinant PpKzl2 in a mammalian expression system (CHO-S free style cells) that was applied to in vitro studies to assess serine proteinase inhibition. Recombinant PpKzl2 inhibited α-chymotrypsin to 9.4% residual activity and also inhibited α-thrombin and trypsin to 33.5% and 63.9% residual activity, suggesting that native PpKzl2 is an active serine proteinase inhibitor and likely involved in regulating digestive enzymes in the midgut. Early stages of Leishmania are susceptible to killing by digestive proteinases in the sandfly midgut. Thus, characterising serine proteinase inhibitors may provide new targets and strategies to prevent transmission of Leishmania.
Descritores: Trato Gastrointestinal/enzimologia
Insetos Vetores/parasitologia
Phlebotomus/enzimologia
Inibidores de Serino Proteinase/isolamento & purificação
-Células CHO
Cricetulus
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Id: lil-662200
Autor: Vergara, Mauricio; Becerra, Silvana; Díaz-Barrera, Alvaro; Berrios, Julio; Altamirano, Claudia.
Título: Simultaneous environmental manipulations in semi-perfusion cultures of CHO cells producing rh-tPA
Fonte: Electron. j. biotechnol;15(6):2-2, Nov. 2012. ilus, tab.
Idioma: en.
Projeto: FONDECYT; . PUCV.
Resumo: We evaluated the combined effect of decreasing the temperature to a mild hypothermia range (34 and 31ºC) and switching to a slowly metabolizable carbon source (glucose substituted by galactose) on the growth and production of a recombinant human tissue plasminogen activator (rh-tPA) by Chinese hamster ovary cells in batch and semi-perfusion cultures. In batch cultures using glucose as a carbon source, decreasing the temperature caused a reduction in cell growth and an increase in specific productivity of rh-tPA of 32 percent at 34ºC and 55 percent at 31ºC, compared to cultures at 37ºC. Similar behaviour was observed in cultures at 34ºC using galactose as a carbon source. Nonetheless, at 31ºC, the specific productivity of rh-tPA strongly decreased (about 58 percent) compared to the culture at 37ºC. In semi-perfusion culture, the highest rh-tPA specific productivity was obtained at 34ºC. Similarly, whether a decrease in the temperature is accompanied of the replacement of glucose by galactose, the rh-tPA specific productivity improved about 112 percent over that obtained in semi-perfusion culture carried out at 37ºC with glucose as the carbon source. A semi-perfusion culture strategy was implemented based on the combined effect of the chosen carbon source and low temperatures, which was a useful approach for enhance the specific productivity of the recombinant protein.
Descritores: Células CHO
Temperatura Baixa
Galactose
Ácido Glutâmico
Ativador de Plasminogênio Tecidual
-Técnicas de Cultura de Células
Temperatura
Responsável: CL1.1 - Biblioteca Central



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