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Id: biblio-911845
Autor: Armesto, Cecilia; Maia, Fernanda Gonçalves Martins; Abreu, Mário Sobral de; Reis, Antônia Figueira dos; Alencar, Nara Edreira.
Título: Produção e regeneração de protoplastos de Colletotrichum gloeosporioides em diferentes condições de cultivo / Production and regeneration of protoplasts from Colletotrichum gloeosporioides in different conditions
Fonte: Biosci. j. (Online);27(4):597-602, july./aug. 2011. tab.
Idioma: pt.
Resumo: A obtenção de protoplastos de fungos, utilizando-se enzimas degradadoras de parede celular, tem sido o método mais utilizado em processos de transformação genética. Foram testados dois tipos de estruturas fúngicas (micélio e conídios), diferentes concentrações enzimáticas (5, 10, 20 mg), estabilizadores osmóticos (NaCl 0,7 mol.L-1 pH 5,7; (NH4)2SO4 1,2 mol.L-1 pH 5,8; KCl 0,7 mol.L-1 pH 5,8; MgSO4 0,7 mol.L-1 pH 5,5; Sacarose 0,5 mol.L-1 pH 5,7; SorbitoL 0,6 mol.L-1 pH 5,7) e seis tempos de exposição dos protoplastos ao sistema lítico, para estabelecer condições otimizadas de obtenção e regeneração de protoplastos de Colletotrichum gloeosporioides, agente relacionado a mancha manteigosa em cafeeiros. Protoplastos de C. gloeosporiodes foram obtidos em maior quantidade quando o micélio foi exposto durante 4 horas, com 10 mg.mL-1 de Lysing Enzime em KCl 0,7 mol.L-1 que se apresentou como melhor estabilizador osmótico, com frequência de regeneração de 11,64%.

The isolation and regeneration of protoplasts from fungal cells, using several cell wall degrading enzymes, has been the most common method to prepare competent cells for genetic studies of filamentous fungi. In this work two types of fungal structures, different enzyme concentrations (5, 10, 20 mg), osmotic stabilizers (NaCl 0,7 mol.L-1 pH 5,7; (NH4)2SO4 1,2 mol.L-1 pH 5,8; KCl 0,7 mol.L-1 pH 5,8; MgSO4 0,7 mol.L-1 pH 5,5; Sacarose 0,5 mol.L-1 pH 5,7; Sorbitol 0,6 mol.L-1 pH 5,7), and six exposure times to establish optimum conditions of isolation and regeneration of protoplasts of Colletotrichum gloeosporioides, agent of blister spot on coffee, were tested. Protoplast of C. gloeosporioides were obtained in greater quantities when the mycelium was exposed for 5 hours with 15mg.mL-1 of Lysing Enzyme in 0.7 mol.L -1 of KCl as osmotic stabilizer, presenting a regeneration rate of 11.64%.
Descritores: Cultivos Agrícolas
Fungos
Melhoramento Vegetal
Protoplastos
Responsável: BR396.4


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Id: lil-567086
Autor: Takahashi, Megumu; Uji, Toshiki; Saga, Naotsune; Mikami, Koji.
Título: Isolation and regeneration of transiently transformed protoplasts from gametophytic blades of the marine red alga Porphyra yezoensis
Fonte: Electron. j. biotechnol;13(2):8-9, Mar. 2010. ilus, tab.
Idioma: en.
Projeto: Grants-in-Aid for Scientific Research. Knowledge Cluster Initiative.
Resumo: Despite the recent progress of transient gene expression systems in a red alga Porphyra yezoensis by particle bombardment, a stable transformation system has yet to establish in any marine red macrophytes. One of the reasons of the difficulty in genetic transformation in red algae is the lack of systems to select and isolate transformed cells from gametophytic blades. Thus, toward the establishment of the stable transformation system in P. yezoensis, we have developed a procedure by which transiently transformed gametophytic cells were prepared from particle bombarded-gametophytic blade as regeneratable protoplasts. Using mixture of marine bacterial enzymes, yield of protoplasts was high as reported elsewhere; however, these protoplasts did not develop. In contrast, protoplasts prepared from gametophytes treated with allantoin were normally developed, in which the overexpression of a â-glucuronidase reporter gene had no effect on the regeneration of protoplasts. Therefore, the use of allantoin in protoplast preparation sheds a new light on the realization of an efficient isolation and selection of study transformed cells from gametophytic blades.
Descritores: Alantoína/fisiologia
Expressão Gênica
Células Germinativas
Folhas de Planta/genética
Porphyra/genética
Protoplastos/fisiologia
Responsável: CL1.1 - Biblioteca Central


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Id: lil-531759
Autor: Hayat, Sikandar; Christias, Christos.
Título: Isolation and fusion of protoplasts from the phytopathogenic fungus Sclerotium rolfsii (Sacc. )
Fonte: Braz. j. microbiol;41(1):253-263, Jan.-Mar. 2010. ilus, graf.
Idioma: en.
Resumo: Sclerotium rolfsii (Sacc.) is a serious plant pathogenic fungus and lacks perfect (basidial) stage in production. Protoplast fusion technology was employed to reconstruct fusants from this fungus. Two strains designated as A and R were used. Maximum protoplast yields of 3.8x10(5) /g mycelia and 2.8x10(5) /g mycelia were formed in strains A and R respectively. Osmotic stabilizer sucrose 1M gave maximum yield. Lysing enzyme at the rate of 15mg/ml was found best for yield. Fusion of protoplasts from strains A and R was carried out in fusion media containing PEG 4000 30 percent (w/v) with 0.2mM CaCl2. Four fusants F1, F2, F3 and F4 were recovered. Morphological, physiological and pathogenic characters of fusants were compared with parent strains on carrots, beans and tomato.
Descritores: Ascomicetos/enzimologia
Basidiomycota/genética
Estabilidade Enzimática
Fusão Gênica
Protoplastos/enzimologia
-Amostras de Alimentos
Métodos
Técnicas
Virulência
Tipo de Publ: Estudo Comparativo
Responsável: BR32.1 - Serviço de Biblioteca e Informação Biomédica


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Id: lil-528176
Autor: Rattanachaikunsopon, Pongsak; Phumkhachorn, Parichat.
Título: Glass bead transformation method for gram-positive bacteria
Fonte: Braz. j. microbiol;40(4):923-926, Oct.-Dec. 2009. graf, tab.
Idioma: en.
Resumo: A simple, inexpensive and reproducible transformation method was developed for Gram-positive bacteria. It was based on agitation of bacterial protoplasts with glass beads in the presence of DNA and polyethylene glycol. By using this method, introduction of pGK12 into protoplasts of several strains of Gram-positive bacteria was achieved.
Descritores: Bactérias Gram-Positivas/genética
Genética Microbiana
Protoplastos
Transformação Bacteriana
Vidro/análise
-Métodos
Técnicas
Tipo de Publ: Relatório Técnico
Responsável: BR32.1 - Serviço de Biblioteca e Informação Biomédica


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Araujo, Elza Fernandes de
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Id: lil-449366
Autor: Varavallo, Maurilio Antonio; Queiroz, Marisa Vieira de; Lana, Taís Guimarães; Brito, Admilson Toscano Ribeiro de; Gonçalves, Daniel Bonoto; Araújo, Elza Fernandes de.
Título: Isolation of recombinant strains with enhanced pectinase production by protoplast fusion between Penicillium expansum and Penicillium griseoroseum
Fonte: Braz. j. microbiol;38(1):52-57, Jan.-Mar. 2007. tab.
Idioma: en.
Resumo: Protoplast fusion between complementary auxotrophic and morphological mutant strains of Penicillium griseoroseum and P. expansum was induced by polyethylene glycol and calcium ions (Ca2+). Fusant strains were obtained in minimal medium and a prototrophic strain, possibly diploid, was chosen for haplodization with the fungicide benomyl. Different recombinant strains were isolated and characterized for occurrence of auxotrophic mutations and pectinolytic enzyme production. The fusant prototrophic did not present higher pectinase production than the parental strains, but among 29 recombinants analyzed, four presented enhanced enzyme activities. The recombinant RGE27, which possesses the same auxotrophic and morphologic mutations as the P. griseoroseum parental strain, presented a considerable increase in polygalacturonase (3-fold) and pectin lyase production (1.2-fold).

Fusões de protoplastos entre linhagens mutantes auxotróficas e morfológicas complementares de Penicillium griseoroseum e P. expansum foram induzidas por polietilenoglicol e íons cálcio (Ca2+). Fusionantes foram obtidos em meio mínimo e uma linhagem prototrófica, possivelmente diplóide, foi selecionada para a haploidização com o fungicida benomil. Diferentes linhagens recombinantes foram isoladas e caracterizadas quanto à presença de mutações auxotróficas e a produção de enzimas pectinolíticas. O fusionante prototrófico não apresentou maior atividade de pectinases em relação às linhagens parentais, entretanto, entre 29 recombinantes analisados, quatro apresentaram maiores atividades enzimáticas. O recombinante RGE27, o qual possui as mesmas mutações auxotróficas e morfológicas que a linhagem parental de P. griseoroseum, apresentou um aumento considerável na produção de poligalacturonase (3 vezes) e de pectina liase (1,2 vezes).
Descritores: Técnicas In Vitro
Penicillium
Poligalacturonase
Protoplastos
Recombinação Genética
-Linhagem Celular
Meios de Cultura
Métodos
Tipo de Publ: Estudo Comparativo
Revisão
Responsável: BR32.1 - Serviço de Biblioteca e Informação Biomédica


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Id: lil-410889
Autor: Lopes, Francis J F; Araújo, Elza F de; Queiroz, Marisa V de.
Título: Easy detection of green fluorescent protein multicopy transformants in Penicillium griseoroseum
Fonte: Genet. mol. res. (Online);3(4):449-455, 2004. ilus, tab.
Idioma: en.
Resumo: Penicillium griseoroseum, a deuteromycete fungus producer of pectinolytic enzymes, was transformed with a gene encoding for green fluorescent protein (GFP). The selection of transformants was based on the homologous nitrate reductase gene (niaD). Protoplasts of a P. griseoroseum Nia mutant (PG63) were co-transformed with the plasmids pNPG1 and pAN52-1-GFP. The plasmid pNPG-1 carries the homologous niaD gene and pAN52-1-GFP carries the SGFP-TYG version of GFP. The highest transformation efficiency (102 transformants/µg of pNPG1) resulted from the utilization of equimolar amounts of transforming and co-transforming vectors. Analysis of pAN52-1-GFP insertions into the genomic DNA of the transformants revealed single and multiple copy integrations. The transformants possessing a single copy of the gfp gene showed a low level of fluorescence, whereas multicopy transformants displayed strong fluorescence under visualization with fluorescent light. The transformants showing high expression of the gfp gene had the normal mycelia pigmentation altered, displaying a bright green-yellowish color, visible with the naked eye on the plates, without the aid of any kind of fluorescent light or special filter set.
Descritores: DNA Fúngico/genética
Genoma Fúngico
Proteínas Luminescentes/genética
Mutação
Penicillium/genética
Transformação Genética/genética
-Proteínas Luminescentes/análise
Microscopia de Fluorescência
Penicillium/enzimologia
Plasmídeos/genética
Poligalacturonase/genética
Protoplastos/enzimologia
Tipo de Publ: Research Support, Non-U.S. Gov't
Responsável: BR1.1 - BIREME


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Texto completo SciELO Brasil
Campos-Takaki, Galba Maria de
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Id: lil-342099
Autor: Carneiro-da-Cunha, Maria das Graças; Lima Filho, José Luiz de; Campos-Takaki, Galba Maria de.
Título: Protoplast formation and regeneration from Streptomyces clavuligerus NRRL 3585 and clavulanic acid production
Fonte: Braz. j. microbiol;33(4):347-351, Oct.-Dec. 2002. ilus, tab, graf.
Idioma: en.
Resumo: Protoplasts of the wild type Streptomyces clavuligerus NRRL 3585 (ATCC 27064) were formed from spores cultures obtained in the lag, exponential and stationary growth phases by using 0.5 percent glycine in the culture medium. The protoplasts were obtained by treatment of the cells with lysozyme (Ec û3.2.1.17) 40,000 U (1mg/ml), in an osmotic solution for 90 min at 28oC. The frequency of regenerated protoplasts in the lag phase was 1.7x103 CFU/ml (28,97 percent), in the beginning of the exponential phase 0.4x102 CFU/ml (31.67 percent), in the exponential growth phase 2.5x103 CFU/ml (46.30 percent) and 1.0x105 CFU/ml in stationary phase (48.45 percent). Antibiotic production and activity of regenerated protoplasts were observed in all phases, except in the lag phase. The protoplast formation and regeneration techniques resulted in a new isolate strain of Streptomyces clavuligerus that produced approximately 2.5 fold more clavulanic acid.
Descritores: Ácido Clavulânico/análise
Ácido Clavulânico/isolamento & purificação
Técnicas In Vitro
Protoplastos
Streptomyces
-Meios de Cultura
Métodos
Tipo de Publ: Revisão de Integridade Científica
Responsável: BR32.1 - Serviço de Biblioteca e Informação Biomédica


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Texto completo SciELO Brasil
Alves, A. C
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Id: lil-324990
Autor: Quecini, V. M; Oliveira, C. A. de; Alves, A. C; Vieira, M. L. C.
Título: Factors influencing electroporation-mediated gene transfer to Stylosanthes guianensis (Aubl.) Sw. protoplasts
Fonte: Genet. mol. biol;25(1):73-80, 2002. ilus.
Idioma: en.
Resumo: In order to develop a high-efficiency and reproducible transformation protocol for Stylosanthes guianensis we assessed the biological and physical parameters affecting plant electroporation protoplasts. Energy input, as combinations of electric field strengths discharged by different capacitors, electroporation buffer and DNA form were evaluated. Transformation efficiency was assayed in vivo as transient reporter gene expression, using the GFP-coding gene mgfp5 driven by a CaMV 35S constitutive promoter. Energy input and electric field strength had a critical influence on transgene expression with higher transformation levels being achieved with 250 V.cm-1 discharged by 900 and 1000 muF capacitors. Linear plasmid DNA, the absence of chloride and the presence of calcium ions also increased transient gene expression, albeit not significantly
Descritores: Eletroporação
Técnicas de Transferência de Genes
-Plantas Geneticamente Modificadas
Protoplastos
Responsável: BR26.1 - Biblioteca Central


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Id: lil-173460
Autor: Hermosilla, Germán; León, Rubén; Martínez, Claudio; Cifuentes, Victor.
Título: Formación y regeneración de protoplastos de phaffia rhodozyma / Formation and regeneration of phaffia rhodozyma protoplasts
Fonte: Bol. micol;10(1/2):71-5, jul.-dic. 1995. ilus, tab.
Idioma: es.
Resumo: En este trabajo se describe la preparación y regeneración de protoplastos a partir de cultivos frescos de la levadura carotenogénica phaffia rhodozyma, en forma eficiente y con un alto grado de rendimiento en la sobrevida de las células tratadas. Para ello se han realizado una serie de experimentos para formar protoplastos de p.rhodozyma, utilizando tres cepas silvestres y cinco cepas afectadas en carotenogénesis. Se probó las enzimas bioglucanasa, biocelulasa, bioxilanasa, glucoronidasa, zimoliasa 100T, lisozima y novozima 234, encontrándose que novozima 234, es la que tiene mayor eficiencia. En las cepas silvestres UCD 67-210 y UCD 67-385 y las cinco cepas de color, se logra un 100 porciento de protoplastos entre 60 a 90 minutos de tratamiento con novozima a 37ºC. Sin embargo, no fue posible formar protoplastos en ninguna de las condiciones estudiadas con las cepas silvestres UCD 67-383. Tales resultados pueden ser devidos a diferencias en la pared celular entre dichas cepas. Además, se ha observado que la incubación a 37ºC reduce notablemente la sobrevida de las células tratadas. Para la formación y regeneración de protoplastos se utilizó una serie de condiciones, encontrando que un sorbitol 0.2 M la destrucción de las células es menor que a concentraciones de sorbitol 0.8 y 1 M. Sin embargo, el medio más adecuado para la formación y regeneración de los protoplastos debe contener KC1 0.8 M como agente osmolar, manteniendo la isotonía del medio y logrando que la destrucción celular sea menor
Descritores: Técnicas In Vitro
Protoplastos/fisiologia
Leveduras/fisiologia
-Basidiomycota/fisiologia
Meios de Cultura/análise
Responsável: CL2.1 - Biblioteca de Medicina


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Id: lil-167819
Autor: Prakash, Anil.
Título: Studies on isolation and regeneration of protoplast of thermophilic fungus Malbranchea Pulchella VAR. sulfurea
Fonte: Rev. ciênc. bioméd. (Säo Paulo);14:97-108, 1993-1994. tab, ilus.
Idioma: en.
Resumo: Protoplastos esféricos osmoticamente sensíveis foram isolados de micélio do fungo termofílico Malbranchea pulchella var. sulfurea pela açäo de enzima extracelular (Novozym 234) sobre a parede das células. Estäo descritas as condiçöes para obtençäo de protoplastos estáveis a partir do micélio. O uso de KCL 0,6M como estabilizador osmótico permitiu a liberaçäo do número máximo de protoplastos. A maior parte dos protoplastos foram liberados a partir de micélios cultivados por 96 - 148 h, embora micélios mais jovens liberassem protoplastos mais estáveis e maiores em tamanho. Determinou-se, também, a açäo da enzima sobre a superfície do micélio. O número máximo de protoplastos foi observado em pH 5,5. Estudaram-se também as condiçöes requeridas para a regeneraçäo dos protoplastos
Descritores: Enzimas/farmacologia
Fungos/citologia
Protoplastos/metabolismo
-Fungos/isolamento & purificação
Responsável: BR33.1 - Divisão Técnica de Biblioteca e Documentação



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