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Id: biblio-1132219
Autor: Rudnik, Loanda Aparecida Cabral; Lyra, Amanda Martinez; Barboza, Fernanda Malaquias; Klein, Traudi; Kanunfre, Carla Cristine; Farago, Paulo Vitor; Zanin, Sandra Maria Warumby; Nadal, Jessica Mendes.
Título: PEG-PCL Nanocapsules Containing Curcumin: Validation of HPLC Method for Analyzing Drug-loading Efficiency, Stability Testing and Cytotoxicity on NIH-3T3 Cell Line
Fonte: Braz. arch. biol. technol;63:e20200234, 2020. tab, graf.
Idioma: en.
Projeto: Conselho Nacional de Pesquisa e Desenvolvimento.
Resumo: Abstract Curcumin (CUR) shows potential use for treating cancer. However, CUR has low solubility and reduced bioavailability, which limit its clinical effect. Therefore, the development of nanocarriers can overcome these problems and can ensure the desired pharmacological effect. In addition, it is mandatory to prove the quality, the efficacy, and the safety for a novel nanomedicine to be approved. In that sense, this paper aimed (a) to prepare CUR-loaded polyethylene glycol-poly(ε-caprolactone) nanocapsules; (b) to validate an analytical method by high performance liquid chromatography (HPLC) for quantifying CUR in these nanoformulations; (c) to evaluate the physicochemical stability of these formulations; and to investigate their cytotoxicity on NIH-3T3 mouse fibroblast cells. The HPLC method was specific to CUR in the loaded nanocapsules, linear (r = 0.9994) in a range of 10.0 to 90.0 µg.mL-1 with limits of detection and quantification of 0.160 and 0.480 µg.mL-1, respectively. Precision was demonstrated by a relative standard deviation lower than 5%. Suitable accuracy (102.37 ± 0.92%) was obtained. Values of pH, particle size, polydispersity index, and zeta potential presented no statistical difference (p > 0.05) for CUR-loaded nanoparticles. No cytotoxicity was observed against NIH-3T3 mouse embryo fibroblast cell line using both the tetrazolium salt and sulforhodamine B assays. In conclusion, a simple and inexpensive HPLC method was validated for the CUR quantification in the suspensions of nanocapsules. The obtained polymeric nanocapsules containing CUR showed suitable results for all the performed assays and can be further investigated as a feasible novel approach for cancer treatment.
Descritores: Curcumina/farmacologia
Células-Tronco Embrionárias/efeitos dos fármacos
Fibroblastos/efeitos dos fármacos
-Cromatografia Líquida de Alta Pressão
Testes de Toxicidade
Nanotecnologia
Células NIH 3T3
Embrião de Mamíferos/citologia
Nanocápsulas
Limites: Animais
Camundongos
Responsável: BR1.1 - BIREME


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Id: lil-712480
Autor: Bosch Barrera, Joaquim; Vidal Bota, Joan.
Título: No maleficenciaee investigación con células madre embrionarias / Non-maleficiencies in research with embryonic stem cells
Fonte: Pers. bioet;11(1):64-70, Jan.-June 2007.
Idioma: es.
Resumo: La investigación con células madre embrionarias genera un debate ético sobre su obtención. Se han propuesto distintos métodos que intentan salvar este conflicto, como son la obtención de una única célula embrionaria, la transferencia nuclear alterada, el uso de embriones detenidos y la reprogramación celular. En este artículo se reflexiona sobre la valoración ética de estas nuevas técnicas y otros aspectos atinentes a la investigación con células madre embrionarias en relación con el principio de no maleficencia.

Research with embryonic stem cells generates a debate about its source. Different methods have been developed to save the conflict: obtaining a unique embryonic cell or using either altered nuclear transfer or arrested embryos, and cellular reprogramming. We are trying in this article to evaluate these new techniques as well as other aspects related to research with embryonic stem cells, starting from the "not to harm" principle.

A pesquisa com células-mães embrionárias origina um debate ético por sua obtenção. Para resolver este conflito, têm sido propostos diversos métodos: a obtenção duma única célula embrionária, a transferência nuclear alterada, o uso dos embriões detidos e a re-programação celular. Neste artigo reflexionamos sobre a valoração ética destas novas técnicas e outros aspectos relacionados com a pesquisa com células-mães embrionárias, vinculada com o princípio da maleficência.
Descritores: Oócitos
Medicina Regenerativa
Ética
Células-Tronco Embrionárias
Reprogramação Celular
Limites: Humanos
Tipo de Publ: Artigo Clássico
Responsável: CO243.1 - Biblioteca Octavio Arizmendi Posada


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Id: lil-680487
Autor: Gamboa-Bernal, Gilberto A.
Título: Células madre ebbrionarias y técnicas de reproducción asistida: mucho menos que biotecnología / Emryonic stem ceells and assited reproductive technology: much less than biotechnology / Células-mãe mbriionárias e técnicas de reprodução assistida: muito menos que biotecnologia
Fonte: Pers. bioet;17(1):5-11, jun. 2013.
Idioma: es.
Descritores: Pesquisa
Bioética
Biotecnologia
Técnicas Reprodutivas
Células-Tronco Embrionárias
Limites: Humanos
Tipo de Publ: Editorial
Responsável: CO243.1 - Biblioteca Octavio Arizmendi Posada


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Id: lil-539367
Autor: Arias Stella, Javier.
Título: Obama y la investigación en células madre embrionarias humanas / Obama and research in human embryonic stem cells
Fonte: Acta méd. peru;26(2):135-136, abr.-jul. 2009.
Idioma: es.
Resumo: El increíble avance científico ha permitido el desarrollo de tecnologías de fertilización por transferencia nuclear de células somáticas. Gracias a estos adelantos ha sido posible desarrollar el conocimiento sobre las células embrionarias, el mantenimiento de su pluripotencialidad y la existencia de bancos de células con fines terapéuticos. Sin embargo, la manipulación de células embrionarias no ha estado exenta de una ardua discusión científica, ética y política en base a los temores que genera el poder manejar a voluntad la maquinaria genética totipotente de una célula madre indiferenciada. En las últimas elecciones presidenciales de los Estados Unidos de Norteamérica, el entonces candidato Obama y ahora presidente prometió impulsar nuevamente la investigación en este campo. Esta promesa abre la esperanza para muchos que esperan opciones terapéuticas hoy imposibles.

The most recent and astonishing scientific advances have allowed the development of fertilization techniques based on the somatic cell nuclear transfer method. Thanks to this, it has been possible to widen knowledge about embryo cells, maintaining their pluripotentiality and now there are some cell banks available for therapeutic purposes. However, embryo cell manipulation has been the subject of many discussion from the scientific, ethics, and politics point of view, because of many fears generated by the likelihood of manipulating the genetic machinery of a non-differentiated totipotent stem cell. In the last Presidential Elections in the USA, Mr. Barack Obama proimised to strengthen research in this promising field. This promise opens the way for many patients that are awaiing for therapy options that nowadays still are not possible.
Descritores: Células-Tronco
Células-Tronco Embrionárias
Pesquisa
Limites: Humanos
Responsável: PE1.1 - Oficina Universitária de Biblioteca


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Id: lil-530948
Autor: Rezende, Samyra Salim Moreira; Rezende, Adymila Salim Moreira.
Título: Células tronco embrionárias: relevâncias bioéticas e jurídicas / Embryonic stem cells: bioethics and juridical prominences
Fonte: HU rev;35(1):53-58, jan.-mar. 2009.
Idioma: pt.
Resumo: O Direito à vida, proteção contida na Constituição Federal, deve ser amplamente respeitado, independente de opiniões divergentes a respeito de seu marco inicial. Nunca se deve olvidar de que a vida é o maior bem que nos cerca. Considerando essa prerrogativa e frente ao avanço científico evidente e irremediável, o caminho viável foi o da regulamentação séria da pesquisa com embriões, para que a procura por tratamentos tão esperados e prometidos pelos cientistas seja realizada efetivamente e os seus resultados oferecidos a todos aqueles que desejam e necessitam de tais inovações. Contudo, é inegável o impacto desta pesquisa num contexto social que abrange crenças diversas e posicionamentos conflitantes. E, sendo a técnica de manipulação de embriões uma inovação, traz consigo todas as dúvidas e esperanças inerentes àquilo que é novo. Sendo assim, diante de questões tão controversas como a utilização de embriões humanos, a bioética é o instrumento apto a balizar a ciência e as condutas provenientes das pesquisas com células tronco. Nortear questões, repensando constantemente as práticas científicas, reformulando os modelos pertencentes não só à ciência, mas à sociedade é indispensável para a sobrevivência da prática de manipulação de embriões. É necessário promover a valorização da dignidade da pessoa humana, em respeito à Constituição, sendo a bioética um fundamental instrumento para que se atinja este objetivo.

The right to life, granted in the federal constitution, must be thoroughly respected, regardless of diverging opinions concerning its initial milestone. It must not be forgotten that life is the greatest good we have. Because scientific breakthroughs have promised to meet long-nurtured treatment expectations, it is only fair that embryonic research becomes the subject of serious legislation. Yet, it cannot be denied that such practices suffer influence from conflicting beliefs and platforms. Being an innovation, embryonic manipulation is both, fraught with doubts and full of hope. The situation calls for bioethics as a tool to provide moral guidance for science and the applications from stem-cell research. Embryonic manipulation can only survive if issues are constantly addressed, not only through a scientific approach but also through a societal one. If the federal constitution is to be obeyed, human dignity must be valued. Bioethics is paramount for this goal to be reached.
Descritores: Células-Tronco Embrionárias
-Bioética
Valor da Vida
Jurisprudência
Limites: Humanos
Tipo de Publ: Relatos de Casos
Responsável: BR378.1 - Biblioteca Central


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Texto completo SciELO Brasil
Texto completo SciELO Saúde Pública
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Id: lil-513003
Autor: Diniz, Debora; Avelino, Daniel.
Título: Cenário internacional da pesquisa em células-tronco embrionárias / Escenario internacional de la pesquisa en células madre embrionarias / International perspective on embryonic stem cell research
Fonte: Rev. saúde pública = J. public health;43(3):541-547, maio-jun. 2009. tab.
Idioma: pt.
Projeto: Organização Mundial da Saúde no Brasil. Organização Pan-Americana da Saúde.
Resumo: OBJETIVO:Analisar comparativamente regulações governamentais entre países sobre pesquisa em células-tronco embrionárias. MÉTODOS:O estudo foi conduzido entre março e maio de 2008, por meio de busca eletrônica direta nas fontes oficiais sobre documentos legislativos de 25 países selecionados e confirmada, quando necessário, por consulta por e-mail a pesquisadores e autoridades desses países. RESULTADOS: Os resultados mostraram tendência a permitir a prática de pesquisas com células-tronco embrionárias, embora com rígidas restrições éticas. Dentre os países estudados, apenas Itália e Alemanha explicitamente condenam a extração de células-tronco e apenas Itália proíbe seu uso subseqüente. Decisões jurídicas brasileiras recentes são coerentes com o contexto regulatório internacional sobre pesquisa embrionária. CONCLUSÕES: A tendência observada representa a liberdade de pesquisa para a promoção do conhecimento como um bem público, reforçada pela expectativa de potencialidade terapêutica na pesquisa com células-tronco embrionárias para o tratamento e cura de doenças sem qualquer possibilidade de assistência médica.

OBJECTIVE:To comparatively analyze governmental regulations on embryonic stem cell research among countries. METHODS: The study was performed between March and May 2008, using a direct electronic search through official databases of legislative documents from 25 selected countries, confirmed by email consultation with researchers and authorities from these countries, when necessary. RESULTS: Results showed a trend to allow the practice of embryonic stem cell research, though with strict ethical restrictions. Among the countries analyzed, only Italy and Germany explicitly condemned the extraction of stem cells and only Italy prohibits their subsequent use. Recent judicial decisions in Brazil are in accordance with the international regulatory context of embryo research. CONCLUSIONS: The trend observed represents freedom of research to promote knowledge as a public good, emphasized by the expectation of therapeutic potentiality of embryonic stem cell research to treat and cure diseases without any medical care.

OBJETIVO: Analizar comparativamente regulaciones gubernamentales entre países sobre pesquisa en células madre embrionarias. MÉTODOS:El estudio fue conducido entre marzo y mayo de 2008, por medio de búsqueda electrónica directa en las fuentes oficiales sobre documentos legislativos de 25 países seleccionados y confirmada, cuando era necesario, por consulta por e-mail a investigadores y autoridades de esos países. RESULTADOS:Los resultados mostraron tendencia a permitir la práctica de pesquisas con células madre embrionarias, a pesar de que con rígidas restricciones éticas. Entre los países estudiados, apenas Italia y Alemania explícitamente condenan la extracción de células madre coherentes con el contexto regulatorio internacional sobre pesquisa embrionaria. CONCLUSIONES: La tendencia observada representa la libertad de pesquisa para la promoción del conocimiento como un bien público, reforzada por la expectativa de potencialidad terapéutica en la pesquisa con células madre embrionarias para el tratamiento y cura de enfermedades sin cualquier posibilidad de asistencia médica.
Descritores: Pesquisas com Embriões/legislação & jurisprudência
Células-Tronco Embrionárias
Internacionalidade
-Pesquisas com Embriões
Limites: Humanos
Tipo de Publ: Research Support, Non-U.S. Gov't
Estudo Comparativo
Responsável: BR1.1 - BIREME


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Barraviera, Benedito
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Id: biblio-894174
Autor: Mozafari, Roghayeh; Kyrylenko, Sergiy; Castro, Mateus Vidigal; Ferreira Jr, Rui Seabra; Barraviera, Benedito; Oliveira, Alexandre Leite Rodrigues.
Título: Combination of heterologous fibrin sealant and bioengineered human embryonic stem cells to improve regeneration following autogenous sciatic nerve grafting repair
Fonte: J. venom. anim. toxins incl. trop. dis;24:11, 2018. tab, graf, ilus.
Idioma: en.
Projeto: FAPESP; . CNPq.
Resumo: Peripheral nerve injury is a worldwide clinical problem, and the preferred surgical method for treating it is the end-to-end neurorrhaphy. When it is not possible due to a large nerve gap, autologous nerve grafting is used. However, these surgical techniques result in nerve regeneration at highly variable degrees. It is thus very important to seek complementary techniques to improve motor and sensory recovery. One promising approach could be cell therapy. Transplantation therapy with human embryonic stem cells (hESCs) is appealing because these cells are pluripotent and can differentiate into specialized cell types and have self-renewal ability. Therefore, the main objective of this study was to find conditions under which functional recovery is improved after sciatic nerve neurorrhaphy. We assumed that hESC, either alone or in combination with heterologous fibrin sealant scaffold, could be used to support regeneration in a mouse model of sciatic nerve injury and repair via autografting with end-to-end neurorrhaphy. Methods Five millimeters of the sciatic nerve of C57BL/6 J mice were transected off and rotated 180 degrees to simulate an injury, and then stumps were sutured. Next, we applied heterologous fibrin sealant and/or human embryonic stem cells genetically altered to overexpress fibroblast growth factor 2 (FGF2) at the site of the injury. The study was designed to include six experimental groups comprising neurorrhaphy (N), neurorrhaphy + heterologous fibrin sealant (N + F), neurorrhaphy + heterologous fibrin sealant + doxycycline (N + F + D), neurorrhaphy + heterologous fibrin sealant + wild-type hESC (N + F + W), neurorrhaphy + heterologous fibrin sealant + hESC off (N + F +T), and neurorrhaphy + heterologous fibrin sealant + hESC on via doxycycline (N + F + D + T). We evaluated the recovery rate using Catwalk and von Frey functional recovery tests, as well as immunohistochemistry analysis. Results The experiments indicated that sensory function improved when transgenic hESCs were used. The regeneration of sensory fibers indeed led to increased reflexes, upon stimulation of the paw ipsilateral to the lesion, as seen by von-Frey evaluation, which was supported by immunohistochemistry. Conclusions Overall, the present data demonstrated that transgenic embryonic stem cells, engineered to overexpress FGF-2 in an inducible fashion, could be employed to support regeneration aiming at the recovery of both motor and sensory functions.(AU)
Descritores: Nervo Isquiático/transplante
Transplante Heterólogo/reabilitação
Adesivo Tecidual de Fibrina
Células-Tronco Embrionárias
Regeneração Nervosa
-Camundongos Endogâmicos C57BL
Limites: Animais
Masculino
Ratos
Responsável: BR33.1 - Divisão Técnica de Biblioteca e Documentação


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Id: biblio-972954
Autor: Engelhardt Jr, H. Tristam.
Título: Common ground as battleground: the culturewars framing bioethics continue: Bioethics, the Culture Wars, and WesternChristianity: Assessing the Current Terrain / Pontos comuns como resultado do campo de batalha: guerras culturais e oenquadramento da bioética continuam: Bioética, as guerras de cultura e OcidentalCristianismo: Avaliar o terreno atual
Fonte: Mundo saúde (Impr.);39(4):[514-530], s.d.
Idioma: en.
Resumo: I. Bioethics, the Culture Wars, and WesternChristianity: Assessing the Current TerrainThere is no cultural peace. We are in aculture war defined by disagreements. Salientamong the disagreements are bioethical battlesabout abortion, human embryo stem-cellresearch, artificial insemination of unmarriedwomen, reproduction in marriage with the use ofdonor gametes, healthcare allocation, physicianassistedsuicide, and euthanasia, to name onlya few issues.

Bioética, as guerras de cultura e OcidentalCristianismo: Avaliar o terreno atualNão há paz cultural. Estamos em umaguerra da cultura definida por discordâncias. Salienteentre as discordâncias são batalhas bioéticassobre o aborto, embrião humano com células-troncopesquisa, inseminação artificial de solteiramulheres, a reprodução em casamento com o uso degametas de doadores, a alocação de cuidados de saúde, physicianassistedsuicídio e da eutanásia, para citar apenasalgumas questões.
Descritores: Bioética
Cristianismo
Cultura
Aborto
Células-Tronco Embrionárias
Inseminação Artificial
Princípios Morais
-Eutanásia
Suicídio
Princípios Morais
Limites: Humanos
Responsável: BR599.1 - Coordenação Geral de Documentação e Informação (CGDI)


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Id: biblio-847369
Autor: Glaser, Talita.
Título: Modulação da diferenciação neural de células troco embrionárias por transientes de cálcio intracelulares: papéis dos receptores purinérgicos e de canais de cálcio voltagem-dependentes / Modulation of neural embryonic stem cell differentiation by intracellular Ca2+ oscillations. Roles of purinergic receptors and voltage gated Ca2+ channels.
Fonte: São Paulo; s.n; 2015. 134 p. tab, graf, ilus.
Idioma: pt.
Tese: Apresentada a Universidade de São Paulo. Instituto de Química para obtenção do grau de Doutor.
Resumo: Receptores purinérgicos e canais de cálcio voltagem-dependentes estão envolvidos em diversos processos biológicos como na gastrulação, durante o desenvolvimento embrionário, e na diferenciação neural. Quando ativados, canais de cálcio voltagem-dependentes e receptores purinérgicos do tipo P2, ativados por nucleotídeos, desencadeiam transientes de cálcio intracelulares controlando diversos processos biológicos. Neste trabalho, nós estudamos a participação de canais de cálcio voltagem-dependentes e receptores do tipo P2 na geração de transientes de cálcio espontâneos e sua regulação na expressão de fatores de transcrição relacionados com a neurogênese utilizando como modelo células tronco (CTE) induzidas à diferenciação em células tronco neurais (NSC) com ácido retinóico. Descrevemos que CTE indiferenciadas podem ter a proliferação acelerada pela ativação de receptores P2X7, enquanto que a expressão e a atividade desse receptor precisam ser inibidas para o progresso da diferenciação em neuroblasto. Além disso, ao longo da diferenciação neural, por análise em tempo real dos níveis de cálcio intracelular livre identificamos 3 padrões de oscilações espontâneas de cálcio (onda, pico e unique), e mostramos que ondas e picos tiveram a frequência e amplitude aumentadas conforme o andamento da diferenciação. Células tratadas com o inibidor do receptor de inositol 1,4,5-trifosfato (IP3R), Xestospongin C, apresentaram picos mas não ondas, indicando que ondas dependem exclusivamente de cálcio oriundo do retículo endoplasmático pela ativação de IP3R. NSC de telencéfalo de embrião de camundongos transgênicos ou pré-diferenciadas de CTE tratadas com Bz-ATP, o agonista do receptor P2X7, e com 2SUTP, agonista de P2Y2 e P2Y4, aumentaram a frequência e a amplitude das oscilações espontâneas de cálcio do tipo pico. Dados, obtidos por microscopia de luminescência, da expressão em tempo real de gene repórter luciferase fusionado à Mash1 e Ngn2 revelou que a ativação dos receptores P2Y2/P2Y4 aumentou a expressão estável de Mash1 enquanto que ativação do receptor P2X7 levou ao aumento de Ngn2. Além disso, células na presença do quelante de cálcio extracelular (EGTA) ou do depletor dos estoques intracelulares de cálcio do retículo endoplasmático (thapsigargin) apresentaram redução na expressão de Mash1 e Ngn2, indicando que ambos são regulados pela sinalização de cálcio. A investigação dos canais de cálcio voltagem-dependentes demonstrou que o influxo de cálcio gerado por despolarização da membrana de NSC diferenciadas de CTE é decorrente da ativação de canais de cálcio voltagem-dependentes do tipo L. Além disso, esse influxo pode controlar o destino celular por estabilizar expressão de Mash1 e induzir a diferenciação neuronal por fosforilação e translocação do fator de transcrição CREB. Esses dados sugerem que os receptores P2X7, P2Y2, P2Y4 e canais de cálcio voltagem-dependentes do tipo L podem modular as oscilações espontâneas de cálcio durante a diferenciação neural e consequentemente alteram o padrão de expressão de Mash1 e Ngn2 favorecendo a decisão do destino celular neuronal

Purinergic receptors and voltage gated Ca2+ channels have been attributed with developmental functions including gastrulation and neural differentiation. Upon activation, nucleotide-activated P2 purinergic receptor and voltage-gated Ca2+ channel subtypes trigger intracellular calcium transients controlling cellular processes. Here, we studied the participation of voltage-gated calcium channels and P2 receptor activity in spontaneous calcium transients and consequent regulation expression of transcription factors related to retinoic acid-induced neurogenesis of mouse neural stem and embryonic stem cells (ESC). In embryonic pluripotent stem cells, proliferation is accelerated by P2X7 receptor activation, while receptor expression / activity needs to be down-regulated for the progress of neuroblast differentiation. Moreover, along neural differentiation time lapse imaging with means of a cytosolic calcium-sensitive fluorescent probe provided different patterns of spontaneous calcium transients (waves and spikes) showing that both, frequency and amplitude increased along differentiation. Cells treated with the inositol 1,4,5-trisphosphate receptor (IP3R) inhibitor Xestospongin C showed spikes but not waves, indicating that waves exclusively depended on calcium release from endoplasmic reticulum by IP3R activation. Cells treated with the P2X7 receptor subtype agonist Bz-ATP and the P2Y2 and P2Y4 receptor 2-S-UTP increased frequency and amplitudes of calcium transients, mainly spikes, in embryonic telencephalon neural stem cells (NSC) and NSC pre-differentiated from ESC. Data obtained by luminescence time lapse imaging of stable transfected cells with Mash1 or Ngn2 promoter-protein fusion to luciferase reporter construct revealed increased Mash1 expression due to activation of P2Y2/P2Y4 receptor subtypes, while increased expression of Ngn2 was observed following P2X7 receptor activation. In addition, cells imaged in presence of the extracellular calcium chelator EGTA or following endoplasmic reticulum calcium store depletion by thapsigargin showed a decrease in Mash1 and Ngn2 expression, indicating that both are regulated by calcium signaling. Investigation of the roles of voltage gated Ca2+ channels in neural differentiation showed that Ca2+ influx in NSC pre-differentiated from ESC is due to membrane depolarization and L-type voltage gated Ca2+ channel activation, thereby controlling cell fate decision, by stabilizing the expression of MASH1 and inducing differentiation, by phosphorylation of the transcription factor CREB. Altogether these data suggest that P2X7, P2Y2, P2Y4 receptors and L-type voltage gated Ca2+ channels can modulate spontaneous calcium oscillations during neural differentiation and consequently change the Mash1 and Ngn2 expression patterns, thus favoring the cell fate decision to the neuronal phenotype
Descritores: Células-Tronco Embrionárias/metabolismo
Proteínas Sensoras de Cálcio Intracelular
Fatores de Transcrição/análise
-Canais de Cálcio
Sinalização do Cálcio/fisiologia
Citofotometria/métodos
Microscopia de Fluorescência/métodos
Células-Tronco Neurais/fisiologia
Receptores Purinérgicos P2/análise
Receptores Purinérgicos/análise
Limites: Animais
Masculino
Feminino
Camundongos
Responsável: BR40.1 - DBD - Divisão de Biblioteca e Documentacão do Conjunto das Químicas
BR40.1; T574.87612, G548m. 30100025682-Q


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Id: biblio-847078
Autor: Bonatto, José Matheus Camargo.
Título: Caracterização da proteína quinase C Beta I nuclear em células tronco embrionárias / Characterization of protein kinase C beta I in embryonic stem cell nucleus.
Fonte: São Paulo; s.n; 2014. 181 p. tab, graf, ilus.
Idioma: pt.
Tese: Apresentada a Universidade de São Paulo. Instituto de Química para obtenção do grau de Doutor.
Resumo: As proteína quinases C (PKC) pertencem à família das serina/treonina quinases, que vem sendo apontadas como importantes enzimas para os processos de proliferação e diferenciação das células tronco embrionárias (CTE), todavia, a função exata de cada isoforma dessa família ainda não está clara. Dados anteriores do nosso laboratório indicam que dentre as PKCs expressas em CTE, formas cataliticamente ativas da PKCßI são altamente expressas no núcleo das CTE murinas. Estas ao se diferenciarem expressam essa quinase no seu citoplasma ou deixam de expressar a mesma, e que a maioria dos alvos da PKCßI em CTE indiferenciada estão envolvidos em processos de regulação da transcrição de proteínas envolvidas em processos de proliferação/ diferenciação. Dando continuidade aos resultados anteriores do laboratório, no presente trabalho, com técnicas de proteômica e fosfoproteômica identificamos outros alvos nucleares da PKCßI em CTE indiferenciadas. Vimos que de fato inibindo-se a PKCßI diminuiu-se a fostorilação de fatores envolvidos com a indiferenciação das CTE. Dentre os alvos da PKCßI encontramos a proteína adaptadora, TIF1 que recruta proteínas remodeladoras de cromatina. Essa proteína é essencial para a manutenção do estado indiferenciado das CTE. In vitro a PKCßI foi capaz de fosforilar a TIF1ß e inibindo-se a PKCßI por RNAi vimos uma diminuição na expressão da TIF1ß e no fator de indiferenciação Nanog cuja expressão já foi demonstrada ser regulada pela TIF1ß. Além disso vimos que inibindo-se a PKCßI com o peptídeo inibidor da PKCßI aumentou a expressão de proteínas reguladas pelo c-Myc. E que o RNAi para a PKCßI aumentou a expressão de proteínas que regulam a expressão do c-Myc. Não vimos nenhum efeito na fosforilação ou expressão do c-Myc após a inibição da PKCßI o que sugere que a PKCßI ative proteínas repressoras do c-Myc. Nossos estudos sugerem que a PKCßI regula a manutenção do estado indiferenciado das CTE regulando a expressão e atividade da Tif1ß um possível alvo direto da PKCßI. Levando a modificações da cromatina e regulação da expressão de genes que mantém as CTE indiferenciadas. Outro ponto de regulação da PKCßI parece ser a nibição da atividade de c-Myc o que seria importante para a manutenção do estado indiferenciado visto que o c-Myc é um amplificador das vias de sinalização que mantém as células proliferando. Desta forma a PKCßI parece ter um papel central na regulação da expressão gênica de CTE à nível de modificações epigenéticas e a nível transcricional mantendo as CTE indiferenciadas

The Protein kinase C (PKC) family of serine/treonine kinases, are being described as important enzymes for proliferation and diferentiation of embryonic stem cells (ESC), however, the exact function of the different isoenzymes of this family still is unclear. Previous data from our laboratory indicates that amongst the PKCs expressed in ESC, catalytically active forms of PKCßI are highly expressed in nucleus of murine ESC. When these cells differentiate this kinase can be found in the cytoplasm or not expressed at all, and that the majority of PKCßI targets in undifferentiated ESC are involved in the regulation of proteins involved in transcription of proteins involved in proliferation/ diferentiation. Continuing our previous work herewith using proteomics and phosphoproteomics techniques we identified other nuclear PKCßI targets in undifferentiated ESC. We indeed saw that inhibiting PKCßI decreased the phosphorylation of factors involved with maintainance of the undifferentiated state of ESC. Amongst the targets of PKCßI we found the adaptor protein, TIF1ßI, that recruits cromatin remodeling proteins. This protein is essential for the maintenance of the undifferentiated state of ESC. In vitro PKCßI phosphorylated TIF1ß and inhibiting PKCßI with RNAi decreased the expression of TIF1ß and of the undifferentiation factor Nanog whose expression has been shown to be regulated by TIF1ß. We also saw that inhibiting PKCßI with a peptide inhibitor increased the expression of proteins regulated by c-Myc, and that RNAi for PKCßI increased the expression of proteins that regulate the expression of c-Myc. We did not see any effect on the phosphorylation or expression of c-Myc after inhibition of PKCßI suggesting that PKCßI activates c-Myc repressor proteins. Our studies sugest that PKCßI regulates the maintenance of the undiferentiated state of ESC regulating the expression and activity of Tif1ß a possibly a direct target of PKCßI, leading to chromatin modifications and regulation of genes that maintain ESC undiferentiated. Another form of regulation of PKCßI seems to be by inhibiting the activity of c-Myc which is importante to maintain ESC undifferentiated since c-Myc is na an amplifyer of signaling patheways that maintain ESC proliferating. Together PKCßI has a central role in the regulation of the gene expression of ESC at the level of epigenetic modifications and transcriptional regulation
Descritores: Células-Tronco Embrionárias/citologia
Proteína Quinase C/metabolismo
-Diferenciação Celular
Cromatina/genética
Espectrometria de Massas/métodos
Fosforilação
Proteína Quinase C beta/análise
Proteômica/instrumentação
Proteínas Repressoras/genética
Substratos para Tratamento Biológico/classificação
Tipo de Publ: Técnicas In Vitro
Responsável: BR40.1 - DBD - Divisão de Biblioteca e Documentacão do Conjunto das Químicas
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