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Id: lil-177469
Autor: Tripodi, Valeria P; Vizioli, Nora M; Vescina, María C; Carducci, Clyde N.
Título: Optimización del análisis de ácidos biliares séricos por método enzimático fluorométrico / Improvement of an enzymatic fluorometric assay for serum bile acids
Fonte: Acta bioquím. clín. latinoam;30(2):103-9, jun. 1996. ilus, tab.
Idioma: es.
Resumo: Con el objeto de optimizar la determinación fluorométrica de los ácidos biliares séricos (ABS) en cuanto a selectividad y sensibilidad, se desarrolló una metodología de preparación de muestra y preconcentración utilizando columnas de extracción en fase sólida (SPE-C18). Previa desproteinización del suero con acetonitrilo frío, la fase orgánica evaporada y reconstituida con acetonitrilo: agua (3:70), se aplicó a una columna SPE-C18 y los ABS fueron eluidos con metanol. En el extractivo metanólico, evaporado a sequedad y reconstituido con metanol se dosaron los ABS por método enzimático fluorométrico empleando 3Ó-hidroxiesteroide deshidrogenasa, ß-NAD, diaforasa y resazurina. En la validación de la preparación de muestra se utilizó [24-14C] ácido glicocólico. La recuperación fue del 89,0 ñ 1,3 por ciento (SD), con DSR de 1,4 para n=9 (3 días). Se determinaron los ABS en sujetos controles, resultando un valor medio de 2,61 ñ 0,39 µM (SEM) (n=27). La metodología propuesta combina las siguientes ventajas: aumento de la selectividad del método enzimático, eliminación de interferencias y preconcentración de los ABS liberados, previamente, de la unión a proteínas plasmáticas
Descritores: 3-Hidroxiesteroide Desidrogenases
Acetonitrilos
Ácidos e Sais Biliares/isolamento & purificação
Calibragem/normas
Ensaios Enzimáticos Clínicos
Fluorometria
Ácido Glicoquenodesoxicólico
Metanol
-Ácidos e Sais Biliares/sangue
Ácidos e Sais Biliares
Ensaios Enzimáticos Clínicos/instrumentação
Doenças Biliares/diagnóstico
Fluorometria/instrumentação
Manejo de Espécimes/normas
Limites: Seres Humanos
Responsável: AR144.1 - CIBCHACO - Centro de Información Biomedica del Chaco



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