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Id: lil-736974
Autor: Chena, L; Nara, Eva; Sánchez, Zunilda; Espínola, Emilio; Russomando, Graciela.
Título: Estandarización de la técnica PCR-RFLP del gen mitocondrial cyt b como herramienta para la identificación de fuentes de alimentación de insectos hematófagos / Standardization of a PCR-RFLP technique based on RESUMEN mitochondrial cyt b gen as a tool to identify feeding sources of hematophagous insects
Fonte: Mem. Inst. Invest. Cienc. Salud (Impr.);12(2):33-42, dic. 2014. tab, ilus.
Idioma: es.
Resumo: La identificación de la fuente de alimentación de insectos hematófagos puede proporcionar información sobre la capacidad vectorial, patrones de alimentación en condiciones naturales y proveer indirectamente datos sobre probables reservorios de enfermedades. Varias técnicas de identificación son empleadas, entre ellas las más utilizadas son las basadas en reacciones antígeno-anticuerpo. Actualmente, se han desarrollado ensayos moleculares, algunos de ellos permiten detectar e identificar solo sangre humana. Otros como la reacción en cadena de la polimerasa (PCR) del gen mitocondrial citocromo b (cyt b), que ha mostrado alto grado de sensibilidad y especificidad, permite detectar e identificar otras especies de vertebrados. El objetivo del trabajo fue estandarizar la técnica PCR-RFLP del gen mitocondrial citocromo b (cyt b) para determinar la fuente de alimentación sanguínea de insectos. Inicialmente se realizó un análisis bioinformático para la búsqueda y alineamiento de secuencias del gen cyt b de los potenciales huéspedes, con secuencias que están disponible en el GenBank. Se utilizaron 10 muestras de sangre de potenciales huéspedes vertebrados (humano, perro, gallina y roedor) y para la reacción de PCR se empleó un par de cebadores universales que amplifican una región del gen cyt b, seguido de cortes con dos enzimas de restricción (RFLP) (Hae III y Mwo I), generando patrones de electroforesis específicos para los diferentes vertebrados. Se logró la estandarización de la técnica de PCR del gen cyt b que fue capaz de detectar ADN de al menos 1 μL de sangre observándose el producto de amplificación de 358 pb. El análisis de los patrones de bandas obtenidos con el corte de las enzimas mostró los tamaños de fragmentos esperados para humano, gallina, perro y roedor. Estos resultados muestran la utilidad de la técnica PCR-RFLP del gen cyt b que, con un simple par de cebadores seguido del corte con dos enzimas de restricción...

Identification of feeding sources of hematophagous insects can provide informationabout the vectorial capacity,feeding patternsin natural conditionsand indirectlyprovidedataon possible disease reservoirs preferences.Several identificationtechniquesare used,most of them based on antigen-antibody reactions.Recently molecular assayshave been developedand, some ofthese assayscandetect andidentificateonlyhuman blood. Otherassays,likethepolymerase chain reaction (PCR)basedonmitochondrialcytochromebgene,have shown high sensitivity and specificityallowingdetectionand identificationofothervertebrate species. The aim of this studywas tostandardizea PCR-RFLP basedonmitochondrialcytochrome bgene(cyt b) inorder to determineblood mealfrom insects.Initially bioinformatic analysiswasperformed forsearching andalignmentofcyt bsequencesofpotential hosts availableattheGenBankdatabase.Blood samplesfrom potentialvertebrate hostswere usedand PCR was performed using specificprimersthat amplify aregionofcyt bgene. Theproducts were digestedwithrestriction enzymes (RFLP),generating specificelectrophoresis patterns forseveral vertebrates. The PCR technique forcyt bgene wasstandardized allowing the detection of at least 1μLof blood.The 359 bp band wascorrectly amplified and the profiles obtained after the enzyme digestion withHaeIIIandMwoI were the expected for human, chicken, dog and rodents. These resultsshowed the usefulness of the PCR-RFLP ofcyt bgenethat,with a single pair of primersfollowed digestionusing two restriction enzymes,allowed the differentiationof thevertebrate species of our interestthrough the patterns obtained without sequencinghavingalso the advantage of detecting small volumesof blood sample.
Descritores: Citocromos b
Leishmaniose
Responsável: PY3.1 - Biblioteca


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Id: lil-782046
Autor: Pessoa, Grasielle Caldas D‘Ávila; Sousa, Tais Nóbrega de; Sonoda, Ivan Vieira; Diotaiuti, Liléia.
Título: Assessing the mitochondrial DNA diversity of the Chagas disease vector Triatoma sordida (Hemiptera: Reduviidae)
Fonte: Mem. Inst. Oswaldo Cruz;111(5):322-329, May 2016. tab, graf.
Idioma: en.
Resumo: Triatoma sordida is a species that transmits Trypanosoma cruzi to humans. In Brazil, T. sordida currently deserves special attention because of its wide distribution, tendency to invade domestic environments and vectorial competence. For the planning and execution of control protocols to be effective against Triatominae, they must consider its population structure. In this context, this study aimed to characterise the genetic variability of T. sordida populations collected in areas with persistent infestations from Minas Gerais, Brazil. Levels of genetic variation and population structure were determined in peridomestic T. sordida by sequencing a polymorphic region of the mitochondrial cytochrome b gene. Low nucleotide and haplotype diversity were observed for all 14 sampled areas; π values ranged from 0.002-0.006. Most obtained haplotypes occurred at low frequencies, and some were exclusive to only one of the studied populations. Interpopulation genetic diversity analysis revealed strong genetic structuring. Furthermore, the genetic variability of Brazilian populations is small compared to that of Argentinean and Bolivian specimens. The possible factors related to the reduced genetic variability and strong genetic structuring obtained for studied populations are discussed in this paper.
Descritores: Citocromos b/genética
DNA Mitocondrial/genética
Variação Genética/genética
Insetos Vetores/genética
Triatoma/genética
-Brasil
Doença de Chagas/transmissão
Insetos Vetores/classificação
Triatoma/classificação
Limites: Animais
Responsável: BR1.1 - BIREME


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Id: lil-774512
Autor: Silva-Neto, A. A.; Ferreira, P. B.; Torres, R. A.; Texeira, R. H. F.; Duarte, J. M. B.; Barbosa, A. C.; Vargas, R. C.; Garcia, J. E..
Título: Diagnostic Cytochrome b gene profiles for the identification of paca (Cuniculus paca) bushmeat: implications for the monitoring of illegal hunting and wildlife trade / Perfis diagnósticos do gene Citocromo b para a identificação molecular de paca (Cuniculus paca): implicações para a detecção e monitoramento de caça e comércio ilegal
Fonte: Braz. j. biol;76(1):55-58, Feb. 2016. graf.
Idioma: en.
Projeto: Fundação de Amparo à Ciência e Tecnologia do Estado de Pernambuco.
Resumo: Abstract Paca (Cuniculus paca Linnaeus, 1766) is the second largest rodent found in Brazil. The quality of the meat and a long tradition of hunting have contributed to the decline of the natural populations of this species. Hunting of paca is strictly prohibited in Brazil, but in spite of this restriction, no forensic tools are available for the identification of the meat. We describe an efficient method, based on single nucleotide polymorphisms of the cytochrome b gene, that can be used to differentiate biological material derived from paca from those of domestic species commonly used as sources of meat. The identification of the presence of C. paca in the samples was 100% reliable.

Resumo Paca (Cuniculus paca Linnaeus, 1766) é o segundo maior roedor brasileiro. A qualidade da carne e a forte tradição da caça de subsistência são fatores que contribuem significativamente para o declínio das populações. Apesar da proibição a caça no Brasil, no momento ainda não há ferramentas disponíveis para identificar a carne e seus produtos como prova forense. Neste trabalho propomos um método eficaz de identificação, baseado em polimorfismos de único nucleotídeo no gene Citocromo b, objetivando diferenciar material biológico de paca das espécies domésticas comumente utilizadas como alimento no Brasil. A identificação das amostras de paca foram possíveis em 100% das amostras analisadas.
Descritores: Conservação dos Recursos Naturais/métodos
Cuniculidae/genética
Citocromos b/análise
Carne/análise
-Sequência de Aminoácidos
Brasil
Cuniculidae/classificação
Carne/classificação
Alinhamento de Sequência
Limites: Animais
Responsável: BR1.1 - BIREME


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Id: lil-772863
Autor: Sales, Kamila Gaudêncio da Silva.
Título: PCR em tempo real para caracterização de fontes alimentares de flebotomíneos (Diptera: Psychodidae) / Real-time PCR for the characterization of feeding sources of sand flies (Diptera: Psychodidae).
Fonte: Recife; s.n; 2015. 66 p. ilus, graf, tab.
Idioma: pt.
Tese: Apresentada a Centro de Pesquisas Aggeu Magalhães para obtenção do grau de Mestre.
Resumo: Os flebotomíneos são insetos hematófagos de grande importância médica e veterinária atuando como vetores de parasitas como Leishmania. O estudo do padrão alimentar desses vetores pode ajudar a compreender a sua interação com potenciais reservatórios de Leishmania. Neste estudo, desenvolvemos ensaios de PCR em tempo real para identificação de sangue em flebotomíneos. Seis pares de primers foram desenhados com base no gene citocromo b de sequencias disponíveis no GenBank dos seguintes hospedeiros potenciais: cão, gato, cavalo, galinha, rato e humano. Primeiramente, os ensaios de PCR em tempo real utilizando SYBR Green foram conduzidos usando uma curva padrão com oito concentrações diferentes (i.e., 10 ng, 1 ng, 100 pg, 10 pg, 1 pg, 100 fg, 10 fg e 1 fg por 2 µl) de amostras do DNA extraído do sangue com EDTA a partir de cada espécie de animal. Em seguida, o DNA foi extraído de 100 fêmeas de flebotomíneos ingurgitadas de campo pertencentes a três espécies (i.e., Lutzomyia longipalpis, L. migonei e L. lenti) foram testadas pelos protocolos aqui padronizados. Fêmeas de flebotomíneos foram experimentalmente alimentadas em um rato (Rattus rattus) e utilizadas para avaliar a detecção do ensaio. Os protocolos funcionaram de forma eficiente com limites de detecção de 10 pg a 100 fg. Fêmeas de flebotomíneos ingurgitadas coletadas no campo estavam alimentadas de humanos...
Descritores: Comportamento Alimentar/fisiologia
Reservatórios de Doenças
Insetos Vetores/fisiologia
Leishmaniose/transmissão
Psychodidae/fisiologia
Reação em Cadeia da Polimerase em Tempo Real/métodos
-Citocromos b/análise
Sensibilidade e Especificidade
Sangue/parasitologia
Limites: Humanos
Animais
Feminino
Responsável: BR305.1 - Biblioteca do CPqAM


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Id: lil-748860
Autor: Bickersmith, Sara A; Lainhart, William; Moreno, Marta; Chu, Virginia M; Vinetz, Joseph M; Conn, Jan E.
Título: A sensitive, specific and reproducible real-time polymerase chain reaction method for detection of Plasmodium vivax and Plasmodium falciparum infection in field-collected anophelines
Fonte: Mem. Inst. Oswaldo Cruz;110(4):573-576, 09/06/2015. tab, graf.
Idioma: en.
Projeto: NIH; . U19.
Resumo: We describe a simple method for detection of Plasmodium vivax and Plasmodium falciparum infection in anophelines using a triplex TaqMan real-time polymerase chain reaction (PCR) assay (18S rRNA). We tested the assay on Anopheles darlingi and Anopheles stephensi colony mosquitoes fed with Plasmodium-infected blood meals and in duplicate on field collected An. darlingi. We compared the real-time PCR results of colony-infected and field collected An. darlingi, separately, to a conventional PCR method. We determined that a cytochrome b-PCR method was only 3.33% as sensitive and 93.38% as specific as our real-time PCR assay with field-collected samples. We demonstrate that this assay is sensitive, specific and reproducible.
Descritores: Anopheles/parasitologia
Insetos Vetores/parasitologia
Plasmodium falciparum/genética
Plasmodium vivax/genética
Reação em Cadeia da Polimerase em Tempo Real
-Citocromos b/genética
Plasmodium falciparum/isolamento & purificação
Plasmodium vivax/isolamento & purificação
Reprodutibilidade dos Testes
Sensibilidade e Especificidade
Limites: Animais
Tipo de Publ: Research Support, N.I.H., Extramural
Responsável: BR1.1 - BIREME


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Id: lil-743200
Autor: Sandoval-Juárez, Aidé; Minaya-Gómez, Gloria; Rojas-Palomino, Nyshon; Falconí, Eduardo; Cáceres, Omar.
Título: Leishmaniosis cutanea: manifestación clínica inusual / Cutaneous leishmaniosis: unusual clinical manifestation
Fonte: Rev. peru. med. exp. salud publica;31(3):595-597, jul.-sep. 2014. ilus.
Idioma: es.
Resumo: Las manifestaciones clínicas de la leishmaniosis son variables y están relacionadas con la especie infectante, su relación con el medioambiente y con la respuesta inmune del hospedero. Se presenta un caso de leishmaniosis andina cutánea tardía con una manifestación extensa. El caso se confirmó a través de estudios microbiológicos e inmunológicos, la identificación se realizó mediante secuenciamiento del gen del citocromo b, determinándose la especie como Leishmania (Leishmania) amazonensis. La paciente recibió tratamiento con estibogluconato sódico y al término de la terapia, mostró mejoría clínica de las lesiones. Se recomienda considerar a la leishmaniosis en el diagnóstico diferencial cuando se atienda ulceras crónicas dermatológicas atípicas...

Clinical manifestations of leishmaniasis are diverse and related to the infecting species, its relationship with the environment and the host immune response. A case of late Andean cutaneous leishmaniasis with extensive manifestation is presented. The case was confirmed through microbiological and immunological studies; identification was performed by cytochrome b gene sequencing and the species was determined as Leishmania (Leishmania) amazonensis. The patient was treated with sodium stibogluconate and at the end of therapy the patient showed clinical improvement of the lesions. It is recommended to consider leishmaniasis in differential diagnosis when treating atypical dermatological chronic ulcers...
Descritores: Citocromos b
Leishmania
Leishmaniose Cutânea
-Peru
Limites: Humanos
Adulto
Feminino
Tipo de Publ: Relatos de Casos
Responsável: PE14.1 - Biblioteca de la Sede Central


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Texto completo SciELO Brasil
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Id: lil-716307
Autor: Bounamous, Azzedine; Lehrter, Véronique; Hadj-Henni, Leila; Delecolle, Jean-Claude; Depaquit, Jérôme.
Título: Limits of a rapid identification of common Mediterranean sandflies using polymerase chain reaction-restriction fragment length polymorphism
Fonte: Mem. Inst. Oswaldo Cruz;109(4):466-472, 03/07/2014. tab, graf.
Idioma: en.
Resumo: A total of 131 phlebotomine Algerian sandflies have been processed in the present study. They belong to the species Phlebotomus bergeroti, Phlebotomus alexandri, Phlebotomus sergenti, Phlebotomus chabaudi, Phlebotomus riouxi, Phlebotomus perniciosus, Phlebotomus longicuspis, Phlebotomus perfiliewi, Phlebotomus ariasi, Phlebotomus chadlii, Sergentomyia fallax, Sergentomyia minuta, Sergentomyia antennata, Sergentomyia schwetzi, Sergentomyia clydei, Sergentomyia christophersi and Grassomyia dreyfussi. They have been characterised by sequencing of a part of the cytochrome b (cyt b), t RNA serine and NADH1 on the one hand and of the cytochrome C oxidase I of the mitochondrial DNA (mtDNA) on the other hand. Our study highlights two sympatric populations within P. sergenti in the area of its type-locality and new haplotypes of P. perniciosus and P. longicuspis without recording the specimens called lcx previously found in North Africa. We tried to use a polymerase chain reaction-restriction fragment length polymorphism method based on a combined double digestion of each marker. These method is not interesting to identify sandflies all over the Mediterranean Basin.
Descritores: Citocromos b/genética
Psychodidae/genética
-Argélia
DNA Mitocondrial/genética
Reação em Cadeia da Polimerase
Polimorfismo de Fragmento de Restrição
Psychodidae/classificação
Limites: Animais
Feminino
Masculino
Responsável: BR1.1 - BIREME


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Texto completo SciELO Costa Rica
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Id: lil-715460
Autor: Villalobos, Federico; Gutierrez-Espeleta, Gustavo.
Título: Mesoamerican tree squirrels evolution (Rodentia: Sciuridae): a molecular phylogenetic analysis / Evolución de las ardillas arborícolas mesoamericanas (Rodentia: Sciuridae): un análisis filogenético molecular
Fonte: Rev. biol. trop;62(2):649-657, Jun.-Aug. 2014. ilus, tab.
Idioma: en.
Resumo: The tribe Sciurini comprehends the genera Sciurus, Syntheosiurus, Microsciurus, Tamiasciurus and Rheinthrosciurus. The phylogenetic relationships within Sciurus have been only partially done, and the relationship between Mesoamerican species remains unsolved. The phylogenetic relationships of the Mesoamerican tree squirrels were examined using molecular data. Sequence data publicly available (12S, 16S, CYTB mitochondrial genes and IRBP nuclear gene) and cytochrome B gene sequences of four previously not sampled Mesoamerican Sciurus species were analyzed under a Bayesian multispecies coalescence model. Phylogenetic analysis of the multilocus data set showed the neotropical tree squirrels as a monophyletic clade. The genus Sciurus was paraphyletic due to the inclusion of Microsciurus species (M. alfari and M. flaviventer). The South American species S. aestuans and S. stramineus showed a sister taxa relationship. Single locus analysis based on the most compact and complete data set (i.e. CYTB gene sequences), supported the monophyly of the South American species and recovered a Mesoamerican clade including S. aureogaster, S. granatensis and S. variegatoides. These results corroborated previous findings based on cladistic analysis of cranial and post-cranial characters. Our data support a close relationship between Mesoamerican Sciurus species and a sister relationship with South American species, and corroborates previous findings in relation to the polyphyly of Microsciurus and Syntheosciurus' paraphyly. Rev. Biol. Trop. 62 (2): 649-657. Epub 2014 June 01.

La tribu Sciurini comprende los géneros Sciurus, Syntheosciurus, Microsciurus, Tamiasciurus y Rheinthrosciurus. Las relaciones filogenéticas de Sciurus han sido resueltas parcialmente mientras que las relaciones de las especies Mesoamericanas permanecen sin resolverse. Las relaciones filogenéticas de las ardillas arborícolas mesoamericanas fueron estudiadas empleando datos moleculares. Datos de secuencias disponibles de forma pública (genes mitocondriales CYTB, 12S, 16S y gen nuclear IRBP) en conjunto con secuencias nuevas para el gen del Citocromo B de 4 especies mesoamericanas del genero Sciurus, fueron analizadas empleando un modelo bayesiano de coalescencia multi-especie. Los análisis filogenéticos del conjunto de datos multilocus mostraron que las especies neotropicales forman un clado monofilético. El género Sciurus resulto ser parafilético debido a la inclusión de las especies de Microsciurus (M. alfari y M. flaviventer). Las especies suramericanas S. aestuans y S. stramineus presentaron una relación de especies hermanas. El análisis de un solo locus basado en el conjunto de datos más compacto y completo (secuencias del gen del citocromo B), apoyó la naturaleza monofilética de las especies suramericanas y recuperó un clado mesoamericano que incluye a S. aureogaster, S. granatensis y S. variegatoides. Estos resultados corroboran los descubrimientos previos que emplearon datos morfológicos craneales y pos-craneales. Nuestros datos apoyan la relación cercana entre las especies de Sciurus Mesoamericanas y la relación hermana de estas con las especies de Suramérica, así como también corroboran la relación polifilética de Microsciurus y parafilética de Syntheosciurus previamente reportadas.
Descritores: Citocromos b/genética
Sciuridae/genética
-Teorema de Bayes
Evolução Biológica
Genes Mitocondriais
Filogenia
Análise de Sequência de DNA
Sciuridae/classificação
Limites: Animais
Tipo de Publ: Research Support, Non-U.S. Gov't
Responsável: CR1.1 - BINASSS - Biblioteca Nacional de Salud y Seguridad Social


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Id: lil-711736
Autor: Soares, Vítor Yamashiro Rocha; Silva, Jailthon Carlos da; Silva, Kleverton Ribeiro da; Cruz, Maria do Socorro Pires e; Santos, Marcos Pérsio Dantas; Ribolla, Paulo Eduardo Martins; Alonso, Diego Peres; Coelho, Luiz Felipe Leomil; Costa, Dorcas Lamounier; Costa, Carlos Henrique Nery.
Título: Identification of blood meal sources of Lutzomyia longipalpis using polymerase chain reaction-restriction fragment length polymorphism analysis of the cytochrome B gene
Fonte: Mem. Inst. Oswaldo Cruz;109(3):379-383, 06/2014. tab, graf.
Idioma: en.
Resumo: An analysis of the dietary content of haematophagous insects can provide important information about the transmission networks of certain zoonoses. The present study evaluated the potential of polymerase chain reaction-restriction fragment length polymorphism (PCR-RFLP) analysis of the mitochondrial cytochrome B (cytb) gene to differentiate between vertebrate species that were identified as possible sources of sandfly meals. The complete cytb gene sequences of 11 vertebrate species available in the National Center for Biotechnology Information database were digested with Aci I, Alu I, Hae III and Rsa I restriction enzymes in silico using Restriction Mapper software. The cytb gene fragment (358 bp) was amplified from tissue samples of vertebrate species and the dietary contents of sandflies and digested with restriction enzymes. Vertebrate species presented a restriction fragment profile that differed from that of other species, with the exception of Canis familiaris and Cerdocyon thous. The 358 bp fragment was identified in 76 sandflies. Of these, 10 were evaluated using the restriction enzymes and the food sources were predicted for four: Homo sapiens (1), Bos taurus (1) and Equus caballus (2). Thus, the PCR-RFLP technique could be a potential method for identifying the food sources of arthropods. However, some points must be clarified regarding the applicability of the method, such as the extent of DNA degradation through intestinal digestion, the potential for multiple sources of blood meals and the need for greater knowledge regarding intraspecific variations in mtDNA.
Descritores: Comportamento Animal/fisiologia
Citocromos b/genética
Psychodidae/fisiologia
-Comportamento Animal/classificação
Comportamento Alimentar/fisiologia
Cavalos
Refeições
Mitocôndrias/enzimologia
Gambás
Reação em Cadeia da Polimerase
Polimorfismo de Fragmento de Restrição
Psychodidae/classificação
Suínos
Limites: Animais
Gatos
Bovinos
Cães
Humanos
Ratos
Responsável: BR1.1 - BIREME


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Abad-Franch, Fernando
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Id: lil-697836
Autor: Abad-Franch, Fernando; Pavan, Marcio G; Jaramillo-O, Nicolas; Palomeque, Francisco S; Dale, Carolina; Chaverra, Duverney; Monteiro, Fernando A.
Título: Rhodnius barretti, a new species of Triatominae (Hemiptera: Reduviidae) from western Amazonia
Fonte: Mem. Inst. Oswaldo Cruz;108(supl.1):92-99, 2013. tab, graf.
Idioma: en.
Projeto: UNDP/UNICEF/World Bank/WHO TDR Special Program; . UNDP/UNICEF/World Bank/WHO TDR Special Program.
Resumo: Rhodnius barretti , a new triatomine species, is described based on adult specimens collected in rainforest environments within the Napo ecoregion of western Amazonia (Colombia and Ecuador). R. barretti resembles Rhodnius robustus s.l. , but mitochondrial cytochrome b gene sequences reveal that it is a strongly divergent member of the “robustus lineage”, i.e., basal to the clade encompassing Rhodnius nasutus , Rhodnius neglectus , Rhodnius prolixus and five members of the R. robustus species complex. Morphometric analyses also reveal consistent divergence from R. robustus s.l. , including head and, as previously shown, wing shape and the length ratios of some anatomical structures. R. barretti occurs, often at high densities, in Attalea butyracea and Oenocarpus bataua palms. It is strikingly aggressive and adults may invade houses flying from peridomestic palms. R. barretti must therefore be regarded as a potential Trypanosoma cruzi vector in the Napo ecoregion, where Chagas disease is endemic.
Descritores: Doença de Chagas/transmissão
Doenças Endêmicas
Floresta Úmida
Rhodnius/anatomia & histologia
Rhodnius/classificação
-Arecaceae
Teorema de Bayes
Colômbia
Doença de Chagas/epidemiologia
Citocromos b/genética
Ecologia
Ecossistema
Equador
Filogenia
Análise de Sequência
Especificidade da Espécie
Triatominae/classificação
Limites: Animais
Tipo de Publ: Research Support, Non-U.S. Gov't
Responsável: BR1.1 - BIREME



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