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Id: lil-753015
Autor: Dias, Ana Carolina; Batista, Thiago Martins; Roma, Letícia Prates; Módulo, Carolina Maria; Malki, Leonardo Tannus; Dias, Lara Cristina; Alves, Mônica; Reinach, Peter Sol; Carneiro, Everardo Magalhães; Rocha, Eduardo Melani.
Título: Insulin replacement restores the vesicular secretory apparatus in the diabetic rat lacrimal gland / Reposição de insulina restaura o mecanismo secretório da glândula lacrimal de ratos diabéticos
Fonte: Arq. bras. oftalmol;78(3):158-163, May-Jun/2015. tab, graf.
Idioma: en.
Resumo: ABSTRACT Purpose: In the lacrimal gland (LG) acinar cells, signaling regulates the release of secretory vesicles through specific Rab and SNARE exocytotic proteins. In diabetes mellitus (DM), the LGs are dysfunctional. The aim of this work was to determine if secretory apparatus changes were associated with any effects on the secretory vesicles (SV) in diabetic rats as well as the expression levels of constituent Rab and members of the SNARE family, and if insulin supplementation reversed those changes. Methods: DM was induced in male Wistar rats with an intravenous dose of streptozotocin (60 mg/kg). One of the two diabetic groups was then treated every other day with insulin (1 IU). A third control group was injected with vehicle. After 10 weeks, Western blotting and RT-PCR were used to compared the Rab and SNARE secretory factor levels in the LGs. Transmission electron microscopy evaluated acinar cell SV density and integrity. Results: In the diabetes mellitus group, there were fewer and enlarged SV. The Rab 27b, Rab 3d, and syntaxin-1 protein expression declined in the rats with diabetes mellitus. Insulin treatment restored the SV density and the Rab 27b and syntaxin expression to their control protein levels, whereas the Vamp 2 mRNA expression increased above the control levels. Conclusions: Diabetes mellitus LG changes were associated with the declines in protein expression levels that were involved in supporting exocytosis and vesicular formation. They were partially reversed by insulin replacement therapy. These findings may help to improve therapeutic management of dry eye in diabetes mellitus. .

RESUMO Objetivo: Células acinares da glândula lacrimal (GL) sinalizam a regulação da liberação através de vesículas secretórias específicas Rab proteínas exocitóticas SNARE. No diabetes mellitus (DM), as glândulas lacrimais são disfuncionais. O objetivo deste trabalho foi determinar se em ratos diabéticos, alterações dos aparatos secretórios estão associados a efeitos sobre vesículas secretoras (VS) e sobre os níveis de expressão do constituinte Rab, bem como membros da família SNARE, e se a suplementação de insulina reverte as alterações. Métodos: DM foi induzido em ratos Wistar machos com uma dose intravenosa de estreptozotocina (60 mg/kg). Um dos dois grupos diabéticos foi então tratado a cada dois dias com insulina (1 UI). Um terceiro grupo controle foi injetado com o veículo. Após 10 semanas, western blot e RT-PCR comparou níveis de fatores secretórios de Rab e SNARE na glândula lacrimal. Microscopia eletrônica de transmissão (MET) avaliaram a densidade e integridade de VS de célula acinar. Resultados: No grupo diabetes mellitus , houve poucas e alargadas VS. Rab27b, Rab 3d e Sintaxina-1 diminuiu a expressão da proteína em ratos com Diabetes Mellitus. O tratamento com insulina restaurou a densidade das VS e expressão de Rab 27b e Sintaxina para seus níveis de proteína controle, enquanto a expressão de Vamp 2 RNAm aumentou em relação aos controles. Conclusões: Alterações na glândula lacrimal de diabetes mellitus estão associadas a reduções nos níveis de expressão de proteínas envolvidas no apoio a exocitose e formação vesicular. Eles são, em parte, revertida por terapia de reposição de insulina. Estes resultados podem ajudar a melhorar a conduta terapêutica do olho seco no diabetes mellitus. .
Descritores: Diabetes Mellitus Experimental/metabolismo
Hipoglicemiantes/farmacologia
Insulina/farmacologia
Aparelho Lacrimal/efeitos dos fármacos
Vesículas Secretórias/metabolismo
-Acetilcolina/análise
Células Acinares/ultraestrutura
Western Blotting/métodos
Diabetes Mellitus Experimental/induzido quimicamente
Exocitose/efeitos dos fármacos
Aparelho Lacrimal
Modelos Animais
Proteínas Qa-SNARE/metabolismo
Proteínas R-SNARE/metabolismo
Ratos Wistar
RNA Mensageiro/metabolismo
Vesículas Secretórias/efeitos dos fármacos
Proteínas rab de Ligação ao GTP/genética
Proteínas rab de Ligação ao GTP/metabolismo
Limites: Animais
Masculino
Tipo de Publ: Research Support, Non-U.S. Gov't
Responsável: BR1.1 - BIREME


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Id: lil-750113
Autor: Farizatto, Karen Lisneiva Garcia.
Título: Estudo da degradação da proteína Tau hiperfosforilada por vias independentes do proteassoma, em modelo experimental de neurodegeneração / Study of hyperphosphorylated Tau protein degradation by proteasome-independent pathways, in an experimental model of neurodegeneration.
Fonte: São Paulo; s.n; 2014. 117 p. ilus, graf.
Idioma: pt.
Tese: Apresentada a Universidade de São Paulo. Faculdade de Medicina para obtenção do grau de Doutor.
Resumo: O desenvolvimento das doenças neurodegenerativas, como a doença de Alzheimer, está associado à presença de agregados proteicos contendo Tau hiperfosforilada (p-Tau). Esta disfunção da Tau leva a prejuízos na homeostase celular. Um mecanismo chave para diminuir e/ou prevenir os danos promovidos pelos agregados contendo Tau seria o estímulo de sua degradação. Neste sentido, a proposta do presente estudo foi analisar a degradação da proteína Tau após aumento da expressão exógena da cochaperona Bag-2, a qual influencia o sistema proteassomal de degradação; bem como avaliar a ativação dos sistemas de degradação, a fim de correlacionar estes sistemas em cultura de células primárias e organotípica do hipocampo de ratos. Os resultados mostraram que a rotenona foi capaz de aumentar os níveis de p-Tau e que a superexpressão de Bag-2, foi eficiente em prevenir e degradar a p-Tau. O mecanismo envolvido neste processo envolve a coordenação dos sistemas proteassomal e lisossomal, já que a Rab7 e a Rab24 (envolvidas na via lisossomal) mostraram-se diminuídas na fase que antecede a agregação proteica, enquanto houve aumento da Rab24 na presença dos agregados proteicos. Com relação ao peptídeo beta amiloide, foi demonstrado tendência de aumento de p-Tau acompanhado de diminuição da atividade proteassomal e lisossomal. O tratamento com PADK (ativador lisossomal) foi capaz de reverter este efeito nestas diferentes condições. A análise da interrelação entre os sistemas mostrou que uma inibição do proteassoma favorece a via lisossomal e que o inverso não se repete. Os resultados sugerem que a modulação das vias de degradação pode ser interessante para o estudo, prevenção e tratamento das doenças neurodegenerativas associadas à agregação de proteínas...

Neurodegenerative diseases, such as Alzheimer's, are associated to protein inclusions containing hyperphosphorylated Tau (p-Tau). It is well established that Tau dysfunction impairs cell homeostasis. A key mechanism to prevent and/or reduce the damage promoted by aggregates of Tau might be its degradation. In view of this, the aims of the present study are to evaluate p- Tau clearance following exogenous expression of Bag-2, which stimulates proteasome; as well as to analyze the activation of both lysosome and proteasome pathways in order to understand the crosstalk between these two systems in primary and organotypic cultures of rat hippocampus. Results showed that rotenone was able of increasing p-Tau that was prevented and degraded by Bag-2 overexpression. Mechanisms involved in this process involve the coordination of cell degradation systems, depending upon aggregation status, since Rab7 and Rab24 (involved in lysosomal pathway) were decreased before protein aggregation, while Rab24 increased in the presence of protein inclusions. Amyloid-beta peptide also increased p-Tau accompanied by decreased proteasome and lysosome activity. PADK (lysosomal activator) treatment reverted the inhibition promoted by amyloidbeta peptide. Inhibition of proteasome leads to activation of lysosome, but lysosome inhibition does not affect proteasome. Overall, results suggest that targeting degradation pathways might be useful to understand, prevent and treat neurodegenerative diseases associated with protein deposits...
Descritores: Doença de Alzheimer
Peptídeos beta-Amiloides
Lisossomos
Chaperonas Moleculares
Doenças Neurodegenerativas
Emaranhados Neurofibrilares
Proteínas rab de Ligação ao GTP
Rotenona/farmacologia
Proteínas tau
Tauopatias/fisiopatologia
-Envelhecimento
Hipocampo
Modelos Animais
Ratos Endogâmicos Lew
Ratos Sprague-Dawley
Limites: Animais
Ratos
Responsável: BR66.1 - Divisão de Biblioteca e Documentação


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Id: lil-560969
Autor: Castaño, Diana; Rojas, Mauricio.
Título: Alteraciones en el reclutamiento y activación de proteínas Rab durante la infección micobacteriana: [revisão] / Alterations in recruitment and activation of Rab proteins during mycobacterial infection: [review]
Fonte: Biomédica (Bogotá);30(2):283-308, jun. 2010. ilus.
Idioma: es.
Resumo: En el fagosoma, Mycobacterium spp. altera la activación y reclutamiento de diferentes proteínas “del gen Ras de cerebro de rata”, comúnmente conocidas como Rab. En este manuscrito se revisa una serie de reportes que han demostrado que los fagosomas que contienen micobacterias tienen una expresión mayor y sostenida de Rab5, Rab11, Rab14 y Rab22a, y menor o ninguna expresión de Rab7, Rab9 y Rab6. Esto se correlaciona con aumento de la fusión de estos fagosomas con endosomas tempranos y de reciclaje, lo que les permite mantener ciertas características de compartimentos tempranos, permite que las bacterias obtengan acceso a nutrientes y previene la activación de mecanismos contra la micobacteria. La expresión de mutantes constitutivamente activos de las Rab de endosomas tempranos impide la maduración de fagosomas que contienen esferas de látex o micobacterias inactivadas por calor. Mientras que su silenciamiento, mediante ARN de interferencia o mediante dominantes negativos, induce la maduración de fagosomas micobacterianos. Los mecanismos exactos por los que las micobacterias alteran la dinámica de expresión de estas GTPasas, afectando la maduración fagolisosómica, no se han establecido. El problema podría explicarse por defectos en el reclutamiento de las proteínas que interactúan con Rab, como la cinasa-3 del fosfatidilinositol y el antígeno endosómico temprano 1. La identificación de los mecanismos empleados por Mycobacterium spp. para interrumpir el ciclo de activación de las Rab, será esencial para comprender la fisiopatología de la infección micobacteriana y útil como posibles blancos farmacológicos.

At the phagosome level, Mycobacterium spp. alters activation and recruitment of several “Ras gene from rat brain” proteins, commonly known as Rab. Mycobacterial phagosomes have a greater and sustained expression of Rab5, Rab11, Rab14 and Rab22a, and lowered or no expression of Rab7, Rab9 and Rab6. This correlates with increased fusion of the phagosomes with early and recycling endosomes acquiring some features of early phogosomes, allowing the bacteria to gain access to nutrients and preventing the activation of anti-mycobacterial mechanisms. The expression of constitutively active mutants of Rab from the early stage endosomes prevents the maturation of phagosomes containing latex beads or heat-inactivated mycobacteria. Silencing of these mutants by interference RNA or dominant negative forms induces the maturation of mycobacterial phagosomes. The mechanisms have not been established by which mycobacteria alter the expression of these GTPases and thereby shift the phagolysosomal maturation. The problem can be explained by alterations in the recruitment of proteins that interact with Rab, such as phosphoinositide 3-kinases and early endosomal antigen 1. Identifying the mechanisms used by Mycobacterium spp. to disrupt the cycle of Rab activation will be essential to understand the pathophysiology of mycobacterial infections and usefully to potential drug targets.
Descritores: Mycobacterium tuberculosis
Fagossomos
Proteínas rab de Ligação ao GTP
Tuberculose
-Endossomos
Proteínas SNARE
Tipo de Publ: Revisão
Responsável: CO42.1 - Biblioteca Nacional de Salud José Celestino Mutis


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Id: lil-496814
Autor: Meschede, I. P; Santos, T. O; Izidoro-Toledo, T. C; Gurgel-Gianetti, J; Espreafico, E. M.
Título: Griscelli syndrome-type 2 in twin siblings: case report and update on RAB27A human mutations and gene structure
Fonte: Braz. j. med. biol. res = Rev. bras. pesqui. méd. biol;41(10):839-848, Oct. 2008. ilus, tab.
Idioma: en.
Projeto: FAPESP; . CNPq; . Fundação de Apoio ao Ensino, Pesquisa e Assistência do Hospital das Clínicas da Faculdade de Medicina de Ribeirão Preto; . CAPES; . FAPESP; . CNPq.
Resumo: Griscelli syndrome (GS) is a rare autosomal recessive disorder caused by mutation in the MYO5A (GS1, Elejalde), RAB27A (GS2) or MLPH (GS3) genes. Typical features of all three subtypes of this disease include pigmentary dilution of the hair and skin and silvery-gray hair. Whereas the GS3 phenotype is restricted to the pigmentation dysfunction, GS1 patients also show primary neurological impairment and GS2 patients have severe immunological deficiencies that lead to recurrent infections and hemophagocytic syndrome. We report here the diagnosis of GS2 in 3-year-old twin siblings, with silvery-gray hair, immunodeficiency, hepatosplenomegaly and secondary severe neurological symptoms that culminated in multiple organ failure and death. Light microscopy examination of the hair showed large, irregular clumps of pigments characteristic of GS. A homozygous nonsense mutation, C-T transition (c.550C>T), in the coding region of the RAB27A gene, which leads to a premature stop codon and prediction of a truncated protein (R184X), was found. In patient mononuclear cells, RAB27A mRNA levels were the same as in cells from the parents, but no protein was detected. In addition to the case report, we also present an updated summary on the exon/intron organization of the human RAB27A gene, a literature review of GS2 cases, and a complete list of the human mutations currently reported in this gene. Finally, we propose a flow chart to guide the early diagnosis of the GS subtypes and Chédiak-Higashi syndrome.
Descritores: Doenças em Gêmeos/genética
Cor de Cabelo/genética
Linfo-Histiocitose Hemofagocítica/genética
Mutação/genética
Transtornos da Pigmentação/genética
Proteínas rab de Ligação ao GTP/genética
-Doenças em Gêmeos/diagnóstico
Evolução Fatal
Linfo-Histiocitose Hemofagocítica/diagnóstico
Transtornos da Pigmentação/diagnóstico
Síndrome
Limites: Pré-Escolar
Humanos
Masculino
Tipo de Publ: Relatos de Casos
Research Support, Non-U.S. Gov't
Responsável: BR1.1 - BIREME


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Id: lil-456761
Autor: Frigieri, M. C; Thompson, G. M; Pandolfi, J. R; Zanelli, C. F; Valentini, S. R.
Título: Use of a synthetic lethal screen to identify genes related to TIF51A in Saccharomyces cerevisiae
Fonte: Genet. mol. res. (Online);6(1):152-165, 2007. tab, ilus.
Idioma: en.
Resumo: The putative eukaryotic translation initiation factor 5A (eIF5A) is an essential protein for cell viability and the only cellular protein known to contain the unusual amino acid residue hypusine. eIF5A has been implicated in translation initiation, cell proliferation, nucleocytoplasmic transport, mRNA decay, and actin polarization, but the precise biological function of this protein is not clear. However, eIF5A was recently shown to be directly involved with the translational machinery. A screen for synthetic lethal mutations was carried out with one of the temperature-sensitive alleles of TIF51A (tif51A-3) to identify factors that functionally interact with eIF5A and revealed the essential gene YPT1. This gene encodes a small GTPase, a member of the rab family involved with secretion, acting in the vesicular trafficking between endoplasmatic reticulum and the Golgi. Thus, the synthetic lethality between TIF51A and YPT1 may reveal the connection between translation and the polarized distribution of membrane components, suggesting that these proteins work together in the cell to guarantee proper protein synthesis and secretion necessary for correct bud formation during G1/S transition. Future studies will investigate the functional interaction between eIF5A and Ypt1 in order to clarify this involvement of eIF5A with vesicular trafficking.
Descritores: Genes Letais/genética
Mutação/genética
Fatores de Iniciação de Peptídeos/genética
Proteínas de Ligação a RNA/genética
Proteínas de Saccharomyces cerevisiae/genética
Saccharomyces cerevisiae/genética
Proteínas rab de Ligação ao GTP/genética
-Fase G1/genética
Fase S/genética
Saccharomyces cerevisiae/citologia
Vesículas Transportadoras/genética
Tipo de Publ: Research Support, Non-U.S. Gov't
Responsável: BR1.1 - BIREME


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Id: lil-415440
Autor: Batista, Denise da Gama Jaén.
Título: Estudo da via endocítica de cardiomiócitos antes e após sua infecção pelo Trypanosoma cruzi / Study of the endocytic pathway in cardiomyocytes before and after its infection for the Trypanosoma cruzi.
Fonte: Rio de Janeiro; s.n; nov.23, 2004. xiii,69 p. ilus, tab.
Idioma: pt.
Tese: Apresentada a Instituto Oswaldo Cruz para obtenção do grau de Mestre.
Resumo: A doença de Chagas é uma doença incurável causada pelo Trypanosoma cruzi.As células cardíacas representam importantes alvos de infecção e inflamação em ambas a fase da doença(aguda e crônica).Alterações na fisiologia de células hospedeiras têm sido descritas durante a infecção por diferentes patógenos.Como a endocitose apresenta um importante papel em diferentes eventos celulares,nosso objetivo foi caracterizar alguns aspectos da via endocítica de cardiomiócitos,verificando se a infecção pelo T.cruzi altera o processo endocítico. Devido ao...de onde,a depender de suas características,são transportados para as vias de reciclagem ou de degradação.Nosso estudo também demonstrou que apesar de não serem fagócitos profissionais,os cardiomiócitos são capazes de internalizar grandes partículas.Entretanto,a infecção pelo T.cruzi induz uma importante inibição na incorporação de ligantes manosilados,como zimosan A, provavelmente devido(i)a regulação negativa de receptores manose-fucose,previamente relatada pelo nosso grupo e/ou adicionalmente(ii)às alterações de componentes da via endocítica.Como GTPases participam ativamente do tráfego vesicular e podem ser reguladas frente a infecção por diferentes patógenos,nos propusemos a investigar a expressão de algumas Rabs em cardiomiócitos infectados pelo T.cruzi.Observamos que culturas infectadas apresentam uma regulação negativa de Rab7 e Rab11 logo após 24h de infecção,e que embora a expressão de Rab5a fosse mantida nas culturas infectadas mesmo após 72h de infecção,a expressão de EEA1 foi parcialmente regulada.A modulação de EEA1,Rab7 e Rab11 pode ter relação com a ação de mediadores solúveis do parasita,da célula hospedeira e/ou devido a um perfil de ativação dos cardiomiócitos frente a esta infecção.Nossos resultados ultra-estruturais sugerem a participação de Rab5a e EEA1 na invasão do parasita e demonstram a capacidade de vacúolos parasitóforos se fusionar a compartimentos tardios,identificados pela presença de Rab7,corroborando estudos prévios realizados em outros modelos celulares. Adicionalmente,uma redução na incorporação de ligantes de fase fluida foi observada nas culturas infectadas, possivelmente relacionada a regulação negativa das GTPases e de EEA1.Em resumo,a modulação da via endocítica de cardiomiócitos durante a infecção pelo T.cruzi pode contribuir para as alterações fisiológicas das células cardíacas infectadas através de sua interferência em importantes eventos relacionados a via endocítica.
Descritores: Doença de Chagas
Endocitose
Miócitos Cardíacos
Proteínas rab de Ligação ao GTP
Trypanosoma cruzi
Responsável: BR15.1 - Biblioteca de Ciências Biomédicas
BR15.1


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Id: lil-303017
Autor: Ramalho-Santos, Joäo; Moreno, Ricardo D.
Título: Targeting and fusion proteins during mammalian spermiogenesis
Fonte: Biol. Res;34(2):147-152, 2001. ilus.
Idioma: en.
Resumo: Regulated exocytosis is controlled by internal and external signals. The molecular machinery controlling the sorting from the newly synthesized vesicles from the Golgi apparatus to the plasma membrane play a key role in the regulation of both the number and spatial location of the vesicles. In this context the mammalian acrosome is a unique vesicle since it is the only secretory vesicle attached to the nucleus. In this work we have studied the membrane trafficking between the Golgi apparatus and the acrosome during mammalian spermiogenesis. During bovine spermiogenesis, Golgi antigens (mannosidase II) were detected in the acrosome until the late cap-phase spermatids, but are not found in testicular spermatozoa (maturation-phase spermatids). This suggests that Golgi-acrosome flow may be relatively unselective, with Golgi residents retrieved before spermiation is complete. Surprisingly, rab7, a protein involved in lysosome/endosome trafficking was also found associated with the acrosomal vesicle during mouse spermiogenesis. Our results suggest that the acrosome biogenesis is associated with membrane flow from both the Golgi apparatus and the endosome/lysosome system in mammalian spermatids.
Descritores: Acrossomo
Complexo de Golgi
Espermatogênese
-Imuno-Histoquímica
Lisossomos
Proteínas rab de Ligação ao GTP
Espermátides
Limites: Animais
Masculino
Bovinos
Camundongos
Responsável: BR1.1 - BIREME



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