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Rodrigues, Dália dos Prazeres
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Id: lil-492722
Autor: Lafisca, Andrea; Pereira, Christiane Soares; Giaccone, Valério; Rodrigues, Dalia dos Prazeres.
Título: Enzymatic characterization of Vibrio alginolyticus strains isolated from bivalves harvested at Venice Lagoon (Italy) and Guanabara Bay (Brazil) / Caracterização enzimática de cepas de Vibrio alginolyticus isoladas de bivalves coletados na Lagoa de Veneza (Itália) e Baía de Guanabara (Brasil)
Fonte: Rev. Inst. Med. Trop. Säo Paulo;50(4):199-202, July-Aug. 2008. tab.
Idioma: en.
Resumo: The aquatic ecosystem is the natural habitat of microorganisms including Vibrio and Aeromonas genus which are pathogenic to human and animals. In the present investigation the frequency of these bacteria and the enzymatic characteristics of 34 Vibrio alginolyticus strains isolated from bivalves harvested in Venice Lagoon (Italy) and Guanabara Bay (Brazil) were carried out from November 2003 to February 2004. The mussels' samples were submitted to enrichment in Alkaline Peptone Water (APW) added with 1 percent of sodium chloride (NaCl) and APW plus 3 percent NaCl incubated at 37 ºC for 18-24h. Following the samples were streaked onto TCBS Agar (Thiossulfate Citrate Bile Sucrose Agar) and the suspected colonies were submitted to biochemical characterization. Also, the Vibrio alginolyticus strains were evaluated to collagenase, elastase and chondroitinase production. The results showed the isolation of 127 microorganisms distributed as follows: 105 Vibrio strains such as V. alginolyticus (32.4 percent), V. harveyi (19 percent) and V. parahaemolyticus (7.6 percent), 20 Aeromonas strains and two Plesiomonas shigelloides were the main pathogens isolated. We observed the production of the three enzymes from V. alginolyticus strains considered as the main virulence factors of the bacteria, especially in cases of human dermatological infection.

O ecossistema aquático é o habitat natural de microrganismos incluindo aqueles dos gêneros Vibrio e Aeromonas os quais são patogênicos para o homem e animais. Na presente investigação foi avaliada a freqüência destas bactérias e a característica enzimática de 34 cepas de Vibrio alginolyticus isoladas de bivalves coletados na Lagoa de Venice (Itália) e Baía de Guanabara (Brasil) durante o período de Novembro-2003 a Fevereiro-2004. As amostras de mexilhões foram submetidas a enriquecimento em Água Peptonada Alcalina (APA) adicionada de 1 por cento de Cloreto de Sódio (NaCl) e APA com 3 por cento de NaCl (37 ºC/18-24h). Em seguida as amostras foram semeadas em Agar TCBS (Agar Tiossulfato Citrato Bile Sacarose) e as colônias suspeitas foram submetidas à caracterização bioquímica. As cepas de Vibrio alginolyticus foram avaliadas quanto à produção das enzimas colagenase, elastase e condroitinase. Os resultados demonstraram o isolamento de 127 microrganismos assim distribuídos: 105 cepas de Vibrio das quais V. alginolyticus (32,4 por cento), V. harveyi (19 por cento) e V. parahaemolyticus (7,6 por cento), 20 cepas de Aeromonas e 2 Plesiomonas shigelloides foram os principais patógenos isolados. Observou-se a produção das três enzimas a partir de V. alginolyticus, consideradas principais fatores de virulência da bactéria, em especial em casos de infecção dermatológica humana.
Descritores: Aeromonas/classificação
Bivalves/microbiologia
Vibrio alginolyticus/enzimologia
Vibrio/classificação
-Aeromonas/isolamento & purificação
Brasil
Condroitinases e Condroitim Liases/biossíntese
Colagenases/biossíntese
Itália
Elastase Pancreática/biossíntese
Vibrio alginolyticus/isolamento & purificação
Vibrio/isolamento & purificação
Limites: Animais
Responsável: BR1.1 - BIREME


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Id: lil-419417
Autor: Aguiar, Jair Adriano Kopke de.
Título: Purificação e utilização das condroitinases B e AC de Flavobacterium heparinum no estudo dos proteoglicanos de matriz extracelular / Purification and utilization of chondroitinases AC, B and C from Flavobacterium in the study of proteoglycans the extracellular matrix.
Fonte: São Paulo; s.n; 2004. [237] p.
Idioma: pt.
Tese: Apresentada a Universidade Federal de São Paulo. Escola Paulista de Medicina. Curso de Biologia Molecular para obtenção do grau de Doutor.
Resumo: As condroitinases AC, B e C de Flavobacferium heparinum são importantes instrumentos para a identificação e a análise da estrutura de condroitim sulfatos e dermatam sulfatos, bem como de seus proteoglicanos, de diferentes origens. Entretanto, para que sejam úteis, preparações de enzimas puras e estáveis devem ser obtidas. No presente trabalho, descrevemos um procedimento simples, reprodutível e com alto rendimento para preparo dessas enzimas, baseado em cromatografia de troca iônica em Q-Sepharose FF e cromatografia de interação hidrofóbica em Pheny-Sepharose HP. Para análise quantitativa da purificação e do rendimento das enzimas purificadas, estabelecemos uma metodologia que se baseia na queda em metacromasia que acompanha a despolimerização dos glicosaminoglicanos. Este método, que utiliza a interação dos glicosaminoglicanos com azul de dimetilmetileno, permitiu a dosagem das condroitìnases presentes em extratos brutos induzidos de F. heparinum e nas preparações purificadas. A vantagem deste procedimento sobre outros métodos comumente empregados, que quantificam os produtos insaturados formados, é que a. presença de glicuronidases e sulfatares não interfere na determinação das atividades enzimáticas. As condroitinases AC e B assim preparadas foram empregadas na identificação e na análise estrutural de proteoglicanos e glicosaminoglicanos extraídos de diversos tecidos e fluidos biológicos, como córnea humana, urina, soro e diversos tecidos de gato, miométrio e leiomioma humanos. Além disso, uma nova metodologia foi desenvolvida para imunolocalizar proteoglicanos de condroitim sulfato ou dermatam sulfato em cortes de tecidos. Essa metodologia baseia-se na incubação de cortes de tecidos com condroitinase AC (para condroitim sulfato) ou condroitinase 8 (para dermatam sulfato). Em seguida, os resíduos insaturados gerados pelas enzimas são reconhecidos por anticorpos monoclonais específicos. Estudos de dupla marcação para as cadeias de condroitim sulfato ou dermatam sulfato e o esqueleto protéico (decorim ou versicam) ou queratam sulfato ou, ainda, filamentos de actina foram também realizados. As imagens de dupla marcação foram submetidas a análise morfométrica, utilizando a ferramenta MATLAB, para determinação do grau de co-localização...
Descritores: Sulfatos de Condroitina
Condroitinases e Condroitim Liases
Dermatan Sulfato
Responsável: BR1.2 - Biblioteca Central
BR1.2; 8926


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Texto completo SciELO Brasil
Michelacci, Y. M
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Id: lil-233473
Autor: Aguiar, J. A. K; Michelacci, Y. M.
Título: Preparation and purification of Flavobacterium heparinum chondroitinases AC and B by hydrophobic interaction chromatography
Fonte: Braz. j. med. biol. res = Rev. bras. pesqui. méd. biol;32(5):545-50, May 1999.
Idioma: en.
Conferência: Apresentado em: Brazilian Symposium on Extracellular Matrix, Angra dos Reis, 7-10 Sept. 1998.
Resumo: Flavobacterium heparinum is a soil bacterium that produces several mucopolysaccharidases such as heparinase, heparitinases I and II, and chondroitinases AC, B, C and ABC. The purpose of the present study was to optimize the preparation of F. heparinum chondroitinases, which are very useful tools for the identification and structural characterization of chondroitin and dermatan sulfates. We observed that during the routine procedure for cell disruption (ultrasound, 100 kHz, 5 min) some of the chondroitinase B activity was lost. Using milder conditions (2 min), most of the chondroitinase B and AC protein was solubilized and the enzyme activities were preserved. Tryptic soy broth without glucose was the best culture medium both for bacterial growth and enzyme induction. Chondroitinases AC and B were separated from each other and also from glucuronidases and sulfatases by hydrophobic interaction chromatography on HP Phenyl-Sepharose. A rapid method for screening of the column fractions was also developed based on the metachromatic shift of the color of dimethylmethylene blue
Descritores: Condroitinases e Condroitim Liases/isolamento & purificação
Cromatografia/métodos
Flavobacterium/enzimologia
-Sulfatos de Condroitina/química
Sulfatos de Condroitina/isolamento & purificação
Meios de Cultura
Dermatan Sulfato/química
Dermatan Sulfato/isolamento & purificação
Eletroforese em Gel de Ágar
Flavobacterium/isolamento & purificação
Tipo de Publ: Research Support, Non-U.S. Gov't
Responsável: BR1.1 - BIREME


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Id: lil-203901
Autor: Horton, Denise Silvina Piccini Quintas.
Título: Queratases e condroitinases bacterianas: isolamento, caracterizaçäo e emprego no estudo da estrutura de proteoglicanos de cartilagem do peixe elasmobranquio Shyrna Lewini.
Fonte: Säo Paulo; s.n; 1991. 174 p.
Idioma: pt.
Tese: Apresentada a Escola Paulista de Medicina para obtenção do grau de Doutor.
Descritores: Cartilagem
Condroitinases e Condroitim Liases
Peixes
Proteoglicanas
Responsável: BR1.2 - Biblioteca Central
BR1.2; 569



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