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Id: lil-798103
Autor: Shaker, Olfat G; Alnoury, Amina M; Hegazy, Gehan A; El Haddad, Hemmat E; Sayed, Safaa; Hamdy, Ahmed.
Título: Methylene tetrahydrofolate reductase, transforming growth factor-ß1 and lymphotoxin-α genes polymorphisms and susceptibility to rheumatoid arthritis / Polimorfismos dos genes metilenotetrahidrofolato redutase, fator de crescimento transformador β1 e linfotoxina-α e susceptibilidade à artrite reumatoide
Fonte: Rev. bras. reumatol;56(5):414-420, Sept.-Oct. 2016. tab, graf.
Idioma: en.
Resumo: ABSTRACT Background: Rheumatoid arthritis is a widely prevalent autoimmune disorder with suggested genetic predisposition. Objectives: The aim of this study is to detect the pattern of genetic polymorphism of methylene tetrahydrofolate reductase (MTHFR C677 T and A1298 C), transforming growth factor-β1 (TGF-β1 T869 C) and lymphotoxin-α (LT-α A252G) in patients having rheumatoid arthritis and correlate these patterns to disease activity and serum levels of tumor necrosis factor-alpha (TNF-α), B-Cell Activating Factor (BAFF), and osteopontin. Methods: A total of 194 subjects, 90 controls and 104 patients with rheumatoid arthritis were genotyped for MTHFR C677 T and A1298 C, TGF-β1 T869 C and LT-α A252G polymorphisms using a methodology based on PCR-RFLP. Also serum levels of TNF-α, osteopontin and BAFF were measured by ELISA kits. Results: The CT genotype and T allele of MTHFR C677 T and GG genotype and G allele of LT-α A252G are associated with the risk of RA and with higher levels of the pro-inflammatory cytokine, TNF-α in patients with rheumatoid arthritis. Conclusion: Our findings suggest that there is association between MTHFR C677 T and LT-α A252G genes polymorphisms and increased risk of RA in this sample of Egyptian population.

RESUMO Antecedentes: A artrite reumatoide é uma doença autoimune amplamente prevalente com sugerida predisposição genética. Objetivos: Detectar o padrão de polimorfismo dos genes metilenotetrahidrofolato redutase (MTHFR C677 T e A1298 C), fator de crescimento transformador β1 (TGF-β1 T869 C) e linfotoxina-α (LT-α A252G) em pacientes com artrite reumatoide e correlacionar esses padrões com a atividade da doença e os níveis séricos de fator de necrose tumoral alfa (TNF-α), fator ativador de linfócitos B (BAFF) e osteopontina. Métodos: Foram genotipados 194 indivíduos – 90 controles e 104 com artrite reumatoide – à procura de polimorfismos dos genes MTHFR C677 T e A1298 C, TGF-β1 T869 C e LT-α A252G com uma metodologia baseada na PCR-RFLP. Mensuraram-se também os níveis séricos de TNF-α, osteopontina e BAFF com kits de Elisa. Resultados: O genótipo CT e o alelo T do MTHFR C677 T e o genótipo GG e alelo G do LT-α A252G estão associados ao risco de AR e a níveis mais elevados da citocina pró-inflamatória TNF-α em pacientes com artrite reumatoide. Conclusão Os achados do presente estudo sugerem que há associação entre os polimorfismos dos genes MTHFR C677 T e LT-α A252G e um risco aumentado de AR nessa amostra da população egípcia.
Descritores: Artrite Reumatoide/genética
Linfotoxina-alfa/genética
Metilenotetra-Hidrofolato Redutase (NADPH2)/genética
Fator de Crescimento Transformador beta1/genética
-Artrite Reumatoide/epidemiologia
Fatores de Crescimento Transformadores
Predisposição Genética para Doença/genética
Polimorfismo de Nucleotídeo Único/genética
Egito
Limites: Humanos
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Amantea, Sergio Luis
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Id: biblio-886258
Autor: Silva, Samanta Sarmento da; Peterson, Guilherme Eckert; Amantéa, Sérgio Luis; Miorelli, Patrícia; Ulbrich, Jane Maria; Roesch, Eliane; Sanches, Paulo Roberto; Fraga, Jose Carlos.
Título: Transforming growth factor beta1 (TGF-ß1) levels in a rat model of induced pleural empyema
Fonte: Acta cir. bras;33(2):156-162, Feb. 2018. tab, graf.
Idioma: en.
Resumo: Abstract Purpose: To evaluate the concentration of transforming growth factor beta 1 (TGFB1) levels in a rat pleural effusion obtained by inoculation of intrapleural bacteria or turpentine through thoracentesis. Methods: Thirty-Nine Wistar rats were divided into three groups: Staphylococcus aureus (SA, n = 17); Streptococcus pneumoniae (SP, n = 12); and turpentine (control, n = 10). Pleural fluid was collected through ultrasound-guided thoracentesis 12 h, 24 h, and 36 h after instillation of bacteria or turpentine. Levels of TGFB1 were measured in pleural fluid. Results: At 12 h, mean TGFB1concentrations were 5.3450 pg/mL in the SA group, 5.3449 pg/mL in the SP group, and 5.3450 pg/mL in controls. At 24 h, they were 4.6700 pg/mL in the SA group, 4.6700 pg/mL in the SP group, and 4.6700 pg/mL in controls. At 36 h, they were 4.6699 pg/mL in the SA group and in control. No difference was observed among the groups in mean TGFB1concentration (p = 0.12); however, a significant intragroup reduction in mean TGFB1 was observed between 12 and 24 h (p < 0.01). Conclusion: The transforming growth factor beta 1 concentrations were not useful as a diagnostic tool or an early marker of infected pleural effusion.
Descritores: Derrame Pleural/diagnóstico
Empiema Pleural/diagnóstico
Fator de Crescimento Transformador beta1/análise
-Derrame Pleural/complicações
Bactérias/patogenicidade
Biomarcadores/análise
Empiema Pleural/complicações
Empiema Pleural/microbiologia
Ratos Wistar
Modelos Animais de Doenças
Limites: Animais
Masculino
Ratos
Responsável: BR1.1 - BIREME


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Id: biblio-886197
Autor: Zhang, Chong; Liu, Yu-Jie.
Título: Biomechanic and histologic analysis of fibroblastic effects of tendon to bone healing by transforming growth factor ß1 (TGF-ß1) in rotator cuff tears
Fonte: Acta cir. bras;32(12):1045-1055, Dec. 2017. graf.
Idioma: en.
Projeto: Hebei Province Science and Technology Project.
Resumo: Abstract Purpose: To evaluate the effect of transforming growth factor β1 (TGF-β1) on tendon-to-bone reconstruction of rotator cuff tears. Methods: Seventy-two rat supraspinatus tendons were transected and reconstructed in situ. At 8 and 16 weeks, specimens of three groups; that is control, L-dose (low dose), and H-dose (high dose) were harvested and underwent a biomechanical test to evaluate the maximum load and stiffness values. Histology sections of the tendon-to-bone interface were identified by hematoxylin-eosin or Masson trichrome stain. Collagen type III was observed by picric acid sirius red staining under polarized light. The level of insulin-like growth factor 1 (IGF-1) and vascular endothelial growth factor (VEGF) was measured by the enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) method. Results: Collagen type III of the H-dose group had a significant difference in histology structure compared with the L-dose group (P<0.05). The maximum load and stiffness decreased significantly in the control group compared with the values of the L-dose and H-dose groups. The stiffness among the three groups differed significantly at the same postoperative time (P<0.05). Interestingly, progressive reestablishment of collagen type III affected tendon-to-bone healing significantly in the later stages. Conclusion: The H-dose was associated with an increased collagen type III morphology stimulated by TGF-β1.
Descritores: Traumatismos dos Tendões/tratamento farmacológico
Cicatrização/fisiologia
Manguito Rotador/cirurgia
Fatores de Crescimento do Endotélio Vascular/metabolismo
Fator de Crescimento Transformador beta1/metabolismo
Lesões do Manguito Rotador/cirurgia
-Traumatismos dos Tendões/metabolismo
Resistência à Tração/fisiologia
Cicatrização/efeitos dos fármacos
Fenômenos Biomecânicos
Ensaio de Imunoadsorção Enzimática
Manguito Rotador/metabolismo
Ratos Sprague-Dawley
Colágeno Tipo III/metabolismo
Modelos Animais de Doenças
Elasticidade/fisiologia
Fator de Crescimento Transformador beta1/farmacologia
Força Muscular/fisiologia
Fibroblastos/efeitos dos fármacos
Fibroblastos/fisiologia
Lesões do Manguito Rotador/metabolismo
Limites: Animais
Masculino
Ratos
Responsável: BR1.1 - BIREME


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Id: biblio-886274
Autor: Wu, Jing; Pan, Lin; Jin, Xueqin; Li, Weihua; Li, Hongbing; Chen, Jianmao; Yang, Wen.
Título: The role of oxymatrine in regulating TGF-ß1 in rats with hepatic fibrosis
Fonte: Acta cir. bras;33(3):207-215, Mar. 2018. tab, graf.
Idioma: en.
Projeto: Ningxia Natural Science Foundation; . School Level Project of Ningxia Medical University.
Resumo: Abstract Purpose: To investigate whether oxymatrine (OMT) prevents hepatic fibrosis in rats by regulating liver transforming growth factor β1 (TGF-β1) level. Methods: Hepatic fibrosis was induced in rats by thioacetamide (TAA). Blood was collected at the end of week 12 to determine the levels of alanine aminotransferase (ALT), aspartate aminotransferase (AST), and glutathione (GSH). Changes in liver tissue were observed after hematoxylin-eosin (HE) staining. Results: Fibrosis was confirmed by Masson's collagen staining. Liver TGF-β1 level was determined by ELISA. OMT significantly reduced serum ALT and AST but increased GSH levels in rats with hepatic fibrosis. Moreover, it significantly improved liver histology in rats with TAA-induced hepatic fibrosis. It significantly decreased liver TGF-β1 level compared to that in the untreated group. It also significantly reduced collagen deposition in rats. Conclusion: Oxymatrine is effective in protecting rats from thioacetamide-induced hepatic fibrosis by regulating TGF-β1 expression.
Descritores: Quinolizinas/farmacologia
Substâncias Protetoras/farmacologia
Alcaloides/farmacologia
Fator de Crescimento Transformador beta1/metabolismo
Cirrose Hepática Experimental/prevenção & controle
-Aspartato Aminotransferases/sangue
Ratos Sprague-Dawley
Fator de Crescimento Transformador beta1/efeitos dos fármacos
Cirrose Hepática Experimental/induzido quimicamente
Cirrose Hepática Experimental/metabolismo
Limites: Animais
Masculino
Ratos
Responsável: BR1.1 - BIREME


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Id: biblio-989051
Autor: Zhang, Guangming; Cui, Guanghua; Tong, Shuangxi; Cao, Qingxian.
Título: Salvianolic acid A alleviates the renal damage in rats with chronic renal failure
Fonte: Acta cir. bras;34(2):e201900204, 2019. tab, graf.
Idioma: en.
Resumo: Abstract Purpose: To investigate the protective effects of salvianolic acid A (SAA) on renal damage in rats with chronic renal failure (CRF). Methods: The five-sixth nephrectomy model of CRF was successfully established in group CRF (10 rats) and group CRF+SAA (10 rats). Ten rats were selected as sham-operated group (group S), in which only the capsules of both kidneys were removed. The rats in group CRF+SAA were intragastrically administrated with 10 mg/kg SAA for 8 weeks. The blood urine nitrogen (BUN), urine creatinine (Ucr), creatinine clearance rate (Ccr), and serum uperoxide dismutase (SOD) and malondialdehyde (MDA) were tested. The expressions of transforming growth factor-β1 (TGF-β1), bone morphogenetic protein 7 (BMP-7) and Smad6 protein in renal tissue were determined. Results: After treatment, compared with group CRF, in group CRF+SAA the BUN, Scr, serum MDA and kidney/body weight ratio were decreased, the Ccr and serum SOD were increased, the TGF-β1 protein expression level in renal tissue was decreased, and the BMP-7 and Smad6 protein levels were increased (all P < 0.05). Conclusion: SAA can alleviate the renal damage in CRF rats through anti-oxidant stress, down-regulation of TGF-β1 signaling pathway and up-regulation of BMP-7/Smad6 signaling pathway.
Descritores: Ácidos Cafeicos/uso terapêutico
Proteína Smad6/metabolismo
Fator de Crescimento Transformador beta1/metabolismo
Proteína Morfogenética Óssea 7/metabolismo
Falência Renal Crônica/tratamento farmacológico
Lactatos/uso terapêutico
-Regulação para Baixo
Regulação para Cima
Ratos Sprague-Dawley
Modelos Animais de Doenças
Falência Renal Crônica/induzido quimicamente
Falência Renal Crônica/metabolismo
Testes de Função Renal
Nefrectomia
Limites: Animais
Masculino
Ratos
Responsável: BR1.1 - BIREME


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Id: biblio-837986
Autor: Gaspar, Neide Kalil.
Título: DHEA and frontal fibrosing alopecia: molecular and physiopathological mechanisms
Fonte: An. bras. dermatol;91(6):776-780, Nov.-Dec. 2016.
Idioma: en.
Resumo: Abstract The transforming growth factor-beta 1 (TGFβ1) promotes fibrosis, differentiating epithelial cells and quiescent fibroblasts into myofibroblasts and increasing expression of extracellular matrix. Recent investigations have shown that PPAR (peroxisome proliferator-activated receptor*) is a negative regulator of fibrotic events induced by TGFβ1. Dehydroepiandrosterone (DHEA) is an immunomodulatory hormone essential for PPAR functions, and is reduced in some processes characterized by fibrosis. Although scarring alopecia characteristically develops in the female biological period in which occurs decreased production of DHEA, there are no data in the literature relating its reduction to fibrogenic process of this condition. This article aims to review the fibrogenic activity of TGFβ1, its control by PPAR and its relation with DHEA in the frontal fibrosing alopecia.
Descritores: Desidroepiandrosterona/fisiologia
Alopecia/fisiopatologia
Alopecia/patologia
-Fibrose
PPAR gama/fisiologia
Alopecia/etiologia
Alopecia/terapia
Fator de Crescimento Transformador beta1/fisiologia
Fibroblastos/fisiologia
Fibroblastos/patologia
Líquen Plano/patologia
Limites: Humanos
Feminino
Tipo de Publ: Revisão
Responsável: BR1.1 - BIREME


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Id: biblio-840044
Autor: Shuiai, Zhao; Huijun, Shen; Weizhong, Gu; Aimin, Liu; Jianhua, Mao.
Título: Evaluation of TGF-beta1 and MCP-1 expression and tubulointerstitial fibrosis in children with Henoch-Schönlein purpura nephritis and IgA nephropathy: A clinical correlation
Fonte: Clinics;72(2):95-102, Feb. 2017. tab, graf.
Idioma: en.
Projeto: National Natural Foundation; . Specialized Research Fund for the Doctoral Program of Higher Education; . Natural Science Foundation of Zhejiang Province; . Medicine & Health Technology Innovation Project of Zhejiang Province.
Resumo: OBJECTIVES: Henoch-Schönlein purpura nephritis and immunoglobulin A nephropathy are two diseases with similar clinical presentations but very different prognoses. Transforming growth factor β1 and monocyte chemoattractant protein-1 have been associated with the development of tissue fibrosis. We examined the development of tubulointerstitial fibrosis and its relationship with Transforming growth factor β1 and monocyte chemoattractant protein-1 expression in these patients. METHODS: Renal tissue samples were collected by renal biopsy from 50 children with Henoch-Schönlein purpura nephritis and 50 children with immunoglobulin A nephropathy. Hematoxylin and eosin and Masson's trichrome-stained tissues were examined using light microscopy. Tubulointerstitial fibrosis was graded using the method described by Bohle et al. (1). The immunohistochemical detection of Transforming growth factor β1 and monocyte chemoattractant protein-1 expression was correlated with the tubulointerstitial fibrosis grade. Clinical Trial registration number: ZJCH-2012-0105. RESULTS: Transforming growth factor β1 and monocyte chemoattractant protein-1 expression in the renal tissues was significantly greater in the patients with immunoglobulin A nephropathy than in the patients with Henoch-Schönlein purpura nephritis (both p<0.001). The immunoglobulin A nephropathy patients had a higher tubulointerstitial fibrosis grade than the Henoch-Schönlein purpura nephritis patients (p<0.001). The tubulointerstitial fibrosis grade was in accordance with the Transforming growth factor β1 and monocyte chemoattractant protein-1 expression levels in both diseases (both p<0.001). CONCLUSION: Transforming growth factor β1 and monocyte chemoattractant protein-1 expression was associated with the development of immunoglobulin A nephropathy and Henoch-Schönlein purpura nephritis. Further studies are needed to better evaluate this association.
Descritores: Púrpura de Schoenlein-Henoch/metabolismo
Quimiocina CCL2/metabolismo
Fator de Crescimento Transformador beta1/metabolismo
Glomerulonefrite por IGA/metabolismo
Túbulos Renais/metabolismo
-Prognóstico
Púrpura de Schoenlein-Henoch/patologia
Fibrose
Glomerulonefrite por IGA/patologia
Túbulos Renais/patologia
Limites: Humanos
Masculino
Feminino
Pré-Escolar
Criança
Adolescente
Tipo de Publ: Estudo de Avaliação
Responsável: BR1.1 - BIREME


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Id: lil-778362
Autor: Marques, Ana Paula L; Botteon, Rita de Cássia C. M; Cordeiro, Matheus D; Machado, Carlos H; Botteon, Paulo de Tarso L; Barros, Janne P. N. de; Spíndola, Bruno F.
Título: Padronização de técnica manual para obtenção de plasma rico em plaquetas de bovino / Standardization of manual technique for obtaining platelet-rich plasma in cattle
Fonte: Pesqui. vet. bras = Braz. j. vet. res;34(supl.1):1-6, dez. 2014. tab, graf, ilus.
Idioma: pt.
Resumo: Para padronização de uma técnica manual para a obtenção de plasma rico em plaquetas (PRP) autólogo em bovinos com custo reduzido (método manual) e de boa qualidade (capacidade de concentrar plaquetas, alta concentração de fatores de crescimento e contaminação reduzida com leucócitos e eritrócitos), que poderá ser utilizado como um agente modulador da resposta imune de vacas com diferentes enfermidades, 450 ml de sangue total de nove vacas clinicamente saudáveis e com perfil hematológico normal foi coletado em bolsas de sangue CPDA-1 e processado dentro de quatro horas após a coleta. O sangue foi separado em alíquotas para avaliar 8 protocolos (P) de centrifugação dupla que variaram quanto a velocidade e o tempo de centrifugação. A contagem de plaquetas, eritrócitos e leucócitos na suspensão obtida (PRP) foi realizada pelo método manual em câmara de Neubauer: P5 (400g e 800g ambos durante 10 min) foi o protocolo com maior número de plaquetas, seguido por P3 (120g e 473g ambos durante 10 min), P4 (300g e 640g durante 10 min cada), P6 (640g durante 10 min e 640g durante 5 min), P8 (640g durante 5 min e 120g durante 10 min) e P7 (720g e 720g durante 5 min) e diferentes (p<0,05) dos menores valores encontrados em P1 (120g e 240g, ambos por 5 minutos) e P2 (120g e 473g ambos por 5 min). Em relação aos eritrócitos, P8, P7, P6, P5 e P4 apresentaram menores concentrações e maiores valores (p<0,05) foram observados em P3 e P2. Menores quantidades de leucócitos foram observadas em P5, P6, P8 e P7 com o maior valor obtido em P2 (p<0,05). Todos os protocolos (P1 a P8) foram eficientes em concentrar plaquetas sendo o valor mais baixo (3,65±0,79) observado em P1. Em relação aos fatores de crescimento ao se mensurar TGF- 1, os protocolos P1 e P8 evidenciaram valores mais elevados. De acordo com os resultados obtidos os protocolos P5 e P8 apresentaram os melhores resultados para confecção de PRP bovino.(AU)

For standardization of manual technique to obtain autologous platelet-rich plasma (PRP) in cattle with reduced cost (manual method) and good quality (ability to concentrate platelets, high level of growth factors and reduced contamination with leukocytes and erythrocytes), that may be used as a modulating agent of the immune response of cows chronically infected with various diseases, 450ml of whole blood from nine clinically and hematologically healthy cattle were collected in CPDA-1 bags and processed within four hours after collection. The blood was divided in aliquots to evaluate 8 protocols (P) of double centrifugation which varied as the speed and time of centrifugation. Platelet, erythrocytes and leukocytes counts in PRP were performed by manual method in a Neubauer chamber. The highest concentration of platelets was obtained in P5 (400g and 800g both for 10 min), followed by (p>0.05) P3 (120g e 473g ambos durante 10 min), P4 (300g e 640g durante 10 min cada), P6 (640g durante 10 min e 640g durante 5 min), P8 (640g durante 5 min e 120g durante 10 min) and P7 (720g and 720g both for 5 min) and different (p <0.05) than the protocols that had lower rates at P1 (120g to 240g, both for 5 minutes) and P2 (both 120g and 473g for 5 min). As for erythrocytes, P8, P7, P6, P5, P4 showed lower concentrations with higher values (p <0.05) observed in P3 and P2. Lesser values of leukocytes were found in P5, P6, P7 and P8 with the biggest value (p <0.05) obtained in P2. All protocols (P1 to P8) were efficient to concentrate platelets and the lowest value (3.65±0.79) was found in P1. Regarding TGF-ß1, the P1 and P8 protocols demonstrated the highest values. According to results, P5 and P8 protocols showed the best results for production of PRP in bovine.(AU)
Descritores: Técnicas e Procedimentos Diagnósticos/veterinária
Plasma Rico em Plaquetas
Fator de Crescimento Transformador beta1
Terapia Baseada em Transplante de Células e Tecidos/veterinária
Limites: Animais
Bovinos
Responsável: BR68.1 - Biblioteca Virginie Buff D'Ápice


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Id: biblio-966983
Autor: Alonso-Goulart, Vivian; Oliveira, Bárbara Cândido de; Silva, Yasmin Twanne de Cássia; Silva, Jéssica Regina Costa; Duarte, Cristiane Angélico; Lima, Isabela Lemos de.
Título: IL-10 and TGF-ß1 evaluation in 3D human adipose-derived mesenchymal stem cells culture and hypoxic condition / Avaliação de IL-10 e TGF- ß 1 sob condições de hipóxia em cultivo celular 3D de células-tronco mesenquimais de tecido-adiposo humano
Fonte: Biosci. j. (Online);34(3):719-726, mai/jun. 2018. graf.
Idioma: en.
Resumo: Mesenchymal stem cells (MSC) are multipotent cells derived from layer mesoderm and that have potential for self-renewal and cellular differentiation. These cells can be extracted from various tissues, being the main sources the bone marrow (BM) and adipose tissue (AT). Therefore, human Adipose-derived Mesenchymal Stem Cells (AdMSCs) are potentially able to differentiate in several cell types such as neurons, adipocytes and osteoblasts. The objective of this work was to quantify levels of the cytokines TGF-1 and IL-10 in the conditioned medium (CM) of AdMSCs c u l t i v a t e d in 2D and 3D culture after the induction of hypoxia by Cobalt chloride chemistry (CoCl2). When the AdMSCs reached 80% of confluence, the cells were transferred to t h e 24 plates wells, where they were treated with CoCl2 in 2D and 3D culture. Quantification assay was made using human TGF-1 and IL- 10 kits. The analysis was done through the sandwich ELISA assay. The IL-10 and TGF-1 production have increased when the AdMSCs were in three-dimensional culture and under hypoxic conditions, indicating that supplies of oxygen associated to the 3D culture influenced significantly the production of these cytokines. This can be a potent and low-cost strategy to improve Adipose-derived Stem Cells conditioned medium when it comes to the release of IL-10 and TGF- cytokines.

Células-tronco mesenquimais (CTMs) são células multipontes derivadas da camada mesoderma e que possuem potenciais de auto-renovação e diferenciação celular. Estas células podem ser extraídas de diversos tecidos, sendo as principais fontes a medula óssea (MO) e o tecido adiposo (TA). Assim, CTM-TA são potencialmente capazes de se diferenciarem em diversos tipos celulares como adipócitos, neurônios e osteoblastos através de ações parácrinas do microambiente de cultivo. Este trabalho teve como objetivo dosar os níveis das citocinas TGF- e IL-10 no meio condicionado de CTM-TA cultivadas em 2D e 3D após a indução de hipóxia química por Cloreto de Cobalto (CoCl2). As CTM-TA foram cultivadas até atingirem a confluência de 80% e em seguida foram transferidas para placas de 24 poços, onde foram tratadas com meio indutor de hipóxia em cultivos realizados em 2D e 3D. A quantificação foi realizada utilizando os kits TGF-1 e IL10 humanos. Nas análises foi utilizado o ensaio ELISA sanduíche. Os resultados mostraram que a produção de citocinas IL10 e TGF- aumentaram quando o cultivo celular foi tridimensional em condições de hipóxia, indicando que os fornecimentos de oxigênio associado ao cultivo em 3D influenciaram de maneira significativa na produção de tais citocinas. Esta pode ser uma estratégia potente e de baixo custo para aumentar a liberação TGF- e IL- 10 no meio condicionado de CTM-TA.
Descritores: Tecido Adiposo
Citocinas
Interleucina-10
Fator de Crescimento Transformador beta1
Células-Tronco Mesenquimais
-Hipóxia Celular
Técnicas de Cultura de Células
Responsável: BR396.1 - Biblioteca Central


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Id: biblio-998850
Autor: de Paula, Gabriella Christina Gonçalves Manini.
Título: Produção da proteína recombinante humana TGF-ß1 (fator do crescimento transformante beta 1) em células de mamífero / Production of recombinant human protein TGF-ß1 (Transforming Growth Factor Beta 1) in mammalian cells.
Fonte: São Paulo; s.n; 2018. 93 p. tab, ilus, graf.
Idioma: pt.
Tese: Apresentada a Universidade de São Paulo. Instituto de Química para obtenção do grau de Mestre.
Resumo: O fator de crescimento transformante beta tipo 1, TGF-ß1, é uma proteína extracelular homodimérica secretada por vários tipos celulares, que pode ter ação parácrina ou endócrina. Essa proteína está envolvida em processos celulares de diferenciação, proliferação, mobilidade e formação de matriz extracelular. Além disso, é parte importante dos processos de regeneração tecidual, atuando, de maneira decisiva, no reparo, atraindo macrófagos e fibroblastos para o local da injúria e estimulando a angiogênese. Assim, considerando o papel desse peptídeo no processo regenerativo, o uso de TGF-ß1 como proteína terapêutica na área de Bioengenharia Tecidual é bastante promissor. Apesar disso, a venda dessa proteína, para fins terapêuticos, é inexistente no mercado e a proteína recombinante vendida, que só pode ser utilizada em pesquisas científicas, não é produzida nacionalmente e chega a custar R$200.000,00/mg. Nesse contexto, o objetivo do presente trabalho é desenvolver uma metodologia de produção do fator recombinante TGF-ß1 em células de ovário de hamster chinês (CHO), visando à obtenção de níveis altos de rendimento, e, futuramente, a transferência da tecnologia de produção para a iniciativa privada, tornando possível seu uso na Medicina Regenerativa, sozinho ou em combinação com outros fatores de crescimento. O cDNA de TGF-ß1 foi amplificado a partir de um banco de cDNA humano e clonado no vetor proprietário pNU1 de expressão de mamífero. A construção pNU1/TGF-ß1 foi utilizada para transfectar estavelmente células CHO DG44 e uma estratégia de co-amplificação foi utilizada para selecionar células transfectantes com maior número de cópias da sequência correspondente a TGF-ß1. Estas culturas foram submetidas ao processo de amplificação gênica com concentrações crescentes de metotrexato. Ensaios de Western Blot e ELISA foram realizados utilizando-se o meio condicionado pelas populações selecionadas e por clones superprodutores. Entre os 41clones obtidos, cinco apresentaram maiores níveis de produção de TGF-ß1, entre 1.000 e 2.000 ng/mL. Estes clones foram selecionados para a realização de testes de atividade in vitro utilizando-se células A549, que permitem avaliar a transição epitélio-mesênquima. Um ensaio de cicatrização de feridas em peles do dorso de camundongos foi padronizado e utilizado para avaliar a atividade in vivo do clone que apresentou melhor resultado in vitro. A proteína TGF-ß1 foi parcialmente purificada por HPLC em uma coluna de afinidade. Portanto, a proteína TGF-ß1 humana recombinante foi produzida, apresentando atividade biológica in vitro e in vivo, sendo capaz de reparar eficientemente feridas cutâneas. Essa iniciativa pode oferecer aos pacientes uma alternativa para o tratamento de lesões teciduais, acelerando a cicatrização de feridas e o reparo de tecidos

The transforming growth factor beta 1, TGF-ß1, is a homodimeric extracellular protein secreted by several cell types, which may have paracrine or endocrine action. This protein is involved in cellular processes of differentiation, proliferation, mobility and formation of extracellular matrix. In addition, it is an important part of the tissue regeneration processes, acting decisively on repair, attracting macrophages and fibroblasts to the site of injury and stimulating angiogenesis. Therefore, considering the role of this peptide in the regenerative process and the use of TGF-ß1 as a therapeutic protein in the field of Tissue Bioengineering is very promising. Despite this, the sale of this protein for therapeutic purposes is nonexistent in the market and the recombinant protein available in the market, which can only be used in scientific research, is not produced nationally and the costs are in the order of R$ 200,000.00/mg. In this context, the objective of the present work is to develop a methodology for the production of the TGF-ß1 recombinant factor in Chinese hamster ovary (CHO) cells, aiming at obtaining high yields, and, in the future, transfering the production technology to the private initiative, allowing its use in Regenerative Medicine, alone or in combination with other growth factors. The TGF-ß1 cDNA was amplified from a human cDNA library and cloned into the proprietary pNU1 mammalian expression vector. The pNU1/TGF-ß1 construct was used to stably transfect CHO DG44 cells, and a co-amplification strategy was used to select transfectant cells with the largest number of gene copies. These cultures were subjected to the process of gene amplification with methotrexate. Western Blot and ELISA were used to assay the conditioned medium obtained from the selected cell populations and from overproducing cell clones. Among the 41 clones obtained, five presented higher levels of TGF-ß1 production, between 1,000 and 2,000 ng/mL. These clones were selected for in vitro activity testing using A549 cells to evaluate the epithelial-mesenchymal transition. Awound healing assay on mouse dorsal skin was standardized and used to evaluate the in vivo activity of the cell clone which displayed the highest result in vitro. The TGF-ß1 protein was partially purified by HPLC on an affinity column. Therefore, the recombinant human TGF-ß1 protein was produced and shown to display biological activity both in vitro and in vivo, being able to eficiently repair cutaneous wounds. This initiative may provide patients with an alternative treatment for tissue damage, accelerating wound healing and tissue repair
Descritores: Células CHO/citologia
Produção de Substâncias, Produtos e Materiais
Medicina Regenerativa/classificação
Fator de Crescimento Transformador beta1/agonistas
Mamíferos
-Técnicas In Vitro
Ensaio de Imunoadsorção Enzimática/estatística & dados numéricos
Western Blotting/estatística & dados numéricos
Cromatografia Líquida de Alta Pressão/instrumentação
Limites: Animais
Camundongos
Responsável: BR40.1 - DBD - Divisão de Biblioteca e Documentacão do Conjunto das Químicas
BR40.1; T574.88, D324p. 30100026177-Q



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