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Id: biblio-883615
Autor: Teixeira, André Azevedo Reis.
Título: Reconhecimento molecular na doença de chagas do ponto de vista do parasita e do hospedeiro / Molecular recognition in Chagas disease from the point of view of the parasite and the host.
Fonte: São Paulo; s.n; 2017. 117 p. graf, tab, ilus.
Idioma: pt.
Tese: Apresentada a Universidade de São Paulo. Instituto de Química para obtenção do grau de Doutor.
Resumo: A doença de Chagas, causada pelo parasita protozoário Trypanosoma cruzi, afeta milhões de pessoas, a maioria delas vivendo na América latina. Apesar dos avanços da medicina e da biotecnologia, ainda existem poucas opções de tratamento para indivíduos com a doença. Assim, é importante compreendermos os detalhes moleculares da infecção parasitária, para que novas alternativas terapêuticas e de diagnóstico possam ser desenvolvidas para esses pacientes. Neste trabalho estudamos esta doença em duas frentes, uma do ponto de vista do parasita, e a outra, da resposta do hospedeiro. Utilizando bioinformática, identifcamos um peptídeo conservado (denominado TS9) presente nas proteínas de superfície gp85/transsialidases do parasita. Este peptídeo é capaz de promover adesão celular e, na sua forma sintética, inibe a entrada do T. cruzi na célula hospedeira. Análise da estrutura proteica revelou que o peptídeo TS9 encontra-se num domínio do tipo laminina-G, lado-a-lado com o peptídeo FLY, outro peptídeo conservado desta grande família, previamente descrito pelo nosso grupo. Juntos, eles formam um sítio de adesão a citoqueratinas e proteínas de flamento intermediário. Na segunda parte, investigamos os antígenos e epítopos reconhecidos pelas imunoglobulinas de pacientes portadores da doença nas suas diferentes formas clínicas: assintomática e cardiomiopatias, leve ou grave. Criamos uma biblioteca de phage display contendo, virtualmente, todos os fragmentos proteicos existentes no T. cruzi, que foi varrida contra imunoglobulinas para a construção de um mapa da resposta humoral dos pacientes com a doença de Chagas. Nossos resultados mostram que a resposta dos pacientes é complexa, e mais de dois mil epítopos foram mapeados. Muitos deles, como os antígenos B13, SAPA e FRA já foram previamente descritos, validando nosso método. Porém, um grande número de novos epítopos, inclusive contra proteína descritas como hipotéticas ou sem função conhecida, também foram encontrados. Seus papéis na infecção e resposta imune da doença merecem, portanto, atenção. Em resumo, as abordagens e técnicas utilizadas nesta tese são inovadoras, e permitiram a identificação de peptídeos e moléculas que poderão ser úteis para o desenvolvimento de novos métodos diagnósticos e terapêuticos para a doença de Chagas

Chagas disease, caused by the protozoan parasite Trypanosoma cruzi, afects millions of people, most of them living in Latin America. Despite advances in medicine and biotechnology, there are still few treatment options for individuals with the disease. Thus, it is important to understand the molecular details of the parasitic infection, so that new therapeutic and diagnostic alternatives can be developed for these patients. In this work, we study this disease in two fronts, one from the point of view of the parasite, and the other, of the response of the host. Using bioinformatics, we identifed a conserved peptide (called TS9) present in the surface proteins gp85 / trans-sialidases of the parasite. This peptide is capable of promoting cell adhesion and, in its synthetic form, inhibits the entry of T. cruzi into the host cell. Analysis of the protein structure revealed that the TS9 peptide is in a laminin-G-like domain, side-by-side with the peptide FLY, another conserved peptide of this large family, previously described by our group. Together, they form an adhesion site to cytokeratins and intermediate flament proteins. In the second part, we investigated the antigens and epitopes recognized by the immunoglobulins of patients with the disease in their diferent clinical forms: asymptomatic and cardiomyopathies, mild or severe. We created a phage display library containing virtually all existing protein fragments in T. cruzi. This library was screened against immunoglobulins for the construction of a humoral response map of patients with Chagas disease. Our results show that the response of the patients is complex, and more than 2,000 epitopes have been mapped. Many of them, such as the B13, SAPA and FRA antigens have been previously described, validating our method. However, a large number of new epitopes, including many against proteins described as hypothetical or with no known function, were also found. Their roles in infection and immune response of the disease deserve, therefore, attention. In summary, the approaches and techniques used in this thesis are innovative and have allowed the identifcation of new peptides and molecules that may be useful for the development of new diagnostic and therapeutic methods for Chagas disease
Descritores: Doença de Chagas/diagnóstico
Doença de Chagas/prevenção & controle
-56729/fisiologia
Mapeamento de Epitopos/métodos
Biblioteca de Peptídeos
Bacteriófagos
Western Blotting/métodos
Trypanosoma cruzi/metabolismo
Metodologia
Responsável: BR40.1 - DBD - Divisão de Biblioteca e Documentacão do Conjunto de Químicas
BR40.1. 30100026042-Q, T266r; T 574.88


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Id: biblio-871609
Autor: Beppler, Jaqueline.
Título: Identificação de peptídeos de Escherichia coli capazes de inibir a própria fagocitose em sepse / Identification of Escherichia coli peptides that can inhibit its own phagocytosis in sepsis.
Fonte: São Paulo; s.n; 2015. [103] p. ilus, tab, graf.
Idioma: pt.
Tese: Apresentada a Universidade de São Paulo. Faculdade de Medicina para obtenção do grau de Doutor.
Resumo: Introdução: Sepse é uma síndrome complexa definida por resposta inflamatória sistêmica, de origem infecciosa e caracterizada por manifestações múltiplas que podem determinar disfunção ou falência de um ou mais órgãos ou sistemas. É a principal causa de morte em unidades de terapia intensiva em pacientes críticos e tem representado uma fonte constante de preocupação para os sistemas de saúde em todo o mundo, devido, principalmente, às taxas elevadas de morbimortalidade. O tratamento da sepse é um desafio e continua a ser uma tarefa difícil devido a inúmeros fatores interferentes. Um estudo do nosso grupo demonstrou que a Escherichia coli (E. coli) é capaz de se ligar CD16 de um modo independente de opsonina, levando a um aumento na resposta inflamatória e a inibição da sua própria fagocitose, por conseguinte, procurou-se identificar os peptídeos no proteoma da E. coli envolvidos neste cenário. Metodologia: Utilizando a metodologia de Phage Display, que consiste numa técnica de clonagem, que permite a expressão de diversas sequências de peptídeos na superfície de bacteriófagos, nós identificamos 2 peptídeos que obtiveram interação com CD16. Após a seleção dos peptídeos identificamos uma proteína de membrana de E.coli que possui alta similaridade com um de nossos peptídeos selecionados. Nós acreditamos que esta proteína de membrana possa estar envolvida no processo de evasão imune desenvolvida pela E.coli e parece ser um forte candidato como uma nova opção terapêutica para controlar infecções por E. coli. Conclusão: A identificação de proteínas capazes de induzir inibição de fagocitose, através do receptor CD16, pode ser usada como uma nova forma de tratamento da sepse, assim como explorada no tratamento de doenças autoimunes.

Introduction: Sepsis is a complex syndrome defined by a systemic inflammatory response of infectious origin and characterized by multiple manifestations that can determine dysfunction/failure of one or more organs and systems. It is the leading cause of death in intensive care units and represents a major health problem around the world, mainly due to its high mortality and morbidity rates. The treatment of sepsis is challenging and remains a difficult task due to numerous interfering factors. A study from our group demonstrated that Escherichia coli (E. coli) is able to bind CD16 in an opsoninindependent manner, leading to an increase in the inflammatory response and inhibition of its own phagocytosis, therefore we sought to identify the peptides in the E. coli proteome involved in this scenario. Methods and Results: Using the Phage Display technique, which is a cloning technique that allows the expression of various peptide sequences on the surface of bacteriophages (phages) and selecting these on the basis of affinity for a target molecule, we identified two peptides that interact with CD16. Next, using bioinformatic tools, we found an E. coli membrane protein that has high similarity with one of our selected peptides. We believe this membrane protein is involved in the process of immune evasion developed by E. coli and it is a strong candidate as a new therapeutic option to control E. coli infections. Conclusion: The identification of proteins capable of inducing inhibition of phagocytosis through the CD16 receptor, can be used as a new treatment of sepsis, as well as exploited in the treatment of autoimmune diseases.
Descritores: Sepse
Receptores de IgG
Inflamação
Fagocitose
Escherichia coli
Biblioteca de Peptídeos
Receptores Fc
Imunoglobulina G
Síndrome de Resposta Inflamatória Sistêmica
Responsável: BR66.1 - Divisão de Biblioteca e Documentação
BR66.1


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Id: lil-731287
Autor: Val, Luciane Ferreira do; Nichiata, Lucia Yasuko Izumi.
Título: Comprehensiveness and programmatic vulnerability to stds/hiv/aids in primary care / La integralidad y vulnerabilidad programática de las ets/vih/sida en la atención básica / A integralidade e a vulnerabilidade programática às DST/HIV/AIDS na Atenção Básica
Fonte: Rev. Esc. Enferm. USP;48(spe):145-151, 08/2014. tab.
Idioma: en.
Projeto: FAPESP.
Resumo: 


This study aimed to identify programmatic vulnerability to STDs/HIV/AIDS in primary health centers (PHCs). This is a descrip - tive and quantitative study carried out in the city of São Paulo. An online survey was applied (FormSUS platform), involving administrators from 442 PHCs in the city, with responses received from 328 of them (74.2%), of which 53.6% were nurses. At - tention was raised in relation to program - matic vulnerability in the PHCs regarding certain items of infrastructure, prevention, treatment, prenatal care and integration among services on STDs/HIV/AIDS care. It was concluded that in order to reach comprehensiveness of actions for HIV/ AIDS in primary health care, it is necessary to consider programmatic vulnerability, in addition to more investment and reor - ganization of services in a dialogue with the stakeholders (users, multidisciplinary teams, and managers, among others).


.

Objetivo Fue identificar la vulnerabilidad programática de las Unidades Básicas de Salud con la atención a las ETS/VIH/SIDA. Método Es un estudio descriptivo con un abordaje cuantitativo llevado a cabo en el Municipio de San Pablo. Fue utilizado un formulario online (el FormSUS) con los gerentes de las 442 Unidades Básicas de Salud del Municipio de San Pablo. Participaran en el estudio 74.2% de los gerentes, estos 53.6% eran enfermeros. Resultados Se destaca la vulnerabilidad programática de las Unidades Básicas de Salud en relación a algunos elementos de la infraestructura, acciones de prevención, tratamiento, prenatal y la integración entre los servicios en la atención a las ETS/VIH/SIDA. Conclusión La construcción de tales marcadores constituye un instrumento, presentado en otro artículo, el cual puede ayudar a apoyar la captura de vulnerabilidades de las mujeres en relación a las ETS/VIH en el contexto de los servicios de Atención Primaria de Salud. Los marcadores constituyen importante herramienta para operacionalizar el concepto de vulnerabilidad en la Atención Primaria. Además, promueven procesos de trabajo inter e multidisciplinar e inter e multisectorial. La propuesta de un instrumento basado en dichos marcadores puede apoyar la captura de la vulnerabilidad de las mujeres en relación a las ETS/VIH. .

Objetivo Identificar a vulnerabilidade programática às DST/HIV/aids na Atenção Básica para o enfrentamento do HIV/Aids. Método Estudo descritivo, com abordagem quantitativa, realizado no Município de São Paulo (MSP). Utilizou-se formulário online (FormSUS), com gerentes das 442 Unidades Básicas de Saúde (UBS) do MSP. Participaram do estudo 74,2% gerentes, dos quais 53,6% eram enfermeiros. Resultados Destaca-se a vulnerabilidade programática nas UBS com relação a alguns itens de infraestrutura, ações de prevenção, de tratamento, no pré-natal e de integração entre os serviços na atenção às DST/HIV/aids. Conclusão Para a efetivação da integralidade no enfrentamento do HIV/aids na Atenção Básica é necessário atentar para a vulnerabilidade programática, além de mais investimentos e reorganização dos serviços, num diálogo com os atores sociais envolvidos (usuários, equipe multiprofissional, gerentes, gestores, entre outros).


 .
Descritores: Anticorpos Monoclonais/genética
Anticorpos Antineoplásicos/genética
Região Variável de Imunoglobulina/genética
-Especificidade de Anticorpos
Antígenos de Neoplasias
Neoplasias Colorretais/imunologia
Fixadores
Biblioteca de Peptídeos
Neoplasias Gástricas/imunologia
Células Tumorais Cultivadas
Limites: Humanos
Tipo de Publ: Research Support, Non-U.S. Gov't
Responsável: BR1.1 - BIREME


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Texto completo SciELO Brasil
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Id: lil-658919
Autor: Zhang, Xiaoli; Han, Xiaoxu; Dai, Di; Mingjia, Bao; Zhang, Zining; Zhang, Min; Bice, Tristan; Zhao, Min; Cao, Yaming; Shang, Hong.
Título: Mimotopes selected by biopanning with high-titer HIV-neutralizing antibodies in plasma from Chinese slow progressors
Fonte: Braz. j. infect. dis;16(6):510-516, Nov.-Dec. 2012. ilus, tab.
Idioma: en.
Projeto: Mega-projects of Science Research; . National Natural Science Funds.
Resumo: OBJECTIVE: One approach to identifying HIV-1 vaccine candidates is to dissect the natural antiviral immune response in treatment-naïve individuals infected for over ten years, considered slow progressor patients (SPs). It is suspected that SP plasma has strongly neutralizing antibodies (NAb) targeting specific HIV viral epitopes. METHODS: NAbs levels of 11 HIV-1-infected SPs were detected by PBMC-based neutralization assays. To investigate SP NAb epitope, this study used a biopanning approach to obtain mimotopes of HIV-1 that were recognized by SP plasma NAbs. IgG was purified from hightiter NAb SP plasma, and used as the ligand for three rounds of biopanning to select HIV-specific mimotopes from a phage-displayed random peptide library. Double-antibody sandwich ELISA, competitive inhibition assays, and peptide sequence analysis were used to evaluate the characteristics of phage-borne mimotopes. RESULTS: SPs had significantly more plasma neutralizing activity than typical progressors (TPs) (p = 0.04). P2 and P9 plasma, which have highest-titer HIV-NAb, were selected as ligands for biopanning. After three rounds of biopanning, 48 phage clones were obtained, of which 22 clones were consistent with requirement, binding with HIV-1 positive plasma and unbinding with HIV-1 negative plasma. Compared with linear HIV-1 protein sequence and HIV-1 protein structure files, only 12 clones were possible linear mimotopes of NAbs. In addition, the C40 clone located in gp41 CHR was found to be a neutralizing epitope, which could inhibit pooled HIV-1 positive plasma reaction. CONCLUSION: Biopanning of serum IgG can yield mimotopes of HIV-1-related antigen epitopes. This methodology provides a basis for exploration into HIV-1-related antigen-antibody interactions and furthers NAb immunotherapy and vaccine design.
Descritores: Anticorpos Neutralizantes/imunologia
Epitopos/imunologia
Anticorpos Anti-HIV/imunologia
Infecções por HIV/imunologia
HIV-1
-China
Reações Cruzadas
Ensaio de Imunoadsorção Enzimática
/imunologia
HIV ENVELOPE PROTEIN GPACETYLCYSTEINE/imunologia
/imunologia
HIV ENVELOPE PROTEIN GPABSCESS/imunologia
Biblioteca de Peptídeos
Limites: Humanos
Tipo de Publ: Research Support, Non-U.S. Gov't
Responsável: BR1.1 - BIREME


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Texto completo SciELO Brasil
Almeida, Juliana Franco
Szabó, Matias Pablo Juan
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Id: lil-606763
Autor: Prudencio, Carlos Roberto; Nascimento, Rafael; Marchiori Filho, Moacir; Marra, Andrea de Oliveira Marques; Souza, Guilherme Rocha Lino de; Almeida, Juliana Franco; Cardoso, Rone; Szabó, Matias Pablo Juan; Goulart, Luiz Ricardo.
Título: In silico analysis for identification of tick phagotopes selected by phage-displayed libraries / Análises in sílico na identificação de fagotopos de carrapatos selecionados por bibliotecas de phage display
Fonte: Rev. bras. parasitol. vet;18(1):39-41, Mar. 2009. tab.
Idioma: en.
Resumo: Phage display techniques have been widely employed to map epitope structures which have served as the basis for developing molecular vaccines. We have applied this technique to map specific epitopes of Rhipicephalus (Boophilus) microplus. In the present study, we have identified the potential immunogens using a process in which the selected phage clones were analyzed through bioinformatics, prior to final field tests. The present study demonstrates the feasibility of identifying important R. (B.) microplus phagotopes for vaccine development through screening of phage-displayed random peptide libraries and bioinformatics tools.

Técnicas de phage display têm sido amplamente empregadas para o mapeamento de epítopos os quais tem servido como base para o desenvolvimento de vacinas moleculares. Esta técnica foi aplicada no mapeamento de epítopos do Rhipicephalus (Boophilus) microplus. Neste estudo, potenciais imunógenos foram identificados pela adoção de um processo em que os clones de fagos foram analisados por bioinformática, previamente à realização dos testes. Os resultados demonstraram a possibilidade da identificação de importantes mimetopos do R. (B.) microplus para o desenvolvimento de vacinas através da seleção de bibliotecas de phage display associada à análise de bioinformática.
Descritores: Biblioteca de Peptídeos
Carrapatos/classificação
Limites: Animais
Tipo de Publ: Research Support, Non-U.S. Gov't
Responsável: BR1.1 - BIREME


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Texto completo SciELO Brasil
Cotrim, Paulo Cesar
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Id: lil-454767
Autor: Valli, Luiz Carlos Pedrosa; Kanamura, Herminia Yohko; Cotrim, Paulo Cesar; Oliveira, Guilherme Correa; Oliveira, Edward José de.
Título: Characterization of a clone from an adult worm cDNA library selected with anti-Schistosoma mansoni human antibodies dissociated from immune complexes: a preliminary report
Fonte: Rev. Inst. Med. Trop. Säo Paulo;49(3):187-189, May-June 2007. tab, graf.
Idioma: en.
Resumo: Considering the scarcity of defined antigens, actually useful and reliable for use in the field studies, we propose an alternative method for selection of cDNA clones with potential use in the diagnosis of schistosomiasis. Human antibodies specific to a protein fraction of 31/32 kDa (Sm31/32), dissociated from immune complexes, are used for screening of clones from an adult worm cDNA library. Partial sequencing of five clones, selected through this strategy, showed to be related to Schistosoma mansoni: two were identified as homologous to heat shock protein 70, one to glutathione S-transferase, one to homeodomain protein, and one to a previously described EST (expressed sequence tag) of S. mansoni. This last clone was the most consistently reactive during the screening process with the anti-Sm31/32 antibodies dissociated from the immune complexes. The complete sequence of this clone was obtained and the translation data yielded only one ORF (open reading frame) that code for a protein with 57 amino acids. Based on this amino acid sequence two peptides were chemically synthesized and evaluated separately against a pool of serum samples from schistosomiasis patients and non-schistosomiasis individuals. Both peptides showed strong reactivity only against the positive pool, suggesting that these peptides may be useful as antigens for the diagnosis of schistosomiasis mansoni.

Considerando a escassez de antígenos quimicamente definidos, realmente úteis e confiáveis para aplicação na soroepidemiologia da esquistossomose em larga escala, foi proposto, neste trabalho, um método alternativo para a seleção de clones de cDNA que expressam proteínas com putativo potencial diagnóstico na esquistossomose. Empregando anticorpos específicos contra uma fração proteica de 31/32 kDa (Sm31/32), purificados através da dissociação de imunocomplexos, foram selecionados cinco clones de cDNA a partir de genoteca de verme adulto de Schistosoma mansoni. O seqüenciamento parcial destes clones demonstrou que todos eram relacionados ao S. mansoni: dois apresentaram homologia com a proteína de choque térmico de 70 kDa e os demais com glutationa S-transferase, "homeodomain protein" e uma etiqueta de seqüência expressa (EST). Este último foi o clone que melhor reagiu, durante o processo de seleção, com os anticorpos anti-Sm31/32 dissociados de imunocomplexos. Baseado na seqüência de aminoácidos deste clone, dois peptídeos foram quimicamente sintetizados e analisados separadamente frente a misturas de soros de indivíduos normais e de pacientes com esquistossomose mansoni. Ambos os peptídeos demonstraram uma intensa reatividade somente contra a mistura de soros positivos, sugerindo que estes peptídeos podem ser úteis como antígenos para o diagnóstico da esquistossomose mansoni.
Descritores: Esquistossomose mansoni/diagnóstico
Schistosoma mansoni/genética
Schistosoma mansoni/imunologia
DNA Complementar/genética
Biblioteca de Peptídeos
-DNA Complementar/imunologia
Clonagem Molecular/métodos
Anticorpos Anti-Helmínticos/genética
Anticorpos Anti-Helmínticos/imunologia
Antígenos de Helmintos/genética
Antígenos de Helmintos/imunologia
/imunologia
HSPACCOUNTING HEAT-SHOCK PROTEINS/imunologia
Etiquetas de Sequências Expressas
Fases de Leitura Aberta
Biblioteca Gênica
Limites: Humanos
Animais
Responsável: BR1.1 - BIREME


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Brígido, M. M
Maranhão, A. Q
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Id: lil-445298
Autor: Dantas-Barbosa, C; Brígido, M. M; Maranhão, A. Q.
Título: Construction of a human Fab phage display library from antibody repertoires of osteosarcoma patients
Fonte: Genet. mol. res. (Online);4(2):126-140, 30 jun. 2005. tab, graf, ilus.
Idioma: en.
Resumo: Osteosarcoma is the commonest type of primary malignant bone tumor, frequently found in adolescents at sites of rapid bone growth. Despite current management protocols, up to half of the patients succumb to this disease. Moreover, there is no well-characterized molecular marker for diagnosis and prognosis. Since phage display methodology allows the selection of human antibody fragments with potential use in clinical applications, we applied this procedure to construct a recombinant Fab (antigen binding fragment) library from patients with osteosarcoma. We used peripheral blood lymphocyte total RNA from 11 osteosarcoma patients and cloned recombinant Fab representing the micro, gamma and kappa chain antibody repertoires of these individuals. The resulting library was cloned in the pComb3X vector and attained 1.45 x 10(8) different functional forms. BstO I fingerprinting and DNA sequencing analysis of randomly selected clones revealed the diversity of the library, demonstrating that Fab harbors Vkappa chains from subgroups I to V, biased towards the A27 fragment, as normally reported for the human repertoire. Analysis of the VH repertoire revealed that our library has a slight bias towards the VH4 family, instead of the usually reported VH3. This is the first description of a phage display library from osteosarcoma patients. We believe these human Fab fragments will provide a valuable tool for the study of this neoplasia and could also contribute to improvements in the diagnosis of this disease.
Descritores: Sítios de Ligação de Anticorpos/genética
Neoplasias Ósseas/genética
Fragmentos Fab das Imunoglobulinas/genética
Osteossarcoma
Biblioteca de Peptídeos
RNA Neoplásico/genética
-Neoplasias Ósseas/diagnóstico
Marcadores Genéticos/genética
Fragmentos Fab das Imunoglobulinas
Linfócitos/química
Osteossarcoma
Reação em Cadeia da Polimerase
RNA Neoplásico/sangue
RNA Neoplásico/isolamento & purificação
Análise de Sequência de DNA
Limites: Humanos
Masculino
Feminino
Criança
Adulto
Responsável: BR1.1 - BIREME


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Texto completo SciELO Brasil
Texto completo
Id: lil-399607
Autor: Arap, Marco Antonio.
Título: Phage display technology: applications and innovations
Fonte: Genet. mol. biol;28(1):1-9, Jan.-Mar. 2005. ilus, tab.
Idioma: en.
Resumo: The expression of exogenous peptides on the surface of filamentous bacteriophage was initially described by Smith in 1985. Since his first study, different molecules such as small peptides and antibodies have been displayed on coat proteins of phage, greatly expanding the applications of the technology. The past decade has seen considerable progress in the techniques and applications of phage libraries. In addition, different screening methods have allowed isolation and characterization of peptides binding to several molecules in vitro, in the context of living cells, in animals and in humans. Here we review the applications, recent innovations, and future directions of phage display technology.
Descritores: Biblioteca de Peptídeos
Biotecnologia
-Neoplasias da Próstata
ANTIGENOS CD1ABATTOIRS
Sistemas de Liberação de Medicamentos
Limites: Animais
Humanos
Responsável: BR26.1 - Biblioteca Central


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Texto completo SciELO Brasil
Maranhão, A. Q
Brígido, M. M
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Id: lil-260252
Autor: Maranhão, A. Q; Brígido, M. M.
Título: Expression of anti-Z-DNA single chain antibody variable fragment on the filamentous phage surface
Fonte: Braz. j. med. biol. res = Rev. bras. pesqui. méd. biol;33(5):569-79, May 2000. ilus.
Idioma: en.
Resumo: We describe the expression of an anti-Z-DNA single chain variable region antibody fragment (scFv) on a filamentous phage surface. Four vectors for phage display were constructed. Two of them are able to display multiple copies of the antibody fragment, and the others can be used to make monovalent libraries. The vectors use different promoter/leader sequences to direct the expression of the fused proteins. All were able to promote the assembly of fusion virion particles. In this paper we also show the affinity selection (biopanning) of those phage-antibodies based on the capacity of their products to recognize the antigen. We used biotinylated Z-DNA and the selection was performed in a solution phase fashion. The data presented here indicate that these vectors can be further used to construct anti-nucleic acid antibody fragment libraries that can be used to study the basis of nucleic acid-protein interaction and its role in autoimmunity mechanisms.
Descritores: DNA/imunologia
Aminoácidos/fisiologia
Clonagem Molecular/métodos
Fragmentos de Imunoglobulinas/biossíntese
Anticorpos/imunologia
-Biblioteca Gênica
Reação em Cadeia da Polimerase
Vetores Genéticos/metabolismo
Amplificação de Genes
Fusão Gênica/métodos
Fragmentos de Imunoglobulinas/química
Sequência de Bases
Sequência de Aminoácidos
Biblioteca de Peptídeos
Responsável: BR1.1 - BIREME


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Id: lil-253534
Autor: Radrizzani, Martina; Broccardo, Mariana; Gonzales Solveyra, Cesar; Biachini, Michele; Reyes, Gloria B; Cafferata, Eduardo G; Santa-Coloma, Tomas A.
Título: Oligobodies: bench made synthetic antibodies
Fonte: Medicina (B.Aires);59(6):753-8, 1999.
Idioma: en.
Resumo: Using synthetic peptides and a combinatorial library of 56 mer random oligonucleotides, we have developed reagents that behave as "synthetic antibodies". The results obtained with the protein phosphatase 2A as a model system are shown here. The specificity of these reagents, named "oligobodies", has been demonstrated by Western blot analysis and immunohistochemistry. The oligobodies have enormous advantages compared to antibodies: their production is independent of the immune system, they can be prepared in a few days and there is no need for a purified target protein. These reagents can be produced even if the corresponding protein was never isolated or purified, since only a partial DNA suquence from a database provides enough information to make them.
Descritores: Formação de Anticorpos
Biblioteca de Peptídeos
Fosfoproteínas Fosfatases
Oligonucleotídeos
-Camundongos Endogâmicos C57BL
Análise de Sequência de DNA
Coelhos
Western Blotting
Imuno-Histoquímica
Oligonucleotídeos/biossíntese
Indicadores e Reagentes
Reação em Cadeia da Polimerase
Limites: Camundongos
Animais
Responsável: BR1.1 - BIREME



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