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Id: biblio-1278500
Autor: Ullah, I; Afridi, S G; Khan, A U; Israr, M; Ali, A; Shams, S; Jabeen, H; Rasool, A; Akbar, F; Rahat, M A; Haris, M; Khan, A; Siraj, M; Shah, M.
Título: PCR-RFLP Based genetic diversity of Plasmodium vivax genotypes in district Mardan, Pakistan / Diversidade genética baseada em PCR-RFLP de genótipos de Plasmodium vivax no distrito de Mardan, Paquistão
Fonte: Braz. j. biol;82:e241110, 2022. tab, graf.
Idioma: en.
Projeto: NRPU.
Resumo: Abstract Plasmodium vivax is the most common human malaria parasite in Asian countries including Pakistan. Present study was designed to explore the genetic diversity of plasmodium vivax genotypes based on Pvmsp-3α and Pvmsp-3βgenes using allelic specific nested PCR and RFLP assays markers from field isolates in district Mardan, Pakistan. Blood samples of 200 P. vivax malarial patients were collected after taking their written informed consent. Genetic diversity in nested PCR products was determined by Restriction Fragment Length Polymorphism (RFLP) utilizing Alu1 and PstI restriction enzymes for alpha and beta gene products digestion, respectively. For analysis the genetic diversity of the sub allelic variants of Pvmsp3α and Pvmsp3β genes, Chi-Square test was performed by utilizing Minitab programming software 18. The P value 0.05 was considered as statistically significant. For Pvmsp-3α genes after gel electrophoresis of digested products, four distinct genotypes were obtained from total of 50 samples; type A: 35 (70%) (1.5-2.0 kb), 12 of type B (24%) (1.5-1.7 kb), 2 of type C (4%) (0.5-1.5) and one for type D (2%) (0.5-0.65 kb) which could be characterized into 9 allelic pattern (A1-A4, B1-B3, C1, D), in which A3 remained the most predominant. For Pvmsp-3βgenes, three distinct genotypes were obtained from 50 samples; 40(80%) of type A (1.5-2.5 kb), 9 (18%) of type B (1.0-1.5kb) and 1(2%) of type C (0.65 kb) which could be characterized into 6 allelic patterns (A1-A3, B1-B2, and C1). Most dominant one in Type A was A1 alleles which were noted (46%), while in Type B, the most dominant were B1 (10%).This study is the first ever report of molecular epidemiology and genetic variation in Pvmsp-3α and Pvmsp-3β genes of P. vivax isolates by using PCR/RFLP from District Mardan and showed a remarkable level of genetic diversity in the studied genes of circulating parasites in the study area. The results of this study will contribute in future studies about the genetic structure of parasite and vaccine development against the malaria.

Resumo O Plasmodium vivax é o parasita da malária humana mais comum nos países asiáticos, incluindo o Paquistão. O presente estudo foi desenhado para explorar a diversidade genética de genótipos de Plasmodium vivax baseados nos genes Pvmsp-3α e Pvmsp-3β, usando marcadores de ensaios alélicos nested PCR e RFLP de isolados de campo no distrito de Mardan, Paquistão. Amostras de sangue de 200 pacientes com malária por P. vivax foram coletadas após assinatura do termo de consentimento livre e esclarecido. A diversidade genética em produtos de PCR nested foi determinada por polimorfismo de fragmento de restrição (RFLP) utilizando as enzimas de restrição Alu1 e PstI para a digestão dos produtos dos genes alfa e beta, respectivamente. Para análise da diversidade genética das variantes subalélicas dos genes Pvmsp3α e Pvmsp3β, o teste Qui-quadrado foi realizado utilizando o software de programação Minitab 18. O valor P = 0,05 foi considerado estatisticamente significativo. Para os genes Pvmsp-3α, após eletroforese em gel de produtos digeridos, quatro genótipos distintos foram obtidos de um total de 50 amostras; tipo A: 35 (70%) (1,5-2,0 kb), 12 do tipo B (24%) (1,5-1,7 kb), 2 do tipo C (4%) (0,5-1,5) e um para o tipo D (2%) (0,5-0,65 kb), que podem ser caracterizados em nove padrões alélicos (A1-A4, B1-B3, C1, D), em que A3 permaneceu como o mais predominante. Para Pvmsp-3βgenes, três genótipos distintos foram obtidos a partir de 50 amostras; 40 (80%) do tipo A (1,5-2,5 kb), 9 (18%) do tipo B (1,0-1,5 kb) e 1 (2%) do tipo C (0,65 kb), que podem ser caracterizados em seis padrões alélicos (A1-A3, B1-B2 e C1). Os mais dominantes no tipo A foram o alelo A1, observados em 46%, enquanto, no tipo B, os mais dominantes foram B1 (10%). Este estudo é o primeiro relato de epidemiologia molecular e variação genética em Pvmsp-3α. Os genes Pvmsp-3β de isolados de P. vivax utilizando PCR/RFLP do Distrito Mardan mostraram um nível notável de diversidade genética nos genes estudados de parasitas circulantes na área de estudo. Os resultados desse estudo contribuirão em estudos futuros sobre a estrutura genética do parasita e o desenvolvimento de vacinas contra a malária.
Descritores: Plasmodium vivax/genética
Proteínas de Protozoários/genética
-Paquistão
Variação Genética
Polimorfismo de Fragmento de Restrição
Reação em Cadeia da Polimerase
Genótipo
Limites: Humanos
Responsável: BR1.1 - BIREME


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Id: biblio-1285631
Autor: Nadeem, M F; Zeeshan, N; Khattak, A A; Awan, U A; Yaqoob, A.
Título: Fixation of pfcrt chloroquine resistance alleles in Plasmodium falciparum clinical isolates collected from unrest tribal agencies of Pakistan / Fixação de alelos de resistência à cloroquina pfcrt em isolados clínicos de Plasmodium falciparum coletados de agitações de agências tribais do Paquistão
Fonte: Braz. j. biol;83:e247422, 2023. tab, graf.
Idioma: en.
Resumo: Abstract Plasmodium falciparum resistance to Chloroquine (CQ) is a significant cause of mortality and morbidity worldwide. There is a paucity of documented data on the prevalence of CQ-resistant mutant haplotypes of Pfcrt and Pfmdr1 genes from malaria-endemic war effected Federally Administered Tribal Areas of Pakistan. The objective of this study was to investigate the prevalence of P. falciparum CQ-resistance in this area. Clinical isolates were collected between May 2017 and May 2018 from North Waziristan and South Waziristan agencies of Federally Administrated Trial Area. Subsequently, Giemsa-stained blood smears were examined to detect Plasmodium falciparum. Extraction of malarial DNA was done from microscopy positive P. falciparum samples, and P. falciparum infections were confirmed by nested PCR (targeting Plasmodium small subunit ribosomal ribonucleic acid (ssrRNA) genes). All PCR confirmed P. falciparum samples were sequenced by pyrosequencing to find out mutation in Pfcrt gene at codon K76T and in pfmdr1 at codons N86Y, Y184F, N1042D, and D1246Y. Out of 121 microscopies positive P. falciparum cases, 109 samples were positive for P. falciparum by nested PCR. Pfcrt K76T mutation was found in 96% of isolates, Pfmdr1 N86Y mutation was observed in 20%, and 11% harboured Y184F mutation. All samples were wild type for Pfmdr1 codon N1042D and D1246Y. In the FATA, Pakistan, the frequency of resistant allele 76T remained high despite the removal of CQ. However, current findings of the study suggest complete fixation of P. falciparum CQ-resistant genotype in the study area.

Resumo A resistência do Plasmodium falciparum à cloroquina (CQ) é uma causa significativa de mortalidade e morbidade em todo o mundo. Há uma escassez de dados documentados sobre a prevalência de haplótipos mutantes CQ-resistentes dos genes Pfcrt e Pfmdr1 da guerra endêmica da malária em áreas tribais administradas pelo governo federal do Paquistão. O objetivo deste estudo foi investigar a prevalência de resistência a CQ de P. falciparum nesta área. Isolados clínicos foram coletados entre maio de 2017 e maio de 2018 nas agências do Waziristão do Norte e do Waziristão do Sul da Área de Ensaio Administrada Federalmente. Posteriormente, esfregaços de sangue corados com Giemsa foram examinados para detectar Plasmodium falciparum. A extração do DNA da malária foi feita a partir de amostras de P. falciparum positivas para microscopia, e as infecções por P. falciparum foram confirmadas por nested PCR (visando genes de ácido ribonucleico ribossômico de subunidade pequena de Plasmodium (ssrRNA)). Todas as amostras de P. falciparum confirmadas por PCR foram sequenciadas por pirosequenciamento para descobrir a mutação no gene Pfcrt no códon K76T e em pfmdr1 nos códons N86Y, Y184F, N1042D e D1246Y. De 121 microscopias de casos positivos de P. falciparum, 109 amostras foram positivas para P. falciparum por nested PCR. A mutação Pfcrt K76T foi encontrada em 96% dos isolados, a mutação Pfmdr1 N86Y foi observada em 20% e 11% abrigou a mutação Y184F. Todas as amostras eram do tipo selvagem para o códon N1042D e D1246Y de Pfmdr1. No FATA, Paquistão, a frequência do alelo resistente 76T permaneceu alta apesar da remoção de CQ. No entanto, as descobertas atuais do estudo sugerem a fixação completa do genótipo resistente a CQ de P. falciparum na área de estudo.
Descritores: Plasmodium falciparum/genética
Antimaláricos/farmacologia
-Paquistão
Proteínas de Membrana Transportadoras/genética
Resistência a Medicamentos/genética
Proteínas de Protozoários/genética
Cloroquina/farmacologia
Proteínas Associadas à Resistência a Múltiplos Medicamentos/genética
Alelos
Responsável: BR1.1 - BIREME


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Id: biblio-1040587
Autor: Moreira, Douglas de Souza; Xavier, Mariana Vieira; Murta, Silvane Maria Fonseca.
Título: Ascorbate peroxidase overexpression protects Leishmania braziliensis against trivalent antimony effects
Fonte: Mem. Inst. Oswaldo Cruz;113(12):e180377, 2018. graf.
Idioma: en.
Projeto: CNPq; . FAPEMIG; . SMFM; . DSM; . CNPq.
Resumo: Ascorbate peroxidase (APX) is a redox enzyme of the trypanothione pathway that converts hydrogen peroxide (H2O2) into water molecules. In the present study, the APX gene was overexpressed in Leishmania braziliensis to investigate its contribution to the trivalent antimony (SbIII)-resistance phenotype. Western blot results demonstrated that APX-overexpressing parasites had higher APX protein levels in comparison with the wild-type line (LbWTS). APX-overexpressing clones showed an 8-fold increase in the antimony-resistance index over the parental line. In addition, our results indicated that these clones were approximately 1.8-fold more tolerant to H2O2 than the LbWTS line, suggesting that the APX enzyme plays an important role in the defence against oxidative stress. Susceptibility tests revealed that APX-overexpressing L. braziliensis lines were more resistant to isoniazid, an antibacterial agent that interacts with APX. Interestingly, this compound enhanced the anti-leishmanial SbIII effect, indicating that this combination represents a good strategy for leishmaniasis chemotherapy. Our data demonstrate that APX enzyme is involved in the development of L. braziliensis antimony-resistance phenotype and may be an attractive therapeutic target in the design of new strategies for leishmaniasis treatment.
Descritores: Leishmania braziliensis/efeitos dos fármacos
Leishmania braziliensis/enzimologia
Ascorbato Peroxidases/metabolismo
Antimônio/farmacologia
Antiprotozoários/farmacologia
-Fenótipo
Resistência a Medicamentos
Regulação Enzimológica da Expressão Gênica
Proteínas de Protozoários/metabolismo
Western Blotting
Estresse Oxidativo
Testes de Sensibilidade Parasitária
Responsável: BR1.1 - BIREME


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Id: biblio-1040592
Autor: Campus de AraraquaraNogueira, Camila Tita; Campus de AraraquaraCistia, Mayara Lúcia Del; Campus de São CarlosUrbaczek, Ana Carolina; Campus de JaboticabalJusi, Márcia MG; Campus de AraraquaraVelásquez, Angela Maria Arenas; Campus de JaboticabalMachado, Rosângela Zacarias; Campus de Rio ClaroFerreira, Henrique; Henrique-Silva, Flávio; Campus de BotucatuLangoni, Hélio; Campus de AraraquaraCosta, Paulo Inácio da; Campus de AraraquaraGraminha, Márcia AS.
Título: Potential application of rLc36 protein for diagnosis of canine visceral leishmaniasis
Fonte: Mem. Inst. Oswaldo Cruz;113(3):197-201, Mar. 2018. graf.
Idioma: en.
Projeto: FAPESP.
Resumo: Visceral leishmaniasis (VL) is fatal if left untreated. Infected dogs are important reservoirs of the disease, and thus specific identification of infected animals is very important. Several diagnostic tests have been developed for canine VL (CVL); however, these tests show varied specificity and sensitivity. The present study describes the recombinant protein rLc36, expressed by Leishmania infantum, as potential antigen for more sensitive and specific diagnosis of CVL based on an immunoenzymatic assay. The concentration of 1.0 μg/mL of rLc36 enabled differentiation of positive and negative sera and showed a sensitivity of 85% and specificity of 71% (with 95% confidence), with an accuracy of 76%.
Descritores: Proteínas de Protozoários/sangue
Leishmania infantum/imunologia
Doenças do Cão/diagnóstico
Leishmaniose Visceral/veterinária
-Ensaio de Imunoadsorção Enzimática/veterinária
Sensibilidade e Especificidade
Eletroforese em Gel de Poliacrilamida/veterinária
Leishmaniose Visceral/diagnóstico
Limites: Animais
Cães
Camundongos
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Id: biblio-1040598
Autor: Laboratório de Biologia CelularBatista, Cassiano Martin; Laboratório de Biologia CelularSaad, Felipe; Laboratório de Biologia CelularCeccoti, Stephane Pini Costa; Eger, Iriane; Laboratório de Biologia CelularSoares, Maurilio José.
Título: Subcellular localisation of FLAG tagged enzymes of the dynamic protein S-palmitoylation cycle of Trypanosoma cruzi epimastigotes
Fonte: Mem. Inst. Oswaldo Cruz;113(8):e180086, 2018. tab, graf.
Idioma: en.
Resumo: Dynamic S-palmitoylation of proteins is the addition of palmitic acid by zDHHC palmitoyl transferases (PATs) and depalmitoylation by palmitoyl protein thioesterases (PPTs). A putative PAT (TcPAT1) has been previously identified in Trypanosoma cruzi, the etiological agent of Chagas disease. Here we analyse other 14 putative TcPATs and 2 PPTs in the parasite genome. T. cruzi cell lines expressing TcPATs and TcPPTs plus a FLAG tag at the C terminus were produced for most enzymes, with positive detection by indirect immunofluorescence. Overexpressed TcPATs were mostly found as single spots at the parasite anterior end, while the TcPPTs were dispersed throughout the parasite body.
Descritores: Palmitatos/metabolismo
Trypanosoma cruzi/metabolismo
Proteínas de Protozoários/metabolismo
Proteína S/metabolismo
Lipoilação/genética
-Trypanosoma cruzi/enzimologia
Trypanosoma cruzi/genética
Proteínas de Protozoários/genética
Regulação da Expressão Gênica
Proteína S/genética
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Id: biblio-1040629
Autor: Farias, Elizangela; Bezerra, Fhabiane; Baia-da-Silva, Djane Clarys; Programa de Pós-Graduação Stricto Sensu em Biologia da Interação Patógeno HospedeiroChaves, Yury Oliveira; Programa de Pós-Graduação Stricto Sensu em Biologia da Interação Patógeno HospedeiroCardoza, Tatiana Bacry; Programa de Pós-Graduação Stricto Sensu em Biologia da Interação Patógeno Hospedeirode Almeida, Maria Edilene Martins; Programa de Pós-Graduação Stricto Sensu em Biologia da Interação Patógeno HospedeiroOliveira, Lucas Barbosa; Lalwani, Pritesh; Programa de Pós-Graduação Stricto Sensu em Biologia da Interação Patógeno HospedeiroOrlandi, Patrícia Puccinelli; Programa de Pós-Graduação Stricto Sensu em Biologia da Interação Patógeno HospedeiroLacerda, Marcus Vinicius Guimaraes; Programa de Pós-Graduação Stricto Sensu em Biologia da Interação Patógeno HospedeiroLopes, Stefanie Costa Pinto; Programa de Pós-Graduação Stricto Sensu em Biologia da Interação Patógeno HospedeiroNogueira, Paulo Afonso.
Título: A simple, ex vivo phagocytosis assay of Plasmodium vivax merozoites by flow cytometry
Fonte: Mem. Inst. Oswaldo Cruz;114:e190158, 2019. graf.
Idioma: en.
Resumo: As phagocytosis is the first line of defense against malaria, we developed a phagocytosis assay with Plasmodium vivax (P. vivax) merozoites that can be applied to evaluate vaccine candidates. Briefly, after leukocyte removal with loosely packed cellulose powder in a syringe, P. vivax trophozoites matured to the merozoite-rich schizont stages in the presence of the E64 protease inhibitor. The Percoll gradient-enriched schizonts were chemically disrupted to release merozoites that were submitted to merozoite opsonin-dependent phagocytosis in two phagocytic lines with human and mouse antibodies against the N- and C-terminus of P. vivax Merozoite Surface Protein-1 (Nterm-PvMSP1 and MSP119). The resulting assay is simple and efficient for use as a routine phagocytic assay for the evaluation of merozoite stage vaccine candidates.
Descritores: Fagocitose/fisiologia
Plasmodium vivax/imunologia
Anticorpos Antiprotozoários/imunologia
Proteínas de Protozoários/imunologia
Merozoítos/imunologia
-Plasmodium vivax/fisiologia
Merozoítos/citologia
Citometria de Fluxo
Camundongos Endogâmicos BALB C
Limites: Animais
Feminino
Camundongos
Responsável: BR1.1 - BIREME


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Id: biblio-1250360
Autor: Laboratório de Pesquisa em Maláriade Souza, Hugo Amorim dos Santos; Laboratório de Pesquisa em MaláriaEscafa, Victor Fernandes; Laboratório de Pesquisa em MaláriaBlanco, Carolina Moreira; Laboratório de Pesquisa em MaláriaBaptista, Bárbara de Oliveira; Laboratório de Pesquisa em Maláriade Barros, Jenifer Peixoto; Laboratório de Pesquisa em MaláriaRiccio, Evelyn Ketty Pratt; Laboratório de Genômica Funcional e BioinformáticaRodrigues, Aline Beatriz Mello; Melo, Gisely Cardoso de; Lacerda, Marcus Vinícius Guimarães de; Centro Multidisciplinarde Souza, Rodrigo Medeiros; Laboratório de ImunoparasitologiaLima-Junior, Josué da Costa; Laboratório de Genômica Funcional e BioinformáticaGuimarães, Ana Carolina Ramos; Laboratório de Biologia Computacional e Sistemasda Mota, Fabio Faria; da Silva, João Hermínio Martins; Laboratório de Pesquisa em MaláriaDaniel-Ribeiro, Cláudio Tadeu; Laboratório de Pesquisa em MaláriaPratt-Riccio, Lilian Rose; Laboratório de Pesquisa em MaláriaTotino, Paulo Renato Rivas.
Título: Plasmodium vivax metacaspase 1 (PvMCA1) catalytic domain is conserved in field isolates from Brazilian Amazon
Fonte: Mem. Inst. Oswaldo Cruz;116:e200584, 2021. graf.
Idioma: en.
Resumo: In the present study, we investigated the genetic diversity of Plasmodium vivax metacaspase 1 (PvMCA1) catalytic domain in two municipalities of the main malaria hotspot in Brazil, i.e., the Juruá Valley, and observed complete sequence identity among all P. vivax field isolates and the Sal-1 reference strain. Analysis of PvMCA1 catalytic domain in different P. vivax genomic sequences publicly available also revealed a high degree of conservation worldwide, with very few amino acid substitutions that were not related to putative histidine and cysteine catalytic residues, whose involvement with the active site of protease was herein predicted by molecular modeling. The genetic conservation presented by PvMCA1 may contribute to its eligibility as a druggable target candidate in vivax malaria.
Descritores: Plasmodium vivax/genética
Malária Vivax
-Variação Genética/genética
Brasil
Proteínas de Protozoários/genética
Domínio Catalítico
Limites: Humanos
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Tavares, Carlos Alberto Pereira
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Id: lil-792794
Autor: Duarte, Mariana Costa; Lage, Daniela Pagliara; Martins, Vívian Tamietti; Chávez-Fumagalli, Miguel Angel; Roatt, Bruno Mendes; Menezes-Souza, Daniel; Goulart, Luiz Ricardo; Soto, Manuel; Tavares, Carlos Alberto Pereira; Coelho, Eduardo Antonio Ferraz.
Título: Recent updates and perspectives on approaches for the development of vaccines against visceral leishmaniasis
Fonte: Rev. Soc. Bras. Med. Trop;49(4):398-407, July-Aug. 2016. tab, graf.
Idioma: en.
Projeto: Instituto Nacional de Ciência e Tecnologia em Nano-Biofarmacêutica; . Rede Nanobiotec/Brasil; . Universidade Federal de Uberlândia; . CAPES; . PRONEX-FAPEMIG; . CNPq.
Resumo: Abstract: Visceral leishmaniasis (VL) is one of the most important tropical diseases worldwide. Although chemotherapy has been widely used to treat this disease, problems related to the development of parasite resistance and side effects associated with the compounds used have been noted. Hence, alternative approaches for VL control are desirable. Some methods, such as vector control and culling of infected dogs, are insufficiently effective, with the latter not ethically recommended. The development of vaccines to prevent VL is a feasible and desirable measure for disease control; for example, some vaccines designed to protect dogs against VL have recently been brought to market. These vaccines are based on the combination of parasite fractions or recombinant proteins with adjuvants that are able to induce cellular immune responses; however, their partial efficacy and the absence of a vaccine to protect against human leishmaniasis underline the need for characterization of new vaccine candidates. This review presents recent advances in control measures for VL based on vaccine development, describing extensively studied antigens, as well as new antigenic proteins recently identified using immuno-proteomic techniques.
Descritores: Anticorpos Antiprotozoários/imunologia
Vacinas Protozoárias/imunologia
Leishmania/imunologia
Leishmaniose Visceral/prevenção & controle
Antígenos de Protozoários/imunologia
-Proteínas de Protozoários/imunologia
Leishmania/classificação
Limites: Humanos
Animais
Cães
Tipo de Publ: Revisão
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Langoni, Hélio
Megid, Jane
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Id: biblio-896991
Autor: Silva, Rodrigo Costa da; Langoni, Helio; Megid, Jane.
Título: Adaptive and genetic evolution of Toxoplasma gondii: a host-parasite interaction
Fonte: Rev. Soc. Bras. Med. Trop;50(4):580-581, July-Aug. 2017.
Idioma: en.
Descritores: Toxoplasma
Interações Hospedeiro-Parasita
-Proteínas de Protozoários/genética
Evolução Molecular
Tipo de Publ: Comentário
Carta
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Machado, Ricardo Luiz Dantas
Castro, Ana Maria de
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Id: biblio-1041579
Autor: Chapadense, Francesca; Machado, Ricardo Luiz Dantas; Ventura, Ana Maria Revorêdo da Silva; Áreas, André; Machado, Renato Beilner; Viana, Giselle Rachid; Zalis, Mariano Gustavo; Castro, Ana Maria de; Cravo, Pedro.
Título: Plasmodium falciparum malarial parasites from Brazil lack artemisinin resistance-associated mutations in the kelch13 gene
Fonte: Rev. Soc. Bras. Med. Trop;52:e20180225, 2019. tab, graf.
Idioma: en.
Projeto: São Paulo Research Foundation; . National Council for Scientific and Technological Development.
Resumo: Abstract INTRODUCTION Mutations in the propeller domain of the Plasmodium falciparum kelch13 (k13) gene are associated with artemisinin resistance. METHODS: We developed a PCR protocol to sequence the pfk13 gene and determined its sequence in a batch of 50 samples collected from 2003 to 2016 in Brazil. RESULTS: We identified 1 K189T substitution located outside the propeller domain of the PfK13 protein in 36% of samples. CONCLUSIONS: Although the sample size is relatively small, these results suggest that P. falciparum artemisinin-resistant mutants do not exist in Brazil, thereby supporting the continuation of current treatment programs based on artemisinin-based combination therapy.
Descritores: Plasmodium falciparum/genética
Resistência a Medicamentos/genética
Proteínas de Protozoários/genética
Malária Falciparum/parasitologia
Artemisininas/farmacologia
Mutação/genética
-Fenótipo
Plasmodium falciparum/efeitos dos fármacos
Genótipo
Limites: Humanos
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