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Id: biblio-1021557
Autor: Li, Hedan; Hao, Chengwei; Xu, Daqing.
Título: Development of a novel vector for cloning and expressing extremely toxic genes in Escherichia coli
Fonte: Electron. j. biotechnol;30:88-94, nov. 2017. tab, ilus, graf.
Idioma: en.
Projeto: National Natural Science Foundation of China; . Specialized Research Fund for the Doctoral Programme of Higher Education of China.
Resumo: Background: Escherichia coli has been widely used as a host to clone and express heterologous genes. However, there are few vectors available for cloning and expressing extremely toxic genes, which limits further basic and applied research on extremely toxic proteins. Results: In this study, a novel vector pAU10 was constructed in E. coli. pAU10 utilizes the combination of the efficient but highly repressible T7-lacO promoter/operator and the strong rrnBT2 transcriptional terminator upstream of the T7 promoter to strictly control unwanted transcription of the extremely toxic gene; in addition, the trp promoter/operator is oriented opposite to the T7 promoter to control the production of the antisense RNA that may block the translation of leaky mRNA. Without the supplementation of IPTG and L-tryptophan in the culture medium, transcription of the extremely toxic gene by the T7 promoter is highly repressed, and the trp promoter produces the antisense RNA, which strictly prevents unwanted expression of the extremely toxic protein in E. coli. With the supplementation of IPTG and L-tryptophan, the T7 promoter efficiently transcribes the extremely toxic gene, and the trp promoter does not produce the antisense RNA, ensuring efficient expression of the extremely toxic protein in E. coli. Tight regulation and efficiency of expression of an extremely toxic gene cloned in the vector pAU10 were confirmed by cloning and expressing the restriction endonuclease-encoding gene bamHI without its corresponding methylase gene in E. coli JM109(DE3). Conclusion: pAU10 is a good vector used for cloning and expressing extremely toxic genes in E. coli.
Descritores: Proteínas de Escherichia coli/toxicidade
Escherichia coli/genética
Vetores Genéticos
-Triptofano/metabolismo
Desoxirribonuclease BamHI/metabolismo
Western Blotting
Reação em Cadeia da Polimerase
RNA Antissenso
Regiões Promotoras Genéticas
Clonagem Molecular
Eletroforese em Gel de Poliacrilamida
Proteínas Correpressoras
Genes Bacterianos
Isopropiltiogalactosídeo/metabolismo
Responsável: CL1.1 - Biblioteca Central


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Id: lil-594209
Autor: Moreira, Yuri José de Camargo Barros.
Título: Identificação de perfis de expressão de RNAs codificadores e não codificadores de proteína como preditores de recorrência de câncer de próstata / Identification of protein-coding and non-coding RNA expression profiles as prognostic marker of prostate cancer biochemical recurrence.
Fonte: São Paulo; s.n; 2010. 158 p. ilus, tab, graf.
Idioma: pt.
Tese: Apresentada a Universidade de São Paulo. Instituto de Química para obtenção do grau de Doutor.
Resumo: O câncer de próstata é o quinto tipo mais comum de câncer no mundo e o mais comum em homens. Fatores clínicos e anatomopatológicos atualmente usados na clínica não são capazes de distinguir entre a doença indolente e a agressiva. Existe uma grande necessidade de novos marcadores de prognóstico, a fim de melhorar o gerenciamento clínico de pacientes de câncer de próstata. Além das anormalidades em genes codificadores de proteínas, alterações em RNAs não codificadores (ncRNAs) contribuem para a patogênese do câncer e, portanto, representam outra fonte potencial de biomarcadores de câncer de próstata. Entretanto, até o momento, poucos estudos de perfis de expressão de ncRNAs foram publicados. Este projeto teve como principal objetivo identificar perfis de expressão de genes codificadores e não codificadores de proteína correlacionados com recorrência de tumor de próstata, a fim de gerar um perfil prognóstico com potencial uso como biomarcadores e elucidar o possível papel de ncRNAs no desenvolvimento do câncer. Para isso, foram analisados os perfis de expressão de genes codificadores e não codificadores de proteína de um conjunto de 42 amostras de tecido tumoral de câncer de próstata de pacientes de amostras de pacientes submetidos à prostatectomia radical, com longo acompanhamento clínico (cinco anos) e conhecida evolução da doença Nós utilizamos microarranjos por nós desenhados e fabricados pela Agilent sob encomenda, interrogando aproximadamente 18.709 transcritos não codificadores longos (>500 nt), sem evidência de splicing, que mapeiam em regiões intrônicas dentro de 5.660 loci genômicos. Os dados de expressão foram extraídos de cada arranjo, normalizados entre todas as 42 amostras de pacientes. Usando uma estratégia de múltipla amostragem, foi identificado um perfil de expressão de mau prognóstico, contendo 51 transcritos intrônicos não codificadores de proteína. O perfil prognóstico de ncRNAs foi aplicado a um conjunto teste independente de 22 pacientes...

Prostate cancer is the fifth most common type of cancer in the world, and the most common in men. Clinical and anatomo-pathological factors currently used in clinic are not able to distinguish between the indolent and the aggressive disease. There is a major need of new prognostic makers in order to improve the clinical management of prostate cancer patients. Apart from abnormalities in protein-coding genes, changes in non-coding RNAs (ncRNAs) contribute to the pathogenesis of cancer and thus represent another potential source of prostate cancer biomarkers. However, few studies of expression profiles of ncRNAs have been published. This project aimed to identify expression profiles of protein-coding and non-coding genes correlated to prostate cancer biochemical recurrence. For this, we analyzed the expression profile of 42 prostate cancer samples from patients undergoing radical prostatectomy, with long follow-up (five years), and know disease outcome. We used a custom microarray designed by us and printed by Agilent, that probes 18,709 long (>500 nt) ncRNAs mapping to intronic regions within 5,660 genomic loci. The expression data were extracted from each array and normalized across all 42 samples. Using a multiple random sampling validation strategy, we identified an expression profile of poor prognosis, comprising 51 ncRNAs. The prognostic profile of ncRNAs was applied to an independent test set of 22 patients, correctly classifying 82% of the samples. A Kaplan-Meier analysis of the test set of patients indicated that the survival curves of high and low risk groups were significantly different (Log-rank test p = 0.0009, Hazard ratio = 23.4, 95% CI = 3.62 to 151.2) thus confirming that this classifier is useful for identifying patients at high risk of recurrence. Furthermore, these findings indicate a potential role of these intronic non-coding RNAs in the progression of prostate tumors and points to the intronic ncRNAs as potential new markers of câncer.
Descritores: Perfilação da Expressão Gênica
Biomarcadores Tumorais
Neoplasias da Próstata/patologia
Neoplasias da Próstata/prevenção & controle
RNA não Traduzido
-Recidiva
RNA Antissenso
Tipo de Publ: Estudo de Avaliação
Responsável: BR40.1 - DBD - Divisão de Biblioteca e Documentacão do Conjunto das Químicas
BR40.1; T574.88, M838i. 24024


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Id: lil-464752
Autor: Jaim Etcheverry, Guillermo.
Título: Premio Nobel de Fisiología o Medicina 2006: el silencio de los genes / 2006 Nobel prize in physiology or medicine: the silence of genes
Fonte: Medicina (B.Aires);67(1):92-95, jan.-fev. 2007.
Idioma: es.
Descritores: Prêmio Nobel
Interferência de RNA
-RNA Antissenso/genética
RNA Mensageiro/genética
Limites: Humanos
História do Século XX
História do Século XXI
Tipo de Publ: Editorial
Responsável: BR1.1 - BIREME


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Texto completo SciELO Chile
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Id: lil-430705
Autor: Ezquer, Fernando; NuÑez, Marco T; Rojas, Alejandro; Asenjo, Juan; Israel, Yedy.
Título: Hereditary hemochromatosis: An opportunity for gene therapy
Fonte: Biol. Res;39(1):113-124, 2006. ilus.
Idioma: en.
Projeto: ICM; . FONDECYT; . MECESUP.
Resumo: Levels of body iron should be tightly controlled to prevent the formation of oxygen radicals, lipoperoxidation, genotoxicity, and the production of cytotoxic cytokines, which result in damage to a number of organs. Enterocytes in the intestinal villae are involved in the apical uptake of iron from the intestinal lumen; iron is further exported from the cells into the circulation. The apical divalent metal transporter-1 (DMT1) transports ferrous iron from the lumen into the cells, while the basolateral transporter ferroportin extrudes iron from the enterocytes into the circulation. Patients with hereditary hemochromatosis display an accelerated transepithelial uptake of iron, which leads to body iron accumulation that results in cirrhosis, hepatocellular carcinoma, pancreatitis, and cardiomyopathy. Hereditary hemochromatosis, a recessive genetic condition, is the most prevalent genetic disease in Caucasians, with a prevalence of one in 300 subjects. The majority of patients with hereditary hemochromatosis display mutations in the gene coding for HFE, a protein that normally acts as an inhibitor of transepithelial iron transport. We discuss the different control points in the homeostasis of iron and the different mutations that exist in patients with hereditary hemochromatosis. These control sites may be influenced by gene therapeutic approaches; one general therapy for hemochromatosis of different etiologies is the inhibition of DMT1 synthesis by antisense-generating genes, which has been shown to markedly inhibit apical iron uptake by intestinal epithelial cells. We further discuss the most promising strategies to develop gene vectors and deliver them into enterocytes.
Descritores: Terapia Genética/métodos
Hemocromatose/genética
Antígenos de Histocompatibilidade Classe I/genética
Absorção Intestinal
Ferro/metabolismo
Proteínas de Membrana/genética
-Adenoviridae/genética
Proteínas de Transporte de Cátions/antagonistas & inibidores
Proteínas de Transporte de Cátions/genética
Proteínas de Transporte de Cátions/metabolismo
Vetores Genéticos
Hemocromatose/terapia
Ferro/antagonistas & inibidores
RNA Antissenso/uso terapêutico
Limites: Humanos
Responsável: BR1.1 - BIREME


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Id: lil-226201
Autor: Vera, Jorge Alexis Escobar.
Título: Envolvimento da expressäo basal do sistema celulolítico na induçäo do gene que codifica para a celobiohidrolase I em Trichoderma reesei: uma abordagem antisenso / Envolviment of the cellulase system basal expression on the induction of the gene that codify to the cellobiohydrolase I in Trichoderma reesei: an antisense boarding.
Fonte: Säo Paulo; s.n; 1998. 100 p. ilus.
Idioma: pt.
Tese: Apresentada a Universidade de Säo Paulo. Instituto de Química para obtenção do grau de Doutor.
Resumo: A expressäo dos transcritos de celulases, no fungo filamentoso Trichoderma reesei, é controlada pela natureza das fontes de carbono utilizadas no meio de cultura. Celulose e o dissacarídeo solúvel soforose agem como indutores, mas näo o glicerol nem a glicose. A induçäo dos transcritos de celulases por celulose, um polímero insolúvel, é uma enigma. Nós previamente apresentamos experimentos in vitro que sustentam o mecanismo baseado na presença de um nível baixo de celulase no fungo induzido; estas celulases poderiam digerir a celulose, liberando oligossacarídeos, tais como a soforose, que poderíam entrar na célula e disparar a expressäo dos transcritos das celulases. Neste trabalho apresentamos experimentos in vivo que levam a sustentar fortemente este modelo...
Descritores: Biodegradação Ambiental
Celulase
Enzimas
Hidrólise
Oligossacarídeos
RNA Antissenso
Trichoderma/isolamento & purificação
-Western Blotting
Celulose
Células Clonais
Meios de Cultura
Regulação da Expressão Gênica
Responsável: BR40.1 - DBD - Divisão de Biblioteca e Documentacão do Conjunto das Químicas
BR40.1; 574.88



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