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Id: biblio-1254836
Autor: Pérez-Rodriguez, Saumel; Ramírez, Octavio T; Trujillo-Roldán, Mauricio A; Valdez-Cruz, Norma A.
Título: Comparison of protein precipitation methods for sample preparation prior to proteomic analysis of Chinese hamster ovary cell homogenates
Fonte: Electron. j. biotechnol;48:86-94, nov. 2020. tab, graf, ilus.
Idioma: en.
Projeto: Consejo Nacional de Ciencia y Tecnología CONACyT-México; . Programa de Apoyo a Proyectos de Investigación e Innovación Tecnológica, Universidad Nacional Autónoma de México, PAPIIT-UNAM; . Institutional Program of the Instituto de Investigaciones Biomédicas-UNAM.
Resumo: BACKGROUND: Chinese hamster ovary (CHO) cells are the workhorse for obtaining recombinant proteins. Proteomic studies of these cells intend to understand cell biology and obtain more productive and robust cell lines for therapeutic protein production in the pharmaceutical industry. Because of the great importance of precipitation methods for the processing of samples in proteomics, the acetone, methanol-chloroform (M/C), and trichloroacetic acid (TCA)-acetone protocols were compared for CHO cells in terms of protein recovery, band pattern resolution, and presence on SDS-PAGE. RESULTS: Higher recovery and similar band profile with cellular homogenates were obtained using acetone precipitation with ultrasonic bath cycles (104.18 ± 2.67%) or NaOH addition (103.12 ± 5.74%), compared to the other two protocols tested. TCA-acetone precipitates were difficult to solubilize, which negatively influenced recovery percentage (77.91 ± 8.79%) and band presence. M/C with ultrasonic homogenization showed an intermediate recovery between the other two protocols (94.22 ± 4.86%) without affecting protein pattern on SDS-PAGE. These precipitation methods affected the recovery of low MW proteins (< 15 kDa). CONCLUSIONS: These results help in the processing of samples of CHO cells for their proteomic study by means of an easily accessible, fast protocol, with an almost complete recovery of cellular proteins and the capture of the original complexity of the cellular composition. Acetone protocol could be incorporated to sample-preparation workflows in a straightforward manner and can probably be applied to other mammalian cell lines as well.
Descritores: Proteínas Recombinantes
Células CHO
Proteômica/métodos
-Acetona
Precipitação Química
Solubilidade
Ácido Tricloroacético
Separação Celular
Clorofórmio
Técnicas de Cultura de Células
Metanol
Eletroforese em Gel de Poliacrilamida
Limites: Animais
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Texto completo SciELO Chile
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Id: biblio-990014
Autor: Rodríguez-Rodríguez, Víctor Emanuel; Quiroga-Garza, Alejandro; Rodríguez-Roque, Carlos Saúl; Loera-Arias, María de Jesús; Soto-Domínguez, Adolfo; Guzmán-López, Santos; Vilchez-Cavazos, José Félix; Montes-de-Oca-Luna, Roberto; Elizondo-Omaña, Rodrigo Enrique.
Título: Decellularization of human umbilical arteries / Descelularización de las arterias umbilicales humanas
Fonte: Int. j. morphol;37(1):111-117, 2019. tab, graf.
Idioma: en.
Resumo: SUMMARY: Arterial obstruction in small diameter (<6 mm) vessels are many times treated with grafts, however autologous aren't always available and synthetic have a high rate of complications. Decellularization of umbilical arteries may provide a solution, but the ideal method is debatable. We compare effectiveness between SDS and Triton X-100. Umbilical cords obtained from full term pregnancies with normal development and no evident complications in the newborn, were micro-dissected within 12 h and stored in phosphate buffered saline without freezing. Arteries were then processed for decellularization using 0.1 % and 1 % SDS, and 1 % Triton X100 protocols. Evaluation of cellular and nuclear material, collagen fibers, elastic fibers, and glycosoaminoglycans of the extracellular matrix (ECM) were evaluated as well as morphometric analysis under histological and immunohistochemical techniques. Triton X-100 was ineffective, preserving nuclear remains identified by immunofluorescence, had the most notable damage to elastic fibers, and decrease in collagen. SDS effectively eliminated the nuclei and had a less decrease in elastic fibers and collagen. Laminin was preserved in all groups. No significant differences were identified in luminal diameters; however the middle layer decreased due to decellularization of muscle cells. In conclusion, 0.1 % SDS decellularization was the most effective in eliminating cells and preserving the main components of the ECM.

RESUMEN: La obstrucción arterial en vasos de pequeño diámetro (<6 mm) se trata muchas veces con injertos, sin embargo, los autólogos no siempre están disponibles y los sintéticos tienen una alta tasa de complicaciones. La descelularización de las arterias umbilicales puede proporcionar una solución, pero el método ideal es discutible. Comparamos la efectividad entre los métodos SDS y Triton X-100. Cordones umbilicales obtenidos a partir de embarazos a término con evolución normal y sin complicaciones evidentes del recién nacido, se microdiseccionaron en 12 horas y se almacenaron en solución salina con fosfato sin congelación. Las arterias se procesaron luego para la descelularización usando los protocolos de SDS al 0,1 % y 1 %, y Triton X-100 al 1 %. Se realizó la evaluación de material celular y nuclear, fibras de colágeno, fibras elásticas y glucosoaminoglicanos de la matriz extracelular (MEC), así como el análisis morfométrico bajo técnicas histológicas e inmunohistoquímicas. Triton X-100 fue ineficaz, conservando los restos nucleares identificados por inmunofluorescencia, tuvo el daño más notable a las fibras elásticas y la disminución del colágeno. SDS efectivamente eliminó los núcleos y tuvo una disminución menor en las fibras elásticas y el colágeno. Laminina fue preservado en todos los grupos. No se identificaron diferencias significativas en los diámetros luminales; sin embargo, la capa media disminuyó debido a la descelularización de las células musculares. la descelularización con SDS al 0,1 % fue la más efectiva para eliminar células y preservar los principales componentes de la MEC.
Descritores: Artérias Umbilicais/citologia
Artérias Umbilicais/metabolismo
Engenharia Tecidual/métodos
Matriz Extracelular/metabolismo
-Artérias Umbilicais/transplante
Cordão Umbilical
Imuno-Histoquímica
Separação Celular
Imunofluorescência
Colágeno
Enxerto Vascular
Limites: Humanos
Responsável: CL1.1 - Biblioteca Central


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Id: lil-794669
Autor: Zhu, Yong-tong; Pang, Shi-yu; Luo, Yang; Chen, Wei; Bao, Ji-ming; Tan, Wan-long.
Título: A modified method by differential adhesion for enrichment of bladder cancer stem cells
Fonte: Int. braz. j. urol;42(4):817-824, July-Aug. 2016. tab, graf.
Idioma: en.
Projeto: Education Department in Guangdong Province; . Southern Medical University.
Resumo: ABSTRACT Purpose: In a previous study the vaccine was effective against bladder cancer in a mouse model. However, a small portion of tumors regrew because the vaccine could not eliminate bladder cancer stem cells (CSCs). In this study, we showed a modified method for the isolation of bladder CSCs using a combination of differential adhesion method and serum-free culture medium (SFM) method. Materials and Methods: Trypsin-resistant cells and trypsin-sensitive cells were isolated from MB49, EJ and 5637 cells by a combination of differential adhesion method and SFM method. The CSCs characterizations of trypsin-resistant cells were verified by the flow cytometry, the western blotting, the quantitative polymerase chain reaction, the resistance to chemotherapy assay, the transwell assay, and the tumor xenograft formation assay. Results: Trypsin-resistant cells were isolated and identified in CSCs characters, with high expression of CSCs markers, higher resistance to chemotherapy, greater migration in vitro, and stronger tumorigenicity in vivo. Conclusion: Trypsin-resistant cells displayed specific CSCs properties. Our study showed trypsin-resistant cells were isolated successfully with a modified method using a combination of differential adhesion method and SFM method.
Descritores: Células-Tronco Neoplásicas/citologia
Neoplasias da Bexiga Urinária/patologia
Tripsina/farmacologia
Adesão Celular/efeitos dos fármacos
Separação Celular/métodos
Técnicas de Cultura de Células/métodos
-Células-Tronco Neoplásicas/química
Biomarcadores Tumorais
Diferenciação Celular
Meios de Cultura Livres de Soro
Vacinas Anticâncer/imunologia
Linhagem Celular Tumoral
Reação em Cadeia da Polimerase em Tempo Real
Citometria de Fluxo
Camundongos Nus
Limites: Animais
Camundongos
Responsável: BR1.1 - BIREME


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Texto completo SciELO Brasil
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Id: biblio-897058
Autor: Barreira, Luzia Aparecida Costa; Scheucher, Priscila Santos; Romeiro, Marilia Farignoli; Serra, Leonardo La; Badra, Soraya Jabur; Souza, William Marciel de; Figueiredo, Luiz Tadeu Moraes.
Título: Evaluating the use of fluorescence-based flow cytometry assay for dengue diagnosis using peripheral blood mononuclear cells
Fonte: Rev. Soc. Bras. Med. Trop;51(2):168-173, Mar.-Apr. 2018. graf.
Idioma: en.
Projeto: Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo.
Resumo: Abstract INTRODUCTION: Dengue virus (DENV) is the most important arthropod-borne viral disease worldwide with an estimated 50 million infections occurring each year. METHODS: In this study, we present a flow cytometry assay (FACS) for diagnosing DENV, and compare its results with those of the non-structural protein 1 (NS1) immunochromatographic assay and reverse transcriptase polymerase chain reaction (RT-PCR). RESULTS: All three assays identified 29.1% (39/134) of the patients as dengue-positive. The FACS approach and real-time RT-PCR detected the DENV in 39 and 44 samples, respectively. On the other hand, the immunochromatographic assay detected the NS1 protein in 40.1% (56/134) of the patients. The Cohen's kappa coefficient analysis revealed a substantial agreement among the three methods. CONCLUSIONS: The FACS approach may be a useful alternative for dengue diagnosis and can be implemented in public and private laboratories.
Descritores: Leucócitos Mononucleares/virologia
Dengue/diagnóstico
Vírus da Dengue/genética
Vírus da Dengue/imunologia
Anticorpos Antivirais/sangue
-Separação Celular
Cromatografia de Afinidade
Sensibilidade e Especificidade
Proteínas não Estruturais Virais/genética
Reação em Cadeia da Polimerase Via Transcriptase Reversa
Citometria de Fluxo
Fluorescência
Limites: Humanos
Tipo de Publ: Estudo Comparativo
Responsável: BR1.1 - BIREME


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Borras, Maria Rosa Losano
Id: biblio-1236635
Autor: Lima, Edimo Garcia de; Borras, Maria Rosa Losano.
Título: Linfocitos em hanseniase: II. linfocitos T do sangue periferico de portadores do Mal de Hansen / ?.
Fonte: s.l; s.n; 1985. 8 p.
Idioma: pt.
Descritores: Formação de Roseta
Hanseníase
Hanseníase Tuberculoide
Imunoglobulina G
Imunoglobulina M
Leucemia Linfoide
Leucócitos
Linfócitos B
Linfócitos T
Separação Celular
Responsável: BR191.1 - Biblioteca e Centro de Documentação Luiza Keffer
[{"text": "BR191.1", "_a": "06202/s"}]


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Id: biblio-1236314
Autor: Lima, Edimo Garcia de; Borras, Maria Rosa Losanao.
Título: Linfocitos em hanseniase: I. linfocitos B do sangue periferico de portadores de Mal de Hansen / ?.
Fonte: s.l; s.n; 1985. 10 p. tab.
Idioma: pt.
Descritores: Camundongos
Ficoll
Formação de Roseta
Hanseníase
Hanseníase Tuberculoide
Imunoglobulina G
Imunoglobulina M
Leucócitos Mononucleares
Linfócitos B
Linfócitos T
Separação Celular
Responsável: BR191.1 - Biblioteca e Centro de Documentação Luiza Keffer
[{"text": "BR191.1", "_a": "06181/s"}]


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Texto completo SciELO Brasil
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Id: biblio-1011228
Autor: Wollmann, Luciana; Suss, Paula; Mendonça, João; Luzia, Cesar; Schittini, Andressa; Rosa, George Willian Xavier da; Costa, Francisco; Tuon, Felipe F.
Título: Characterization of Decellularized Human Pericardium for Tissue Engineering and Regenerative Medicine Applications / Caracterização do Pericárdio Humano Descelularizado para Engenharia de Tecidos e Aplicações de Medicina Regenerativa
Fonte: Arq. bras. cardiol;113(1):11-17, July 2019. tab, graf.
Idioma: en.
Resumo: Abstract Background: Pericardium tissue allograft can be used for surgical repair in several procedures. One of the tissue engineering strategies is the process of decellularization. This process decreases immunogenic response, but it may modify the natural extracellular matrix composition and behavior. Objective: The aim of this study was to evaluate the effectiveness of cell removal, maintenance of extracellular matrix properties and mechanical integrity of decellularized human pericardium using a low concentration solution of sodium dodecyl sulfate. Methods: Decellularization was performed with sodium dodecyl sulfate and ethylenediaminetetraacetic acid. Histological analysis, DNA quantification, evaluation of glycosaminoglycans and collagen were performed. Biomechanical assay was performed using tensile test to compare the decellularization effects on tissue properties of tensile strength, elongation and elastic modulus. P < 0.05 was considered significant. Results: There was reduction in visible nuclei present in pericardium tissue after decellularization, but it retained collagen and elastin bundles similar to fresh pericardium. The DNA contents of the decellularized pericardium were significantly reduced to less than 511.23 ± 120.4 ng per mg of dry weight (p < 0.001). The biomechanical assay showed no significant difference for fresh or decellularized tissue. Conclusion: The decellularization process reduces cell content as well as extracellular matrix components without changing its biomechanical properties.

Resumo Fundameto: O enxerto de pericárdio pode ser usado em muitos procedimentos de correção cirúrgica. Uma das estratégias da engenharia tecidual é o processo de descelularização. No entanto, embora esse processo diminua a resposta imunogênica, a descelularização pode modificar tanto o comportamento como a composição da matriz extracelular natural. Objetivos: Avaliar a eficácia da descelularização usando baixa concentração de dodecil sulfato de sódio na remoção celular, na manutenção das propriedades da matriz extracelular e na integridade mecânica do pericárdio humano descelularizado. Métodos: A descelularização foi realizada com dodecil sulfato de sódio e ácido etilenodiamino tetra-acético. Foi realizada análise histológica, quantificação de DNA, e avaliação de glicosaminoglicanos e colágeno. O estudo biomecânico foi conduzido pelo teste de tração para comparar os efeitos da descelularização sobre as propriedades teciduais de resistência à tração, alongamento e módulo de elasticidade. Foi considerado um valor de p < 0,05 como estatisticamente significativo. Resultados: Observou-se uma redução na quantidade de núcleos presentes no pericárdio após a descelularização, apesar de manter quantidades similares de feixes de elastina e de colágeno. As concentrações de DNA do pericárdio descelularizado foram significativamente reduzidas para menos que 511,23 ± 120,4 ng por mg de peso seco (p < 0,001). O teste biomecânico não apontou diferenças entre os tecidos fresco e descelularizado. Conclusão: A descelularização reduziu a concentração de células bem como os componentes da matriz extracelular sem afetar suas propriedades biomecânicas.
Descritores: Pericárdio/citologia
Dodecilsulfato de Sódio/farmacologia
Tensoativos/farmacologia
Separação Celular/métodos
Engenharia Tecidual/métodos
-Pericárdio/efeitos dos fármacos
Fenômenos Biomecânicos
Medicina Regenerativa
Tecidos Suporte
Limites: Humanos
Adolescente
Adulto
Pessoa de Meia-Idade
Adulto Jovem
Tipo de Publ: Research Support, Non-U.S. Gov't
Editorial
Responsável: BR1.1 - BIREME


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Id: lil-782803
Autor: Malki, Leonardo Tannus; Dias, Ana Carolina; Jorge, Angelica Gobbi; Módulo, Carolina Maria; Rocha, Eduardo Melani.
Título: Lacrimal gland primary acinar cell culture: the role of insulin / Células acinares de glândula lacrimal em cultura primária: o papel da insulina
Fonte: Arq. bras. oftalmol;79(2):105-110, Mar.-Apr. 2016. tab, graf.
Idioma: en.
Resumo: ABSTRACT Purpose: The goal of the present study was to establish a protocol for primary culture of lacrimal gland acinar cells (LGACs) and to assess the effect of adding insulin to the culture media. Methods: LGACs were isolated and cultured from lacrimal glands of Wistar male rats. The study outcomes included cell number, viability, and peroxidase release over time and in response to three concentrations of insulin (0.5, 5.0, and 50.0 μg/mL). Results: In LGAC primary culture, cells started to form clusters by day 3. There was a time-response pattern of peroxidase release, which rose by day 6, in response to carbachol. Culture viability lasted for 12 days. An insulin concentration of 5.0 μg/mL in the culture medium resulted in higher viability and secretory capacity. Conclusions: The present method simplifies the isolation and culture of LGACs. The data confirmed the relevance of adding insulin to maintain LGACs in culture.

RESUMO Objetivo: O objetivo do estudo foi estabelecer um protocolo de cultura primária para o isolamento de células acinares da glândula lacrimal (CAGL) e avaliar a relevância de insulina no meio de cultura. Métodos: CAGL foram isoladas e cultivadas a partir das glândulas lacrimais de ratos Wistar machos. Os parâmetros analisados foram: o número de células, viabilidade e secreção da peroxidase ao longo do tempo e em resposta a três concentrações de insulina (0,5; 5,0 e 50,0 μg/ml). Resultados: Na cultura primária de CAGL as células passaram a se agrupar por volta do dia 3. A secreção de peroxidase em resposta ao carbacol aumentou no dia 6. O período de cultura viável foi limitado à 12 dias. Insulina à 5,0 μg/ml no meio de cultura resultou em viabilidade e capacidade secretora maior. Conclusão: o estudo descreveu um método para simplificar o isolamento e cultivo de CAGL. Os dados apresentados confirmam a importância da insulina na manutenção da cultura de CAGL.
Descritores: Células Acinares/citologia
Cultura Primária de Células/normas
Insulina/farmacologia
Aparelho Lacrimal/citologia
-Carbacol/metabolismo
Contagem de Células/métodos
Separação Celular/métodos
Ratos Wistar
Peroxidase/metabolismo
Células Acinares/efeitos dos fármacos
Células Acinares/metabolismo
Insulina/metabolismo
Aparelho Lacrimal/metabolismo
Limites: Animais
Masculino
Responsável: BR1.1 - BIREME


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Id: lil-631790
Autor: Santiago D, José G; D Pineda, Katiuska; Olmo, Gabriel.
Título: Dimensionamiento de los sistemas de microfiltración y ultrafiltración para la producción de la Toxina Diftérica elaborada en el Instituto Nacional de Higiene “Rafael Rangel” / Microfiltration and ultrafiltration sistems dimension for using in Difteria Toxin production in the Instituto Nacional de Higiene "Rafael Rangel"
Fonte: Rev. Inst. Nac. Hig;42(1):27-34, jun. 2011. ilus, graf, tab.
Idioma: es.
Resumo: Se evaluó el uso de la tecnología de Flujo de Filtración Tangencial (FFT), para obtener la toxina diftérica a partir de cultivos de la bacteria Corynebacterium diphtheriae, usando el proceso de Microfiltración (MF), para eliminar el paquete celular y posteriormente, a partir del filtrado obtenido, concentrar y diafiltrar la toxina diftérica usando el proceso de Ultrafiltración (UF). Se determinaron características de los filtros, condiciones de trabajo y dimensionamiento de los equipos a adquirir para la producción industrial de Toxina Diftérica. Se evaluaron el flujo, tiempo, rendimiento del proceso y las características del producto obtenido, utilizando cultivos con Toxina Diftérica en un equipo de filtración de laboratorio, diseñado para producir el efecto de FFT. Seseleccionó las membranas tipo cassettes, formato Médium Screen, porosidad 0,2 μm, como las adecuadas para el proceso de MF, ya que mostraron 100% de transmisión de la Toxina Diftérica, ausencia de restos celulares y flujo promedio de filtrado de 9.16 L/m2h. Así mismo, se seleccionaron las membranas tipo cassettes, formato Omega, porosidad 10 y 30 kDa, como las adecuadas para el proceso de UF, ya que mostraron 100% de recuperación de la toxina, ausencia de toxina en el filtrado y adecuados flujos de filtrado (97,5 y 125,9 L/m2h, respectivamente), Estos resultaron permitieron dimensionar, considerando las variables a utilizar en la producción industrial (Volumen 650 a 950 Litros, Tiempo de Procesos, 3 a 5 horas), el área de filtración de los equipos de MF y UF a adquirir, estimados en 20m2 y 5m2, respectivamente.

Tangential Flow Filtration (TFF) technology was evaluated to process diphtheria toxin which is produced by Cory ne - bacterium diphtheriae bacterium. Microfiltration (MF) is used to retain cells while allowing passage of the toxin to the filtrate stream. The filtrate is collected and further pro - cessed by Ultrafiltration (UF) to concentrate the toxin and to maximize the wash of small species by a Diafiltration step. Both, MF and UF processes were evaluated to specify the filters and corresponding critical process parameters to scale-up the application. As part of the evaluation, flow rate, processing time, yield and product attributes were characterized. The cell harvest containing the diphtheria toxin was processed using a laboratory scale TFF system designed to product the TFF effect. The evaluation demonstrated that a cassette in medium screen format and membrane with 0.2 μm pore is the right selection for the MF step. It showed 100% of toxin transmission without the presence of cellular debris and average process flux of 9.16 L/m2h. The UF step was conducted using the same laboratory equipment with cassettes in medium screen format with pores of 10 and 30 kD. It showed 100% retention of the toxin with a process flux of 97,5 and 125,9 L/m2h, respectively. These results were used to scale-up the application to process the industrial volume of 650 a 950 liters between 3 to 5 hours of processing time. Membrane area sizing of MF and UF to be acquired is estimated in 20 m2 and 5m2, respectively.
Descritores: Ultrafiltração/instrumentação
Separação Celular/métodos
Micropeneiramento/métodos
Toxina Diftérica/toxicidade
-Proteínas/metabolismo
Saúde Pública
Limites: Humanos
Masculino
Feminino
Tipo de Publ: Estudo de Avaliação
Responsável: VE9.1 - Biblioteca


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Id: lil-631801
Autor: Santiago D, José G; Faria, Mery; Olmo, Gabriel.
Título: Dimensionamiento de los sistemas de microfiltración y ultrafiltración para la producción de la toxina tetánica elaborada en el Instituto Nacional de Higiene Rafael Rangel / Microfiltration and ultrafiltration systems dimension for using in tetanus toxin production in the Instituto Nacional de Higiene "Rafael Rangel"
Fonte: Rev. Inst. Nac. Hig;42(2):25-32, jul. 2011. ilus, graf, tab.
Idioma: es.
Resumo: Se evaluó el uso de la tecnología de Flujo de Filtración Tan gencial (FFT), para obtener la toxina tetánica a partir de cultivos de la bacteria Clostridium tetani, usando el proceso de Micro filtración (MF), para eliminar el paquete celular y posteriormente, a partir del filtrado obtenido, concentrar y diafiltrar la Toxina Tetánica usando el proceso de Ultrafiltración (UF). Se determinaron las características de los filtros, condiciones de trabajo y el dimensionamiento de los equipos a adquirir para la nueva producción industrial de Toxina Tetánica. Se evaluaron el flujo, tiempo, rendimiento del proceso y las características del producto obtenido. Utilizando cultivos con Toxina Tetánica en un equipo de filtración de laboratorio, diseñado para producir el efecto de FFT. Se seleccionó las membranas tipo cassettes, formato Suspended Screen, porosidad 0,2μm, como las adecuadas para el proceso de MF, ya que mostraron un 100% de transmisión de la Toxina Tetánica, ausencia de restos celulares y flujo promedio de filtrado de 73.30 L/m2h. Así mismo, se seleccionaron las membranas tipo cassettes, formato Omega, porosidad 50 y 70 kDa, como las adecuadas para el proceso de UF, ya que mostraron 100% de recuperación de la toxina, ausencia de toxina en el filtrado y adecuados flujos de filtrado (106,7 y 104,4 L/m2h, respectivamente). Estos resultados permitieron dimensionar, considerando las variables a utilizar en la producción industrial (Volumen 650 a 950 litros, tiempo de procesos, 3 horas), el área de filtración de los equipos de MF y UF a adquirir, estimados en 20m2 y 5m2, respectivamente.

Tangential Flow Filtration (TFF) technology was evaluated to process tetanus toxin which is produced by Clostridium tetani bacterium. Microfiltration (MF) is used to retain cells while allowing passage of the toxin to the filtrate stream. The filtrate is co - llected and further processed by Ultrafiltration (UF) to concentrate the toxin and to maximize the wash of small species by a Dia filtration step. Both, MF and UF processes were evaluated to specify the filters and corresponding critical process parameters to scale-up the application. As part of the evaluation, flow ra te, processing time, yield and product attributes were characterized. The cell harvest containing the tetanus toxin was processed using a laboratory scale TFF system designed to product the TFF effect. The evaluation demonstrated that a cassette in sus pended screen format and membrane with 0.2μm pore is the right selection for the MF step. It showed 100% of toxin transmission without the presence of cellular debris and average process flux of 73.30 L/m2h. The UF step was conducted using the same system with cassettes in me dium screen format with pores of 50 and 70kDa. It showed 100% retention of the toxin with a process flux of 106,7 and 104,4L/m2h, respectively. To maximise product retention during UF, the 50 kDa membrane was selected. These results were used to scale-up the application to process the industrial volume of 650 a 950 liters in 3 hours of processing time. Membrane area sizing of MF and UF to be acquired is estimated in 20m2 and 5m2, respectively.
Descritores: Toxina Tetânica/análise
Infecções Bacterianas/complicações
Ultrafiltração/instrumentação
Proteínas/metabolismo
-Separação Celular/métodos
Micropeneiramento
Saúde Pública
Limites: Humanos
Masculino
Feminino
Tipo de Publ: Estudo de Avaliação
Responsável: VE9.1 - Biblioteca



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