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Id: lil-781786
Autor: Alvarez, Verónica; Blazquez, Rebeca; Sánchez-Margallo, Francisco Miguel; DelaRosa, Olga; Jorge, Inmaculada; Tapia, Angelo; García Casado, Javier.
Título: Estudio comparativo del aislamiento de exosomas derivados de células madre mesenquimales humanas para uso clínico / Comparative study of isolated human mesenchymal stem cell derived exosomes for clinical use / Estudo comparativo do isolamento de exossomos derivados de celulas-tronco mesenquimais humanas para uso clinico
Fonte: Acta bioquím. clín. latinoam;49(3):311-320, set. 2015. tab, graf.
Idioma: es.
Resumo: Los exosomas son microvesículas derivadas de la exocitosis que son liberados al espacio extracelular. Las funciones de los exosomas dependen en gran medida de la célula de la cual provienen. Los exosomas derivados de células madre mesenquimales (Mesenchymal Stem Cells, MSCs), al igual que las células de origen, poseen un enorme potencial terapéutico que favorece la regeneración tisular y reduce la inflamación. Los prometedores resultados preclínicos que emplean estos exosomas han abierto las puertas a la futura aplicación clínica de estas vesículas. El diseño de nuevos protocolos que permitan el aislamiento de exosomas para su aplicación clínica es una necesidad actual teniendo en cuenta el enorme interés que ha surgido a raíz de los prometedores resultados en ensayos preclínicos. El objetivo de este trabajo ha sido comparar, en términos de rendimiento, tamaño y pureza, diferentes métodos de aislamiento de exosomas a partir de MSCs humanas. Los resultados obtenidos demuestran que el uso de filtros concentradores para sobrenadantes de cultivos podría ser una alternativa a los protocolos convencionales basados en la ultracentrifugación. Los resultados de este trabajo permiten orientar en el diseño de protocolos para la obtención de exosomas derivados de MSCs en grado clínico...
Descritores: Células-Tronco
Exossomos
-Protocolos
Separação Celular
Separação Imunomagnética
Limites: Humanos
Responsável: AR144.1 - CIBCHACO - Centro de Información Biomedica del Chaco


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Id: lil-631801
Autor: Santiago D, José G; Faria, Mery; Olmo, Gabriel.
Título: Dimensionamiento de los sistemas de microfiltración y ultrafiltración para la producción de la toxina tetánica elaborada en el Instituto Nacional de Higiene Rafael Rangel / Microfiltration and ultrafiltration systems dimension for using in tetanus toxin production in the Instituto Nacional de Higiene "Rafael Rangel"
Fonte: Rev. Inst. Nac. Hig;42(2):25-32, jul. 2011. ilus, graf, tab.
Idioma: es.
Resumo: Se evaluó el uso de la tecnología de Flujo de Filtración Tan gencial (FFT), para obtener la toxina tetánica a partir de cultivos de la bacteria Clostridium tetani, usando el proceso de Micro filtración (MF), para eliminar el paquete celular y posteriormente, a partir del filtrado obtenido, concentrar y diafiltrar la Toxina Tetánica usando el proceso de Ultrafiltración (UF). Se determinaron las características de los filtros, condiciones de trabajo y el dimensionamiento de los equipos a adquirir para la nueva producción industrial de Toxina Tetánica. Se evaluaron el flujo, tiempo, rendimiento del proceso y las características del producto obtenido. Utilizando cultivos con Toxina Tetánica en un equipo de filtración de laboratorio, diseñado para producir el efecto de FFT. Se seleccionó las membranas tipo cassettes, formato Suspended Screen, porosidad 0,2μm, como las adecuadas para el proceso de MF, ya que mostraron un 100% de transmisión de la Toxina Tetánica, ausencia de restos celulares y flujo promedio de filtrado de 73.30 L/m2h. Así mismo, se seleccionaron las membranas tipo cassettes, formato Omega, porosidad 50 y 70 kDa, como las adecuadas para el proceso de UF, ya que mostraron 100% de recuperación de la toxina, ausencia de toxina en el filtrado y adecuados flujos de filtrado (106,7 y 104,4 L/m2h, respectivamente). Estos resultados permitieron dimensionar, considerando las variables a utilizar en la producción industrial (Volumen 650 a 950 litros, tiempo de procesos, 3 horas), el área de filtración de los equipos de MF y UF a adquirir, estimados en 20m2 y 5m2, respectivamente.

Tangential Flow Filtration (TFF) technology was evaluated to process tetanus toxin which is produced by Clostridium tetani bacterium. Microfiltration (MF) is used to retain cells while allowing passage of the toxin to the filtrate stream. The filtrate is co - llected and further processed by Ultrafiltration (UF) to concentrate the toxin and to maximize the wash of small species by a Dia filtration step. Both, MF and UF processes were evaluated to specify the filters and corresponding critical process parameters to scale-up the application. As part of the evaluation, flow ra te, processing time, yield and product attributes were characterized. The cell harvest containing the tetanus toxin was processed using a laboratory scale TFF system designed to product the TFF effect. The evaluation demonstrated that a cassette in sus pended screen format and membrane with 0.2μm pore is the right selection for the MF step. It showed 100% of toxin transmission without the presence of cellular debris and average process flux of 73.30 L/m2h. The UF step was conducted using the same system with cassettes in me dium screen format with pores of 50 and 70kDa. It showed 100% retention of the toxin with a process flux of 106,7 and 104,4L/m2h, respectively. To maximise product retention during UF, the 50 kDa membrane was selected. These results were used to scale-up the application to process the industrial volume of 650 a 950 liters in 3 hours of processing time. Membrane area sizing of MF and UF to be acquired is estimated in 20m2 and 5m2, respectively.
Descritores: Toxina Tetânica/análise
Infecções Bacterianas/complicações
Ultrafiltração/instrumentação
Proteínas/metabolismo
-Separação Celular/métodos
Micropeneiramento
Saúde Pública
Limites: Humanos
Masculino
Feminino
Tipo de Publ: Estudo de Avaliação
Responsável: VE9.1 - Biblioteca


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Id: lil-631790
Autor: Santiago D, José G; D Pineda, Katiuska; Olmo, Gabriel.
Título: Dimensionamiento de los sistemas de microfiltración y ultrafiltración para la producción de la Toxina Diftérica elaborada en el Instituto Nacional de Higiene “Rafael Rangel” / Microfiltration and ultrafiltration sistems dimension for using in Difteria Toxin production in the Instituto Nacional de Higiene "Rafael Rangel"
Fonte: Rev. Inst. Nac. Hig;42(1):27-34, jun. 2011. ilus, graf, tab.
Idioma: es.
Resumo: Se evaluó el uso de la tecnología de Flujo de Filtración Tangencial (FFT), para obtener la toxina diftérica a partir de cultivos de la bacteria Corynebacterium diphtheriae, usando el proceso de Microfiltración (MF), para eliminar el paquete celular y posteriormente, a partir del filtrado obtenido, concentrar y diafiltrar la toxina diftérica usando el proceso de Ultrafiltración (UF). Se determinaron características de los filtros, condiciones de trabajo y dimensionamiento de los equipos a adquirir para la producción industrial de Toxina Diftérica. Se evaluaron el flujo, tiempo, rendimiento del proceso y las características del producto obtenido, utilizando cultivos con Toxina Diftérica en un equipo de filtración de laboratorio, diseñado para producir el efecto de FFT. Seseleccionó las membranas tipo cassettes, formato Médium Screen, porosidad 0,2 μm, como las adecuadas para el proceso de MF, ya que mostraron 100% de transmisión de la Toxina Diftérica, ausencia de restos celulares y flujo promedio de filtrado de 9.16 L/m2h. Así mismo, se seleccionaron las membranas tipo cassettes, formato Omega, porosidad 10 y 30 kDa, como las adecuadas para el proceso de UF, ya que mostraron 100% de recuperación de la toxina, ausencia de toxina en el filtrado y adecuados flujos de filtrado (97,5 y 125,9 L/m2h, respectivamente), Estos resultaron permitieron dimensionar, considerando las variables a utilizar en la producción industrial (Volumen 650 a 950 Litros, Tiempo de Procesos, 3 a 5 horas), el área de filtración de los equipos de MF y UF a adquirir, estimados en 20m2 y 5m2, respectivamente.

Tangential Flow Filtration (TFF) technology was evaluated to process diphtheria toxin which is produced by Cory ne - bacterium diphtheriae bacterium. Microfiltration (MF) is used to retain cells while allowing passage of the toxin to the filtrate stream. The filtrate is collected and further pro - cessed by Ultrafiltration (UF) to concentrate the toxin and to maximize the wash of small species by a Diafiltration step. Both, MF and UF processes were evaluated to specify the filters and corresponding critical process parameters to scale-up the application. As part of the evaluation, flow rate, processing time, yield and product attributes were characterized. The cell harvest containing the diphtheria toxin was processed using a laboratory scale TFF system designed to product the TFF effect. The evaluation demonstrated that a cassette in medium screen format and membrane with 0.2 μm pore is the right selection for the MF step. It showed 100% of toxin transmission without the presence of cellular debris and average process flux of 9.16 L/m2h. The UF step was conducted using the same laboratory equipment with cassettes in medium screen format with pores of 10 and 30 kD. It showed 100% retention of the toxin with a process flux of 97,5 and 125,9 L/m2h, respectively. These results were used to scale-up the application to process the industrial volume of 650 a 950 liters between 3 to 5 hours of processing time. Membrane area sizing of MF and UF to be acquired is estimated in 20 m2 and 5m2, respectively.
Descritores: Ultrafiltração/instrumentação
Separação Celular/métodos
Micropeneiramento/métodos
Toxina Diftérica/toxicidade
-Proteínas/metabolismo
Saúde Pública
Limites: Humanos
Masculino
Feminino
Tipo de Publ: Estudo de Avaliação
Responsável: VE9.1 - Biblioteca


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Id: lil-429033
Autor: Amaru, Ricardo; Silvestre, Julio; Torrez, Gina; Miguez, Hortencia; Peñaloza, Rosario; Araoz, Ruben; Cuevas, Heriverto.
Título: Primera experiencia en aislamiento de celulas endoteliales humans en Bolivia / First experience in the isolation of human endothelian cells in Bolivia
Fonte: Cuad. Hosp. Clín = Cuad. - Hosp. clín;50(2):49-54, 2005. tab, graf.
Idioma: es.
Resumo: INTRODUCCIÓN: las células endoteliales pueden proveer información valiosa con respecto a muchos procesos patológicos como la aterosclerosis, inflamación, neoplasia y angiogénesis. Este trabajo describe la primera experiencia boliviana en el aislamiento y cultivo de células endoteliales humanas derivadas de la vena umbilical (HUVEC). MÉTODOS: Un segmento largo de cordón umbilical se utilizó para el aislamiento y fue tratado por digestión con colagenasa. Las células endoteliales fueron desprendidas de la íntima y posteriormente cultivadas en medio de cultivo M199 y suero fetal bovino. Técnicas morfológicas, inmunohistoquímicas y de citometría de flujo fueron utilizadas para identificar estas células. RESULTADOS: Se examinaron las células endoteliales obtenidas por análisis morfológico e inmunohistoquímico. El marcaje con CD34 fue positivo para más del 90% de las células obtenidas por digestión con colagenasa analizado por citometría de flujo. CONCLUSIÓN Se logró aislar y cultivar HUVEC de manera exitosa. Una gran variedad de experimentos y aplicaciones en ciencias biomédicas pueden ser potencialmente factibles.

INTRODUCTION: endothelial cell study yields valuable information concerning many pathologic processes such as atherosclerosis, inflammation, neoplasia and angiogenesis. This paper describes the first Bolivian experience in isolation and culture of human umbilical vein endothelial cells (HUVEC). METHODS: a long segment of the umbilical cord was processed by collagenase digestion. Endothelial cells were detached from intima and further cultured using M199 culture media. Morphologic, immunochemistry and flow cytometry approaches were used to identify these cells. RESULTS: morphologic and immunochemistry analysis of the pool of obtained cells were positive for HUVEC. CD34 staining was positive in more than 90% of the cells obtained by collagenase digestion as assessed by flow cytometry. CONCLUSION: HUVEC were successfully isolated for the first time in Bolivia. A great deal of further experiments and applications in biomedical sciences is possible
Descritores: Células/metabolismo
Células/patologia
Separação Celular/classificação
Separação Celular/estatística & dados numéricos
Separação Celular/instrumentação
Separação Celular/métodos
Separação Celular/normas
-Citometria de Fluxo/classificação
Citometria de Fluxo/estatística & dados numéricos
Citometria de Fluxo/instrumentação
Citometria de Fluxo/métodos
Técnicas de Cultura de Células/classificação
Técnicas de Cultura de Células/instrumentação
Técnicas de Cultura de Células/métodos
Limites: Humanos
Masculino
Feminino
Recém-Nascido
Tipo de Publ: Relatos de Casos
Responsável: BO6.1 - Biblioteca


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Texto completo SciELO Cuba
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Id: lil-731980
Autor: Pérez Díaz, Ana B; Pérez Guevara, Olga L; Sierra Vázquez, Beatriz de la C; Aguirre Pérez, Eglys; García Menéndez, Gissel; Álvarez Vera, Mayling; Gonzalez Rubio, Daniel; Limonta Velázquez, Daniel; Rosario Domínguez, Delfina; Izquierdo Oliva, Alienys; Guzmán Tirado, María G.
Título: Expresión de genes de IFN g y TNF a en tejidos de fallecidos por dengue / Expression of IFN g and TNF a genes in tissues from dengue fatal cases
Fonte: Rev. cuba. med. trop;66(2):286-294, Mayo.-ago. 2014.
Idioma: es.
Resumo: INTRODUCCIÓN: el dengue es considerada la enfermedad viral transmitida por artrópodos de mayor importancia en el humano a nivel global, con un estimado de 100 millones de infecciones anuales y más de 20 000 muertes. La patogénesis de la enfermedad grave por dengue no está totalmente esclarecida. Sin embargo, existen estudios que la asocian con infecciones secuenciales por diferentes serotipos virales, activación de células T de memoria e hiperproducción de citocinas. OBJETIVOS: determinar la expresión cualitativa de genes de las citoquinas IFNγ y TNFα en tejidos de bazo e hígado de casos fatales por dengue 3 o dengue 4 mediante la detección de ARNm y comprobar su papel en la patogénesis de la enfermedad. MÉTODOS: El estudio se realizó a través de un método de retro-transcripción y reacción en cadena de la polimerasa (RT-PCR) con el uso de cebadores específicos. RESULTADOS: la expresión de IFNγ predominó a la de TNFα, y fue más evidente en los tejidos de bazo que del hígado. CONCLUSIONES: los resultados obtenidos apoyan el papel patogénico del patrón de respuesta Th1 en el dengue grave y constituye el primer estudio realizado de este tipo en la infección por dengue.

INTRODUCTION: dengue is considered to be the most important arthropod-borne human disease worldwide, with an estimated 100 million new cases per year and more than 20 000 deaths. The pathogenesis of severe dengue is not fully understood. However, certain studies have associated it with sequential infections by different viral serotypes, memory T cell activation and cytokine hyperproduction. OBJECTIVES: determine the qualitative expression of genes of cytokines IFNγ and TNFα in spleen and liver tissues from dengue 3 and 4 fatal cases, detecting RNAm and verifying their role in the pathogenesis of the disease. METHODS: the study was conducted by retrotranscription and polymerase chain reaction (RT-PCR) using specific primers. RESULTS: expression of IFNγ predominated over that of TNFα, and was more evident in spleen than in liver tissues. CONCLUSIONS: results support the pathogenic role of the Th1 response pattern in severe dengue. This is the first study of its type about dengue infection.
Descritores: Separação Celular/métodos
Reação em Cadeia da Polimerase/métodos
Dengue Grave/mortalidade
Vírus da Dengue/patogenicidade
Limites: Humanos
Responsável: CU1.1 - Biblioteca Médica Nacional


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Texto completo SciELO Cuba
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Id: lil-777059
Autor: Pérez Elias, Yendrys; Obregón Fuentes, Ana Margarita; Rodríguez Reyes, Isabel del Carmen; Alfonso González, Martha Julia.
Título: Actualización en el diagnóstico de la leptospirosis humana / Updating on the diagnosis of human leptospirosis
Fonte: Rev. cuba. med. mil;44(4):416-427, oct.-dic. 2015.
Idioma: es.
Resumo: La leptospirosis humana es una enfermedad zoonótica de distribución mundial, con frecuencia subdiagnosticada por presentar un amplio espectro de manifestaciones clínicas. El objetivo es presentar una actualización sobre el diagnóstico de la leptospirosis humana. Se consultó la bibliografía disponible sobre el tema en las bases de datos de Scielo, HINARI, Pubmed-Medline y diferentes textos y artículos en los que se profundizaba en el diagnóstico. Las técnicas microbiológicas son la base de la confirmación de la enfermedad. La observación por microscopía de campo oscuro es poco sensible, ya que las leptospiras se pueden confundir con filamentos proteicos u otros artefactos. El aislamiento del agente etiológico constituye la prueba de oro, aunque ofrece un resultado retrospectivo. La reacción en cadena de la polimerasa es un método útil para el diagnóstico rápido de la infección. El diagnóstico serológico cobra vital importancia en esta entidad, pues supera en rapidez, sencillez y bajo costo al cultivo. La microaglutinación con antígenos vivos es la técnica de referencia. Las pruebas rápidas basadas en la inmunocromatografía de flujo lateral son una variante muy útil, ya que ofrecen el resultado entre 5 y 30 minutos.

The human leptospirosis is zoonotic disease with worldwide distribution, frequently present a difficult diagnosis because have a wide spectrum of clinical manifestations. The objective of this work is to present an upgrade on the diagnosis of the human leptospirosis; for it was consulted it the available bibliography on the topic in the databases of Scielo, HINARI, Pubmed-Medline and different texts and articles of the last five years to deepen in the diagnosis. The microbiologic diagnostic is the base of the confirmation of the illness; it depends on the taking of sample in the appropriate moment and the correct indication of the complementary one according to the clinical phase. The observation for microscopy of dark field is not very sensitive since the leptospiras can made a mistake with poetics filaments or other devices. The etiologic agent's isolation constitutes the gold standard test; although offers a retrospective result. The polymerase chain reaction is a method used for the quick diagnosis of the infection, the quantitative variant in real time shows substantial advantages, because it allows the immediate reading and avoids the electrophoresis step, these techniques are not available for its high cost. The serologic diagnostic charges vital importance in this entity, it overcomes in speed, simplicity and low cost to the cultivation; the microagglutinación with a live antigen is considered the reference technique. The detection of IgM for enzyme linked immunobsorbent assay has been broadly used. The rapid tests based on the lateral flow immunochromatography, are a very useful variant, since they offer the result between 5 and 30 minutes.
Descritores: Literatura de Revisão como Assunto
Separação Celular/estatística & dados numéricos
Reação em Cadeia da Polimerase/métodos
Leptospirose/diagnóstico
Limites: Humanos
Responsável: CU1.1 - Biblioteca Médica Nacional


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Id: biblio-837651
Autor: Orozco-Romero, María de Jesús; Borja-Urby, Raúl; Ponce-Castañeda, Martha Verónica; Durán-Figueroa, Noé Valentín.
Título: Aislamiento y caracterización celular de exosomas de plasma para su uso como biomarcadores de diagnóstico / Isolation and cellular characterization of exosomes from plasma for their use as diagnostic biomarkers / Purificação e caracterização celular de exossomos para seu uso como biomarcadores de diagnóstico
Fonte: Acta bioquím. clín. latinoam;50(4):783-790, dic. 2016. ilus, graf, tab.
Idioma: es.
Resumo: Los exosomas son vesículas membranosas extracelulares esenciales en la comunicación intercelular a larga distancia, viajan en los fluidos corporales y entregan mensajes moleculares dirigidos a la mayoría de las células de todo el organismo. La liberación de mensajes vía exosomas ocurre en forma de ADN, ARN o proteínas; dicha liberación se ha asociado a diferentes condiciones fisiológicas normales y patológicas, como el cáncer. Por lo anterior, el aislamiento eficiente y caracterización celular de exosomas de plasma es clave para su uso como biomarcadores no invasivos de diversas enfermedades. En el presente estudio se purificaron exosomas a partir de muestras clínicas de plasmas de pacientes previamente diagnosticados con retinoblastoma y de individuos sanos como control. Los exosomas recuperados fueron caracterizados a nivel celular por microscopia electrónica de transmisión empleando una técnica de criogenia. Para demostrar la correcta purificación de exosomas se confirmó la presencia de las proteínas transmembranales CD63 y CD81 mediante immunoblot. Adicionalmente de los exosomas purificados, se identificaron ARNs pequeños no codificantes llamados microARNs. En general, se describe la purificación y caracterización celular de exosomas obtenidos de plasma humano para su potencial uso como biomarcadores.

Exosomes are small extracellular vesicles essential in intercellular communication; they act as vehicles of broad scope. They are travelling in body fluids and delivering molecular messages to cells in the organism. Messages released by exosomes like DNA, RNA and proteins are associated with different pathological conditions including cancer. Therefore, the efficient isolation and cellular characterization of exosomes from plasma is essential to use them as biomarkers in many diseases. Here, exosomes were purified from patients diagnosed with pediatric cancer and healthy individuals as control. The exosomes recovered were characterized using cryogenic transmission electron microscopy. Moreover, the presence of CD63 and CD81 transmembrane proteins was confirmed using Western blot. Besides, miRNAs presence was identified from exosomes. This work describes a complete technique to isolate and characterize exosomes from human plasma, recognizing their potential as biomarkers.

Os exossomos são vesículas membranosas extracelulares essenciais na comunicação intercelular de longa distância; eles viajam em fluidos corporais e entregam mensagens moleculares dirigidas à maioria das células de todo o organismo. A liberação de mensagens através dos exossomos ocorre em forma de DNA, RNA ou proteínas; essa liberação foi associada a diferentes condições fisiológicas normais e patológicas, tais como o câncer. Por tudo isso, o eficiente isolamento e caracterização celular de exossomos de plasma é chave para sua utilização como biomarcadores não invasivos de várias doenças. No presente estudo, exossomos foram purificados a partir de amostras clínicas de plasmas de pacientes que tinham sido diagnosticados previamente com retinoblastoma e de indivíduos saudáveis como controle. Os exossomos recuperados foram caracterizados a nível celular por microscopia eletrônica de transmissão usando uma técnica de criogenia. Para demonstrar a correta purificação dos exossomos, foi confirmada a presença de proteínas transmembranares CD63 e CD81 usando inmunoblot. Além dos exossomos purificados foram identificados ARNs não codificantes pequenos chamados microARNs. Em geral os métodos de purificação e caracterização celular de exossomos obtidos de plasma humano são descritos por seu potencial utilização como biomarcadores.
Descritores: Biomarcadores
Separação Celular/estatística & dados numéricos
Exossomos
Retinoblastoma/diagnóstico
-Diagnóstico
Limites: Humanos
Masculino
Feminino
Lactente
Pré-Escolar
Responsável: AR1.2 - Instituto de Investigaciónes Epidemiológicas


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Texto completo SciELO Brasil
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Id: lil-787567
Autor: Souza, Luiz A. de; Silva, Luiz A. F. da; Oliveira, Benito J. N. A de; Lacerda, Elisângela de P. S; Beletti, Marcelo E; Lima, Aliny P. de; Dias, Tais Andrade; Eurides, Duvaldo.
Título: Método imunomagnético associado ao meio MesenCult® na obtenção de células mononucleares da medula óssea de coelhos negativas para o anticorpo monoclonal CD45 / Immunomagnetic method associated with MesenCult® medium to obtain bone marrow mononuclear cells from rabbits negative for CD45 monoclonal antibody
Fonte: Pesqui. vet. bras = Braz. j. vet. res;36(4):339-344graf.
Idioma: pt.
Resumo: O objetivo detse artigo é de descrever um protocolo de isolamento das células mononucleares da medula óssea de coelhos, seguido de purificação celular por depleção negativa com o anticorpo monoclonal CD45 e posterior expansão em meio de cultura MesenCult®. Dez coelhos machos adultos, da raça Nova Zelândia, com idade média de 1,0±0,2 anos e peso médio 3,5±0,24kg, foram utilizados para padronização da metodologia. O isolamento das células mononuclares da medula óssea foi realizado pelo gradiente de densidade Ficoll-paque® e a purificação e obtenção das células- pela depleção negativa com o anticorpo monoclonal CD45 em base imunomagnética. A população celular obtida foi expandida posteriormente em meio de cultura MesenCult®. No isolamento pelo gradiente de icoll-Paque® foi obtido um rendimento médio de 7,31x106 células/mL. Após purificação e obtenção das possíveis células-tronco mesenquimais pela base imunomagnética, houve um decréscimo do rendimento para 2,28x106 células/mL, mas o processo de expansão foi incrementado pelo cultivo celular. Os resultados indicaram que as células obtidas da fração mononuclear da medula óssea, cultivadas in vitro foram capazes de gerar células aderentes 24 horas após o cultivo, com predominância de células fibroblastóides sugestivas de células-tronco mesenquimais. Concluiu-se que a obtenção de células-tronco mesenquimais pode ser alcançada após purificação das células mononucleares da medula óssea de coelhos pelo método imunomagético, o meio de cultura MesenCult® proporciona um ambiente adequado para a rápida expansão in vitro e o número de passagens exerce influência negativa sobre as características morfológicas das células.

The objective of this study was to describe guidelines for the isolation of bone marrow mononuclear cells from rabbits, followed by cell purification by negative depletion with CD45 monoclonal antibody, and further expansion in MesenCult® medium. Ten adult male New Zealand White rabbits, age average of 1.0±0.2 years and weighting 3.5±0.24kg, were used to obtain a standardized method. The mononuclear cells of the bone marrow were isolated with Ficoll-paque® density gradient centrifugation, and the cell purification and acquisition was completed by negative depletion with CD45 monoclonal antibody in immunomagnetic base. The cell population obtained was expanded in MesenCult® medium. Through isolation with Ficoll-paque® density gradient was possible to obtain an average yield of 7.31x106 cells/mL. After purification and acquisiton of potential mesenchymal stem cells by the immunomagnetic base, there was a yield decrease to 2.28x106 cells/mL; however the expansion process was increased in cell culture. The results indicated that cells obtained from the mononuclear fraction of bone marrow and cultivated in vitro were capable to generate adherent cells 24 hours after culture, with predominance of fibroblastoid cells suggestive of mesenchymal stem cells. It can be concluded that mesenchymal stem cells can be achieved with purified rabbit bone marrow mononuclear cells through the immunomagnetic method, as the MesenCult® medium provides a suitable environment for a quick in vitro expansion, and the number of passages exerts negative influence on the morphological characteristics.
Descritores: Células-Tronco Adultas
Anticorpos Monoclonais/análise
Células da Medula Óssea
Separação Celular/veterinária
-Lagomorpha
Separação Imunomagnética/veterinária
Técnicas In Vitro/veterinária
Limites: Animais
Masculino
Coelhos
Responsável: BR68.1 - Biblioteca Virginie Buff D'Ápice


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Id: lil-774267
Autor: Lemos, Julia Pereira.
Título: Papel do receptor 1 de esfingosina-1-fosfato nos distúrbios de migração celular intratímica em camundongos NOD / Role of sphingosine 1-phosphate receptor 1 in the intrathymic cell migration disorders in NOD mice.
Fonte: Rio de Janeiro; s.n; 2014. xiii,89 p. ilus, tab.
Idioma: pt.
Tese: Apresentada a Instituto Oswaldo Cruz para obtenção do grau de Mestre.
Resumo: Camundongos NOD (non-obese diabetic) desenvolvem diabetes tipo 1 (DT1)espontaneamente em decorrência da destruição das células beta de forma T-dependente nas ilhotaspancreáticas. Nesse sentido, diversos trabalhos demonstraram o envolvimento de células T e do timona patogênese do DT1. Diversas alterações podem ser observadas no timo de camundongos NOD,como presença de espaços perivasculares (PVS) gigantes contendo timócitos maduros simplespositivos(SP) CD4+e CD8+, além de células T reguladoras CD4+CD25+Foxp3+. Além disso, timócitosde NOD, em especial os maduros, apresentam menor expressão da integrina VLA-5 e capacidademigratória reduzida frente à fibronectina, sugerindo que esse defeito possa estar envolvido na retençãodessas células no órgão. Porém, essa retenção parece ser temporária, sugerindo o envolvimento deoutros mecanismos moleculares regulatórios do processo de saída de células T do timo. Diversostrabalhos demonstraram o papel essencial de S1P1 e seu ligante, S1P, na saída de timócitos do timoem condições normais e patológicas. Sendo assim, o objetivo principal desse trabalho foi investigar opapel das interações mediadas por S1P1 nos distúrbios de migração celular intratímica emcamundongos NOD. Através de citometria de fluxo, observamos que timócitos de camundongos NODapresentam menor expressão de S1P1 quando comparados a timócitos de camundongos C57BL/6.Essa menor expressão do receptor também foi observada em timócitos maduros CD62LhiVLA-5-, queapresentam fenótipo condizente com o das células que se encontram retidas nos PVS. Ao contrário, ostimócitos maduros CD62LhiVLA-5+não apresentaram diferença significativa na expressão doreceptor...

NOD mice spontaneously develop type 1 diabetes following T cell-dependent destruction ofpancreatic beta cells. Several works showed the involvement of T cell and the thymus in type 1diabetes phatogenesis. Several alterations are observed in NOD thymus, such as the presence of giantperivascular spaces (PVS) filled with mature simple-positive CD4+, CD8+and CD4+CD25+Foxp3+regulatory T cells. Moreover, NOD thymocytes have a reduced expression of the integrin VLA-5 anddecreased haptotatic migration towards fibronectin, suggesting that the VLA-5 defect could beinvolved in the retention of these cells inside the thymus. In contrast, thymocytes retention seems to betemporaly, suggesting the involvement of other regulatory molecules related to cell migration. Severalreports show the role of the sphingosine-1 phosphate receptor 1 (S1P1) on T cell migration and exitfrom thymus in normal and pathological conditions. Thus, the aim of our work is to investigate therole of S1P1-mediated interactions in NOD mice intrathymic migration disorders. In flow cytometryassays, we observed a lower S1P1 expression on NOD mice thymocytes compared with C57BL/6controls, including VLA-5 negative mature CD4+CD62Lhi and CD8+CD62Lhi subpopulations, whichbear the phenotype of the cells retained within giant PVS. By contrast, mature VLA-5 positivethymocytes did not present significant differences in S1P1 expression...
Descritores: Diabetes Mellitus Tipo 1/epidemiologia
Doenças Linfáticas
Camundongos Endogâmicos NOD
Esfingosina
Timo
-Separação Celular
Citometria de Fluxo
Reação em Cadeia da Polimerase Via Transcriptase Reversa
Limites: Camundongos
Tipo de Publ: Estudo de Avaliação
Responsável: BR15.1 - Biblioteca de Ciências Biomédicas


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Id: lil-774257
Autor: Reis, Rafaella Ferreira.
Título: Estudo de células T regulatórias em camundongos deficientes em WASP / T Cell study regulatory in mice disabled in wasp.
Fonte: Rio de Janeiro; s.n; 2014. xiv,74 p. ilus, graf.
Idioma: pt.
Tese: Apresentada a Instituto Oswaldo Cruz para obtenção do grau de Mestre.
Resumo: A Síndrome de Wiskott-Aldrich (WAS) é uma imunodeficiência associada a infecçõesrecorrentes, câncer e autoimunidade. Ela é causada por mutações no gene que codifica amolécula WASP (“Wiskott-Aldrich syndrome protein”), envolvida na reorganização docitoesqueleto de actina em células de origem hematopoiética. Camundongos deficientes emWasp (WKO) apresentam migração leucocitária e proliferação linfocitária deficientes, edesenvolvem colite. Esse processo inflamatório está associado a eventos deimunodesregulação importantes, como participação exacerbada de células Th2 e diminuiçãode células T regulatórias (Treg) no timo e baço desses animais. Assim, esse trabalho visacaracterizar as células Treg tímicas e avaliar os mecanismos potencialmente relacionados àdiminuição dessas células no timo de camundongos WKO. Nas análises de CD25 e CD122,importantes para a diferenciação de células Treg, observamos uma diminuição na expressãode CD25 na população de células CD4+CD8-Foxp3+, além de uma diminuição no númeropercentual dessa população. As células Treg tímicas de animais WKO apresentaram níveisnormais de CD122 e de moléculas de ativação, mas mostraram uma diminuição na expressãoda molécula funcional CD39, responsável pela hidrólise tecidual de ATP. Saliente-se aindaque estudos sobre a morte celular ex-vivo, a transmigração in vitro mediada por S1P e alocalização intratímica de células Treg não revelaram diferenças significativas na comparaçãoentre animais WKO e seus controles. De forma interessante, precursores tímicos de célulasTreg CD4+CD8-CD25+Foxp3-também se apresentaram diminuídos em WKO, assim como ascélulas Treg Helios...

The Wiskott-Aldrich syndrome (WAS) is an immunodeficiency associated with recurrentinfections, malignancies and autoimmunity. It is caused by mutations in the gene encodingWASP (Wiskott-Aldrich syndrome protein), a molecule involved in the actin cytoskeletonrearrangements in hematopoietic cells. Wasp deficient mice (WKO) show impaired leukocytemigration and lymphocyte proliferation, and also develop colitis. This inflammatory processis associated with important immunodysregulation events, such as exacerbated participationof Th2 cells and decreased numbers of regulatory T cells (Treg) in the thymus and spleen ofthese animals. Thus, this study aims to characterize the thymic Treg cells and evaluate thepotential mechanisms involved in the decreased number of these cells in the thymus of WKOmice. In the analysis of CD25 and CD122, important molecules for the differentiation of Tregcells, we observed a decreased expression of CD25 in the CD4+CD8-Foxp3+ cells, and adecrease in the percentage number of this population. WKO Treg cells showed normal levelsof CD122 and activation molecules, but present a decreased expression of the functionalmarker CD39, molecule responsible for ATP hydrolysis in the tissues. Also, it is important topoint out that studies about ex vivo cell death, S1P-mediated in vitro transmigration andintratymic localization of Treg cells revealed no significant differences between WKOanimals and their controls. Interestingly, both CD4+CD8-CD25+Foxp3- Treg precursors andHelios+ Treg cells are reduced in WKO thymus. More over, we also observed an importantincrease in the basal expression of pSTAT-5 in Treg cells of WKO mice and their precursors.Altogether, our results indicate an important role of Wasp in thymic Treg cell development,and point to the necessity of further studies on the mechanisms involved in the generation ofTreg cells in WKO mice...
Descritores: Síndrome de Wiskott-Aldrich/genética
Linfócitos T Reguladores
Proteína da Síndrome de Wiskott-Aldrich
-Separação Celular
Limites: Camundongos
Responsável: BR15.1 - Biblioteca de Ciências Biomédicas



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