Base de dados : LILACS
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Id: biblio-971487
Autor: Souza, Raquel Santos de.
Título: Diferenças na expressão gênica e na forma de direcionamento da região COOH-terminal de císteina-proteinase B de Leishmania (Leishmania) amazonensis / Differences in gene expression and direction of the COOH-Terminal region of cysteine proteinase B of Leishmania (Leishmania) amazonensis.
Fonte: Rio de Janeiro; s.n; 2015. ix, 104 p. ilus, tab, graf.
Idioma: pt.
Tese: Apresentada a Instituto Oswaldo Cruz para obtenção do grau de Mestre.
Resumo: A Leishmania (Leishmania) amazonensis apresenta mecanismos de adaptação guiados porsuas proteinases. Neste contexto, destacam-se as cisteína proteinases (CPs) onde acisteína proteinase B (CPB) é a CP mais estudada dentre as CPs deste parasito. O focodeste trabalho é a região COOH-terminal da CPB (cyspep), gerada a partir doprocessamento final desta proteinase. O estudo foi conduzido em cinco fases: obtenção dacyspep recombinante (rcyspep); avaliação da antigenicidade da rcyspep em camundongosexperimentalmente infectados com L.(L.) amazonensis; diferenciação in vitro dospromastigotas em amastigotas; avaliação da expressão do gene cpb ao longo dadiferenciação do parasito; e detecção da cyspep nas formas promastigotas e amastigotas doparasito. O polipeptídeo rcyspep, de 14 kDa, foi obtida em sistema pET28-a e purificadopara posterior produção de anticorpos policlonais específicos em camundongos. Observouseque, durante a infecção em camundongos, há uma resposta imune humoral contra orcyspep, caracterizada por um aumento da detecção de anti-cyspep quando comparado comanimais de controle (p <0,05). Nos ensaios de diferenciação constatamos três padrõesmorfológicos ao logo de 96 horas de análise, em uma cinética temporal: formas alongadascom flagelo livre, arredondados com flagelo e arredondadas sem flagelo por microscopia.Adicionalmente a cultura foi analisada por citometria de fluxo demonstrando uma migraçãogradual da população da região R1 para região R2 do dotplot indicando uma diminuição notamanho e aumento da granulosidade celular. Observamos que ao longo destadiferenciação ocorre um aumento da quantidade de transcritos do gene cpb, nos tempos de48 horas (1,3 ×), 72 horas (3,2 ×) e 96 horas (3,4 ×) nas preparações de cDNA dosparasitos, quando comparada com os resultados de quantificação realizados compreparações de cDNA dos promastigotas...

Leishmania (Leishmania) amazonensis presents adaptive mechanisms guided by theirproteinases. In this context, we highlight the cysteine proteinases (CPs) where the cysteineproteinase B (CPB) is the most studied CP among these parasites. The focus of this work isthe COOH-terminal region of CPB (cyspep), generated during the final processing stage ofthis proteinase. Our study comprises five main phases: obtaining of a recombinant cyspeppolypeptide (rcyspep); evaluation of the antigenicity of rcyspep in mice experimentallyinfected with L. (L.) amazonensis; in vitro differentiation of promastigotes into amastigotes;evaluation of cpb gene expression throughout morphological differentiation of the parasite;and detection of cyspep in promastigotes and amastigotes of L. (L.) amazonensis. Thercyspep polypeptide, with 14 kDa, was obtained using a pET28-a system and, subsequently,specific polyclonal antibodies were produced by inoculation in mice. We observed that,during mice infection, there is a humoral immune response against rcyspep, characterized byan increase in detection of anti-cyspep when compared to control animals (p<0.05). Duringdifferentiation assays three morphological patterns could be observed over 96 hours ofobservation: elongated shapes with free flagellum, rounded shapes with free flagellum androunded shapes without visible flagellum. The data point to a gradual migration of thepopulation of parasites from region R1 to region R2 into the dotplot indicating a decrease insize and increase in cell granularity. We observed that alongside the morphologicaldifferentiation there is an increase in the amount of cpb gene transcripts, in time of 48 hours(1.3 ×), 72 hours (3.2 ×) and 96 hours (× 3.4), compared with quantitation results obtainedwith cDNA of promastigotes...
Descritores: Leishmania
Cisteína Proteases
Fracionamento Celular
Ressonância de Plasmônio de Superfície
Limites: Humanos
Responsável: BR15.1 - Biblioteca de Ciências Biomédicas
BR15.1


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Id: biblio-846927
Autor: Duarte, Mariana Lemos.
Título: Identificação e validação funcional de novos alvos das PKCs em célula tronco embrionária / Identification and functional validation of new targets of PKC in embryonic stem cell.
Fonte: São Paulo; s.n; 2013. 198 p. tab, graf, ilus.
Idioma: pt.
Tese: Apresentada a Universidade de São Paulo. Instituto de Química para obtenção do grau de Doutor.
Resumo: Algumas das estratégias utilizadas para entender a biologia de células tronco embrionária (CTE) são baseadas na identificação de cascatas de sinalização que induzem a diferenciação e auto-renovação das CTE através da interferência seletiva de processos específicos. A família das proteínas quinase C (PKC) é conhecida por participar dos processos de auto-renovação e diferenciação celular em CTE, entretanto, o papel específico das diferentes isoenzimas das PKCs ainda precisa ser elucidado. Desta forma investigamos. o papel das PKCs atípicas (aPKCs) em CTE indiferenciadas utilizando um inibidor específico para estas serina/ treonina quinases, o peptídeo pseudossubstrato das aPKCs, e fosfoproteômica. A maioria das proteinas identificadas cuja fosforilação reduziu após o tratamento com o inibidor das aPKC, são proteínas envolvidas com o metabolismo principalmente com a via glicolítica. Além disso, a inibição das aPKCs levou a redução do consumo de glicose, secreção de lactato, acompanhada da redução da atividade da lactato desidrogenase, e aumento da fosforilação oxidativa, sendo analisada através do consumo de oxigênio após o tratamento com oligomicina e FCCP. Verificamos também que as aPKCs são capazes de fosforilar diretamente a piruvato quinase. A glicólise aeróbica parece ser fundamental para a manutenção da indiferenciação das CTE, e demonstramos que as aPKCs participam deste processo auxiliando na auto-renovação das CTE indiferenciadas. Também observamos que as aPKCs assim como a PKCßI modulam a fosforilação da α-tubulina, porém ao passo que as aPKCs interagem com a α-tubulina durante a interfase, a PKCßI interage com a mesma apenas durate a mitose. Estes resultados motivaram a segunda parte da tese, na qual o papel da fosforilação da α-tubulina pela PKCßI foi investigado. O resíduo de treonina 253, conservado em diversas espécies de vertebrados e localizado na interface de polimerização entre a α- e a ß-tubulina foi identificado, como um novo sítio de fosforilação da α-tubulina pela PKCßI. Este sítio não está em um consenso linear para a PKC, entretanto é um consenso formado estruturalmente, onde aminoácidos básicos distantes na sequência linear se tornam justapostos na estrutura terciária da proteína. Estudos de simulação por dinâmica molecular demonstraram que a interação entre a α e ß-tubulina aumenta após esta fosforilação, uma vez que T253 fosforilada passa a interagir com K105, um residuo conservado na ß-tubulina. A fosforilação in vitro de α-tubulina aumenta a taxa de polimerização da tubulina e a inibição da PKCßI em células reduziu a taxa de repolimerização do microtubulo após o tratamento com nocodazol. Além disso, a importância da fosforilação deste sítio foi demonstrada pelo fato de que um mutante fosfomimético GFP-α-tubulina, T253E ser mais incorporado no fuso mitótico ao passo que T253A foi menos incorporado do que a proteína selvagem. Nossos dados suportam a hipótese que os consensos estruturais formados podem ser importantes sítios de reconhecimento pelas quinases e que a fosforilação de T253 da α-tubulina afeta a estabilidade do polímero. Em conclusão, utilizando métodos de fosfoproteômica e interferência seletiva de vias de sinalização, combinados a validações experimentais dos alvos identificados podemos propor a importância funcional das aPKCs e PKCßI em CTE indiferenciadas

Some of the strategies used to understand stem cell biology are based on the identification of signalling cascades that lead to differentiation and self-renewal of embryonic stem cells (ESC) by selective interference of specific signalling processes. The protein kinase C (PKC) family is known to participate in ESC self-renewal and differentiation, however, the specific role of the different PKC isoenzymes in these cells remains to be determined. Therefore, we investigated the role of atypical PKCs (aPKC) in undifferntiated ESC using a specific inhibitor for these serine/ threonine kinases, pseudo-substrate peptide of aPKCs, and phosphoproteomics. The majority of proteins whose phosphorylation decreased upon aPKC inhibition, are proteins involved in metabolism in particular with the glycolytic pathway. Besides that, inhibiton of aPKCs led to a decrease in glucose uptake and lactate secretion, followed by a decrease in lactate dehydrogenase activity, and an increase in mitochondrial activity as measured by oxygen consumption after treatment with olygomycin and a chemical uncoupler. We also verified that aPKCs are able to directly phosphorylated pyruvate kinase. Aerobic glicolysis seems to be fundamental for the maintainance of undifferentiated ESC, and we demonstrated that aPKCs participte in these processes helping to maintain self-renewal of undifferentiated ESC. We also observed that aPKCs as PKCßI modulate the phosphorylation of α-tubulin, however, while aPKCs interact with α-tubulin during interfase PKCßI interacts with α-tubulin only during mitosis. These results lead to the second part of this thesis. We investigated the role of α-tubulina phosphorylation by PKCßI. Indentifying threonine 253, a conserved residue in several vertebrate species, of localized at the polymerization interface between α- and ß-tubulin, as a phosphorylation site of α-tubulin by PKCßI. This site is not in a linear consensus for PKC, however, it is in a structuraly formed consensus, where basic aminoacids distant in the linear sequence are juxtaposed in the three dimentional protein structure. Simulation studies by molecular dynamics show that the interaction between α and ß-tubulin increases upon this phosphorylation, once, phosphorylated T253 interacts with com K105, a conserved residue in ß-tubulin. The in vitro phosphorylation of α-tubulin increased tubulin polymerization rate and inhibiton of PKCßI in cells reduced repolimeration rate of microtubles upon treatment with nocodazole. Besides that, the importance of this phosphorylation site were demonstrated by the fact that a phosphomimetic mutant GFP-α-tubulina, T253E is more incorporated in mitotic fuses while T253A is less than wild type. Our data support the hypothesis that structural consensus may be important sites recognized and that T253 phosphorylation of α-tubulin afects the polymer stability. In conclusion, using phosphoproteomics methods and selective interference of signal transduction pathways combined with experimental validation studies of the identified targets we can propose roles for aPKCs and PKCßI in undifferentiated ESC
Descritores: Células-Tronco Embrionárias/classificação
Proteína Quinase C beta/análise
Estudo de Validação
-Fracionamento Celular/métodos
Metabolismo/genética
Nocodazol/análise
Fosforilação/genética
Proteína Quinase C/análise
Remodelação do Consumo
Tubulinos/crescimento & desenvolvimento
Eletroforese em Gel Diferencial Bidimensional/métodos
Tipo de Publ: Técnicas In Vitro
Estudo de Avaliação
Responsável: BR40.1 - DBD - Divisão de Biblioteca e Documentacão do Conjunto das Químicas
BR40.1; T 574.192, D812i. 30100020434


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Texto completo SciELO Brasil
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Id: lil-745849
Autor: Knop, Luegya; Gandini Jr., Luiz Gonzaga; Shintcovsk, Ricardo Lima; Gandini, Marcia Regina Elisa Aparecida Schiavon.
Título: Scientific use of the finite element method in Orthodontics
Fonte: Dental press j. orthod. (Impr.);20(2):119-125, Mar-Apr/2015. graf.
Idioma: en.
Resumo: INTRODUCTION: The finite element method (FEM) is an engineering resource applied to calculate the stress and deformation of complex structures, and has been widely used in orthodontic research. With the advantage of being a non-invasive and accurate method that provides quantitative and detailed data on the physiological reactions possible to occur in tissues, applying the FEM can anticipate the visualization of these tissue responses through the observation of areas of stress created from applied orthodontic mechanics. OBJECTIVE: This article aims at reviewing and discussing the stages of the finite element method application and its applicability in Orthodontics. RESULTS: FEM is able to evaluate the stress distribution at the interface between periodontal ligament and alveolar bone, and the shifting trend in various types of tooth movement when using different types of orthodontic devices. Therefore, it is necessary to know specific software for this purpose. CONCLUSIONS: FEM is an important experimental method to answer questions about tooth movement, overcoming the disadvantages of other experimental methods. .

INTRODUÇÃO: o Método de Elementos Finitos (MEF) é um recurso da Engenharia empregado para calcular o estresse e a deformação de estruturas complexas, e tem sido amplamente utilizado nas pesquisas em Ortodontia. Apresenta a vantagem de ser um método não-invasivo e preciso, que fornece dados quantitativos e detalhados acerca das reações fisiológicas que podem ocorrer nos tecidos. OBJETIVO: esse artigo pretende realizar uma revisão da literatura sobre as etapas para realização do Método de Elementos Finitos, bem como de sua aplicabilidade na Ortodontia. RESULTADOS: o MEF é capaz de avaliar a distribuição do estresse na interface entre o ligamento periodontal e o osso alveolar, bem como a tendência de deslocamento em diversos tipos de movimentos dentários, quando utilizados diferentes tipos de aparelhos. Para tanto, é necessário conhecimento de softwares específicos para esse fim. CONCLUSÕES: o MEF é um importante método experimental que pode esclarecer questionamentos acerca da movimentação dentária, superando as desvantagens de outros métodos experimentais. .
Descritores: Fracionamento Celular/métodos
Saccharomyces cerevisiae/química
-Centrifugação com Gradiente de Concentração
Organelas/química
Reprodutibilidade dos Testes
Frações Subcelulares
Fatores de Tempo
Tipo de Publ: Estudo de Avaliação
Research Support, Non-U.S. Gov't
Responsável: BR1.1 - BIREME


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Texto completo SciELO Brasil
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Id: lil-741446
Autor: Coêlho, Thaís Gonzalez da Silveira; Caracas, Hugo Cesar Pinto Marques.
Título: Perception of the relationship between TMD and orthodontic treatment among orthodontists
Fonte: Dental press j. orthod. (Impr.);20(1):45-51, Jan-Feb/2015. tab, graf.
Idioma: en.
Resumo: INTRODUCTION: The consensus about the relationship between TMD and orthodontic treatment has gone from a cause and effect association between TMD and orthodontic treatment to the idea that there is no reliable evidence supporting this statement. OBJECTIVE: To assess the beliefs, despite scientific evidence, of Brazilian orthodontists about the relationship between TMD and orthodontic treatment with regards to treatment, prevention and etiology of TMD. METHODS: A survey about the relationship between TMD and orthodontic treatment was prepared and sent to Brazilian orthodontists by e-mail and social networks. Answers were treated by means of descriptive statistics and strong associations between variables were assessed by qui-square test. RESULTS: The majority of orthodontists believe that orthodontic treatment not only is not the best treatment option for TMD, but also is not able to prevent TMD. Nevertheless, the majority of orthodontists believe that orthodontic treatment can cause TMD symptoms. CONCLUSION: This study suggests that orthodontists' beliefs about the relationship between orthodontic treatment and TMD are in accordance with scientific evidence only when referring to treatment and prevention of TMD. The majority of orthodontists believe that, despite scientific evidence, orthodontic treatment can cause TMD. .

INTRODUÇÃO: o consenso sobre a relação entre DTM e tratamento ortodôntico foi de uma associação de causa e efeito à ideia de que não há evidências confiáveis que suportem essa afirmação. OBJETIVO: avaliar as crenças, sem considerar as evidências, de ortodontistas brasileiros sobre a relação entre DTM e tratamento ortodôntico com relação ao tratamento, prevenção e etiologia da DTM. MÉTODOS: um questionário sobre a relação entre DTM e tratamento ortodôntico foi preparado e enviado a ortodontistas brasileiros por meio de e-mail e mídias sociais. As respostas foram analisadas por estatística descritiva, e fortes associações entre as variáveis foram verificadas pelo teste χ2. RESULTADOS: a maioria dos ortodontistas acredita que o tratamento ortodôntico não é o melhor tratamento para DTM. Além disso, acreditam que não é a melhor forma para sua prevenção. Também, a maioria dos ortodontistas acredita que o tratamento ortodôntico pode causar sintomas de DTM. CONCLUSÃO: este estudo sugere que as crenças dos ortodontistas sobre a relação entre tratamento ortodôntico e DTM estão de acordo com as evidências científicas apenas quando se trata do tratamento e da prevenção de DTM. A maioria dos ortodontistas acredita que, apesar das evidências científicas, o tratamento ortodôntico pode causar DTM. .
Descritores: Proteínas de Ciclo Celular/metabolismo
Replicação do DNA/genética
Fatores de Transcrição Forkhead/metabolismo
Fase G1/fisiologia
Regulação da Expressão Gênica/genética
Proteínas Serina-Treonina Quinases/metabolismo
Origem de Replicação/genética
Transdução de Sinais/genética
-Western Blotting
Fracionamento Celular
Linhagem Celular
Proteínas de Ciclo Celular/genética
/metabolismo
CYCLIN-DEPENDENT KINASE INHIBITOR PABNORMALITIES, DRUG-INDUCED/metabolismo
Primers do DNA/genética
Imunofluorescência
Fatores de Transcrição Forkhead/genética
Immunoblotting
Imunoprecipitação
Peptídeos e Proteínas de Sinalização Intercelular/metabolismo
Proteínas Serina-Treonina Quinases/genética
Proteínas Proto-Oncogênicas c-myc/metabolismo
Reação em Cadeia da Polimerase Via Transcriptase Reversa
Interferência de RNA
Limites: Humanos
Tipo de Publ: Research Support, Non-U.S. Gov't
Responsável: BR1.1 - BIREME


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Texto completo SciELO Brasil
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Id: lil-731048
Autor: Ramos-Perez, Flávia Maria de Moraes; Pontual, Andréa dos Anjos; França, Talita Ribeiro Tenório de; Pontual, Maria Luiza dos Anjos; Beltrão, Ricardo Villar; Perez, Danyel Elias da Cruz.
Título: Mixed Periapical Lesion: An Atypical Radicular Cyst with Extensive Calcifications
Fonte: Braz. dent. j;25(5):447-450, Sep-Oct/2014. graf.
Idioma: en.
Resumo: The radicular cyst is an inflammatory odontogenic cyst of endodontic origin. Radiographically, the lesion appears as a periapical radiolucent image. This report describes a very rare case of a mixed periapical radiographic image diagnosed as a radicular cyst. A 37-year-old female patient presented a mixed, well-circumscribed image located in the periapical region of the left maxillary central incisor, which presented unsatisfactory endodontic treatment. Microscopic examination revealed a cavity lined by non-keratinized squamous epithelium and extensive calcifications in the cystic lumen and lining epithelium. Diagnosis of radicular cyst with extensive calcifications was established. Endodontic retreatment was performed and no radiographic signs of recurrence were observed 18 months after treatment. Although very rare, a radicular cyst should be considered in the differential diagnosis of a mixed periapical image associated to teeth with pulp necrosis.

O cisto radicular é um cisto odontogênico inflamatório de origem endodôntica. Radiograficamente, a lesão se apresenta como uma imagem radiolúcida periapical. Este relato descreve um caso muito raro de uma imagem radiográfica periapical mista diagnosticada como cisto radicular. Uma paciente de 37 anos de idade, do gênero feminino, apresentava uma imagem mista, bem circunscrita, localizada na região periapical do incisivo central superior esquerdo, que apresentava tratamento endodôntico insatisfatório. Avaliação microscópica revelou uma cavidade revestida por epitélio escamoso não-queratinizado e calcificações extensas na cavidade cística e revestimento epitelial. O diagnóstico de cisto radicular com extensas calcificações foi estabelecido. Retratamento endodôntico foi realizado e não foram observados sinais radiográficos de recorrência da lesão após 18 meses de tratamento. Embora muito raro, um cisto radicular deve ser considerado no diagnóstico diferencial de uma imagem periapical mista associada a dentes com necrose pulpar.
Descritores: Senescência Celular/fisiologia
Genes ras/genética
Sistema de Sinalização das MAP Quinases/fisiologia
Proteínas Nucleares
/metabolismo
TUMOR SUPPRESSOR PROTEIN PDIPETALONEMA INFECTIONS/metabolismo
-Fracionamento Celular
Células Cultivadas
Ensaio de Unidades Formadoras de Colônias
Ciclo Celular/fisiologia
CYCLIN-DEPENDENT KINASE INHIBITOR PABNORMALITIES, MULTIPLE
Ativação Enzimática
Embrião de Mamíferos/fisiologia
Fibroblastos/citologia
Fibroblastos/metabolismo
GENES, PDIPETALONEMA INFECTIONS
MAP Quinase Quinase 1
Camundongos Knockout
Microscopia de Fluorescência
Quinases de Proteína Quinase Ativadas por Mitógeno/metabolismo
Proteínas Serina-Treonina Quinases/metabolismo
PROTO-ONCOGENE PROTEINS C-MDMTEMEFOS
Proteínas Proto-Oncogênicas/metabolismo
Temperatura
/metabolismo
TUMOR SUPPRESSOR PROTEIN PCONGENITAL ABNORMALITIESARF/metabolismo
Proteínas ras/metabolismo
Limites: Animais
Camundongos
Tipo de Publ: Research Support, Non-U.S. Gov't
Research Support, U.S. Gov't, P.H.S.
Responsável: BR1.1 - BIREME


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Id: lil-634647
Autor: Salariato, D.; Diorio, L. A.; Mouso, N.; Forchiassin, F..
Título: Extraction and characterization of polygalacturonase of Fomes sclerodermeus produced by solid-state fermentation / Extracción y caracterización de poligaracturonasa de Fomes sclerodermeus producida por fermentación en estado sólido
Fonte: Rev. argent. microbiol;42(1):57-62, feb. 2010. graf, tab.
Idioma: en.
Projeto: CONICET; . UBACYT. X081.
Resumo: Polygalacturonase (PG) production by Fomes sclerodermeus using solid-state fermentation (SSF) was carried out. Maximal PG activity (26 U/gdw) was obtained between days 11 and 13 at the end of exponential growth. PG activity in the crude extract was more stable at pH 5-6 and 30 °C and had optimum activity at pH 5 and 50 °C. Optimal conditions for PG extraction were: one time extraction with Na2SO4 as solvent with 10 min. of agitation. In a scale-up system, PG activity per gram of dry substrate decreased about 60% compared with the activity obtained in an Erlenmeyer flask; however, high total PG activity was obtained.

Se estudió la producción de poligalacturonasa (PG) por Fomes sclerodermeus usando técnicas de fermentación en estado sólido. La actividad PG máxima (26 U/g ps) fue observada entre los días 11 y 13. La actividad PG en los extractos crudos fue más estable a pH 5-6 y 30 °C, con una actividad óptima a pH 5 y a 50 °C. Las condiciones óptimas para la extracción de PG se lograron con una única extracción empleando Na2SO4 como solvente, con 10 minutos de agitación. En el escalado del sistema, la actividad PG por gramo de peso seco de sustrato disminuyó cerca de 60% comparada con la obtenida en frascos Erlenmeyer, pero la actividad total fue mayor.
Descritores: Coriolaceae/enzimologia
Proteínas Fúngicas/isolamento & purificação
Poligalacturonase/isolamento & purificação
-Fracionamento Celular/métodos
Coriolaceae/crescimento & desenvolvimento
Fermentação
Concentração de Íons de Hidrogênio
Micologia/métodos
Solventes
Temperatura
Tipo de Publ: Research Support, Non-U.S. Gov't
Responsável: AR1.2 - Instituto de Investigaciónes Epidemiológicas


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Id: lil-634483
Autor: Leotta, G.A.; Chinen, I.; Epszteyn, S.; Miliwebsky, E.; Melamed, I.C.; Motter, M.; Ferrer, M.; Marey, E.; Rivas, M..
Título: Validación de una técnica de PCR múltiple para la detección de Escherichia coli productor de toxina Shiga / Validation of a multiplex PCR for detection of Shiga toxin-producing Escherichia coli
Fonte: Rev. argent. microbiol;37(1):1-10, ene.-mar. 2005. ilus, tab.
Idioma: es.
Projeto: Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Tecnológicas. PIP Nº 0020/98.
Resumo: La infección por Escherichia coli productor de toxina Shiga (STEC) es causa de diarrea con o sin sangre, colitis hemorrágica y síndrome urémico hemolítico (SUH) en humanos. El objetivo de este trabajo fue validar una técnica de PCR múltiple para el diagnóstico de STEC basado en la detección de los genes stx1, stx2 y rfbO157. La validación de la técnica se realizó en dos laboratorios independientes, en forma paralela. Se determinó rango de trabajo, selectividad y robustez. Se evaluó el desempeño de la técnica al combinar distintas concentraciones de dos cepas con diferentes factores de virulencia. El rango de trabajo dependió de la cepa analizada, los valores máximos y mínimos fueron 6,6 x 107 y 1,0 x 104 UFC/50 µl. El límite de detección fue de 1,0 x 104 UFC/50 µl y el límite de corte de 1,0 x 105 UFC/50 µl. La robustez fue óptima al modificar diferentes variables. Se obtuvo 100% de inclusividad, exclusividad, precisión analítica, valor predictivo positivo y valor predictivo negativo. No se observó interferencia al combinar distintas concentraciones de los factores de virulencia blanco de la reacción. La técnica validada es una alternativa apropiada para la detección y confirmación de STEC O157 y no-O157 a partir de cultivos bacterianos.

Shiga toxin-producing Escherichia coli (STEC) cause non-bloody or bloody diarrhea, hemorrhagic colitis and hemolytic uremic syndrome (HUS) in humans. The aim of the present study was to validate a multiplex PCR for the STEC diagnosis based on the detection of stx1, stx2 and rfbO157 genes. The multiplex PCR validation was carried out in two independent laboratories in a parallel way. Work range, selectivity and robustness were established. The PCR performance was evaluated using different concentrations of two STEC strains harboring different target genes. The work range depended on the strain analyzed, the maximum and the minimum values were 6.6 x 107 and 1.0 x 104 CFU/50 µl. The detection limit was 1.0 x 104 CFU/50 µl and the cut limit 1.0 x 105 CFU/50 ml. A good robustness was observed when different variables were introduced. Inclusivity, exclusivity, positive predictivity, negative predictivity and analytical accuracy were of 100%. Interference was not shown when different concentrations of STEC strains, carrying different genes, were used. The validated technique is an appropriate alternative for detection and confirmation of STEC O157 and non-O157 strains from bacterial cultures.
Descritores: Escherichia coli/genética
Reação em Cadeia da Polimerase/métodos
Toxinas Shiga/genética
-Fracionamento Celular/instrumentação
Detergentes
DNA Bacteriano/genética
DNA Bacteriano/isolamento & purificação
Escherichia coli/química
Escherichia coli/classificação
Polietilenoglicóis
Especificidade da Espécie
Toxina Shiga I/genética
/genética
SHIGA TOXIN TEMEFOS/genética
Tipo de Publ: Estudo Comparativo
Research Support, Non-U.S. Gov't
Estudo de Validação
Responsável: AR1.2 - Instituto de Investigaciónes Epidemiológicas


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Id: lil-634464
Autor: Polverino, D.; Molina, N.B.; Minvielle, M.C.; Lozano, M.E.; Basualdo, J.A..
Título: Técnicas de purificación y ruptura de quistes de Giardia spp / Purification and breaking techniques of cysts of Giardia spp
Fonte: Rev. argent. microbiol;36(3):97-100, jul.-sep. 2004. ilus, tab.
Idioma: es.
Resumo: El objetivo de este trabajo fue optimizar y evaluar las técnicas de purificación, aislamiento y ruptura de quistes de Giardia spp a partir de heces formoladas para la obtención de ADN. La materia fecal filtrada fue sometida a 3 técnicas de purificación, utilizando soluciones de formol-éter, sacarosa y formol-éter más sacarosa. La solución de sacarosa permitió aislar los quistes con menos detritos. Los quistes purificados fueron tratados con 3 técnicas para la ruptura de los mismos: shock osmótico y calor, degradación química y shock térmico, acción enzimática y efecto mecánico. Solamente con la técnica de shock térmico, acción enzimática y efecto mecánico se observaron bandas fluorescentes en geles de agarosa. Los resultados de este trabajo permiten contar con una metodología de rutina, simple, que podría ser usada en los pasos previos a la técnica de PCR para la genotipificación de este parásito.

The purpose of this study was to optimize and evaluate the purification techniques, isolation and breaking of cysts of Giardia spp from fecal samples to isolate DNA. Filtrated fecal samples were tested in 3 purification techniques: Telleman solution, sucrose and Telleman plus sucrose. The sucrose solution let us to isolate the cysts with less detritus. The cleaned cysts were splited in 3 techniques to test the breaking: osmotic shock and heat, chemistry degradation and thermic shock, enzymatic action and mechanic effect. Only the last method was successful and showed bands in agarose gel. The result of this study shows a routine and common method which could be used in the previous steps to the PCR technique for the genotypification of these parasites.
Descritores: Fracionamento Celular/métodos
Separação Celular/métodos
Fezes/parasitologia
Giardia/isolamento & purificação
Oocistos
Oocistos/isolamento & purificação
-DNA de Protozoário/isolamento & purificação
Eletroforese em Gel de Ágar
Endopeptidase K/farmacologia
Giardia/citologia
Giardia/genética
Temperatura Alta
Pressão Osmótica
Oocistos/química
Oocistos/efeitos dos fármacos
Soluções
Estresse Mecânico
Cloreto de Sódio/farmacologia
Sacarose/farmacologia
Limites: Animais
Cães
Humanos
Responsável: AR1.2 - Instituto de Investigaciónes Epidemiológicas


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Rocha, J. B. T
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Id: lil-604283
Autor: Meinerz, D. F; de Paula, M. T; Comparsi, B; Silva, M. U; Schmitz, A. E; Braga, H. C; Taube, P. S; Braga, A. L; Rocha, J. B. T; Dafre, A. L; Farina, M; Franco, J. L; Posser, T.
Título: Protective effects of organoselenium compounds against methylmercury-induced oxidative stress in mouse brain mitochondrial-enriched fractions
Fonte: Braz. j. med. biol. res = Rev. bras. pesqui. méd. biol;44(11):1156-1163, Nov. 2011. ilus.
Idioma: en.
Resumo: We evaluated the potential neuroprotective effect of 1-100 µM of four organoselenium compounds: diphenyl diselenide, 3’3-ditri-fluoromethyldiphenyl diselenide, p-methoxy-diphenyl diselenide, and p-chloro-diphenyl diselenide, against methylmercury-induced mitochondrial dysfunction and oxidative stress in mitochondrial-enriched fractions from adult Swiss mouse brain. Methylmercury (10-100 µM) significantly decreased mitochondrial activity, assessed by MTT reduction assay, in a dose-dependent manner, which occurred in parallel with increased glutathione oxidation, hydroperoxide formation (xylenol orange assay) and lipid peroxidation end-products (thiobarbituric acid reactive substances, TBARS). The co-incubation with diphenyl diselenide (100 µM) completely prevented the disruption of mitochondrial activity as well as the increase in TBARS levels caused by methylmercury. The compound 3’3-ditrifluoromethyldiphenyl diselenide provided a partial but significant protection against methylmercury-induced mitochondrial dysfunction (45.4 ± 5.8 percent inhibition of the methylmercury effect). Diphenyl diselenide showed a higher thiol peroxidase activity compared to the other three compounds. Catalase blocked methylmercury-induced TBARS, pointing to hydrogen peroxide as a vector during methylmercury toxicity in this model. This result also suggests that thiol peroxidase activity of organoselenium compounds accounts for their protective actions against methylmercury-induced oxidative stress. Our results show that diphenyl diselenide and potentially other organoselenium compounds may represent important molecules in the search for an improved therapy against the deleterious effects of methylmercury as well as other mercury compounds.
Descritores: Encéfalo/efeitos dos fármacos
Potencial da Membrana Mitocondrial/efeitos dos fármacos
Intoxicação do Sistema Nervoso por Mercúrio/prevenção & controle
Compostos de Metilmercúrio/toxicidade
Mitocôndrias/efeitos dos fármacos
Fármacos Neuroprotetores/farmacologia
Compostos Organosselênicos/farmacologia
Estresse Oxidativo/efeitos dos fármacos
-Análise de Variância
Derivados de Benzeno/farmacologia
Fracionamento Celular
Modelos Animais
Fármacos Neuroprotetores/classificação
Compostos Organosselênicos/química
Limites: Animais
Masculino
Camundongos
Tipo de Publ: Research Support, Non-U.S. Gov't
Responsável: BR1.1 - BIREME


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Tarquinio, Sandra Beatriz Chaves
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Id: lil-503988
Autor: Nedel, Fernanda; André, Dárvi de Almeida; Oliveira, Isabel Oliveira de; Tarquinio, Sandra Beatriz Chaves; Demarco, Flávio Fernando.
Título: Buccal cells submitted to three different storage conditions before DNA extraction
Fonte: J. appl. oral sci;17(2):113-115, Mar.-Apr. 2009. ilus.
Idioma: en.
Resumo: This study evaluated quantitatively and qualitatively the effect of the storage time of samples before the application of the cell lysis solution (CLS) for extracting DNA from buccal cells (BC). BC from the upper and lower gutter region were collected from 5 volunteers using special cytobrushes (Gentra), totaling 3 collections for each individual. In the control group (n=10), CLS was applied soon after BC collection. In the other two groups, samples were stored at room temperature (n=10) or at 4°C (n=10). After CLS application, DNA was extracted according to the manufacturer's instructions (Puregene DNA Buccal Cell Kit; Gentra Systems, Inc.). The DNA obtained was evaluated by two calibrated blind examiners using spectrophotometry and analysis of DNA bands (0.8 percent agarose gel electrophoresis). The obtained data were submitted to one-way ANOVA. The means and standard deviations for DNA extracted under immediate, room temperature and cooling temperature conditions were 3.5 ± 0.7, 3.0 ± 0.6 and 4.1 ± 1.8 µg, respectively (p=0.385). No significant differences were found in relation to the amount of DNA for the different storage conditions. However, in the visual analysis of the DNA bands, no trace of DNA degradation was detected when CSL was applied soon after DNA collection, while DNA bands with degradation could be observed in the other groups. Within the limitations of the study, it may be concluded that CLS should be applied soon after DNA collection in order to obtain high-quality DNA from BC.
Descritores: DNA
Mucosa Bucal/citologia
Preservação de Tecido/métodos
-Fracionamento Celular/métodos
Degradação Necrótica do DNA
Manejo de Espécimes/métodos
Temperatura
Fatores de Tempo
Limites: Humanos
Responsável: BR1.1 - BIREME



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