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Costa, Maria de Fátima Dias
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Id: lil-472298
Autor: Freire, Songelí Menezes; Nascimento, Ivana; Simões, Juçara; Costa, Maria de Fátima Dias; Schaer, Robert; Meyer, Eduard Roberto.
Título: Produção de sonda de DNA diretamente biotinilada com N-hidroxisuccinimida biotina ester (BNHS) / Labeling DNA probes directly coupled with biotinyl-N -hydroxysuccinimide ester (BNHS)
Fonte: Rev. Ciênc. Méd. Biol. (Impr.) = J. med. biol. sci;1(1):80-85, jul.-dez. 2002. ilus.
Idioma: pt.
Resumo: A utilização de sondas de DNA para análise genômica em fase sólida tem se expandido e ultrapassado as áreas da pesquisa, estendendo-se ao terreno do diagnóstico de rotina nas áreas de medicina humana e animal, bem como nas ciências forenses. Estas sondas têm sido utilizadas desde o surgimento da primeira técnica de hibridização descrita com o southern blotting, que envolve a imobilização, em filtros de papel, de fragmentos de DNA separados eletroforeticamente. Outra técnica descrita como o dot-hibridização é menos complexa do que o southern convencional por não requerer o passo prévio de eletroforese e por ser menos exigente quanto à qualidade do DNA, já que dispensa a digestão com enzima de restrição. A marcação mais comum para estas sondas é o fósforo radioisótopo (32P), que, apesar de sua alta sensibilidade, apresenta os inconvenientes de risco físico, necessidade de autorização para manipulação de radioisótopos, alto custo e uma vida média muito curta. Uma série de alternativas para o 32P têm sido utilizadas, com marcas diretas ou secundárias, entre elas a biotina, que tem mostrado grandes vantagens e tem sido usada também em laboratórios especializados e bem equipados. Este trabalho descreve uma modificação do método clássico descrito para sondas de DNA acopladas por biotina hidrazida. Utilizamos a N-hidroxisuccinimida biotina (BNHS) em dimetilformamida, para marcar resíduos de citosina disponíveis em segmentos de fita simples de DNA extraído de Corynebacterium pseudotuberculosis. A variação da proporção de biotina e de DNA, bem como sua especificidade e sensibilidade, foram cuidadosamente testadas e criteriosamente analisadas através de ensaios de hibridização, adsorvendo-se DNA cromossômico do C. pseudotuberculosis e outros DNAs em papel de nitrocelulose, seguindo-se a incubação com as sondas biotiniladas descritas,avidina-peroxidase e revelação com 4-cloro-1-naftol. Os resultados mostraram que a sonda de DNA produzida tem as características favoráveis...
Descritores: DNA
Biotinilação
Corynebacterium pseudotuberculosis
Hibridização de Ácido Nucleico
Sonda
Responsável: BR337.1 - Biblioteca


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Id: lil-459080
Autor: García Gallo, Jairo; Vélez Restrepo, Luís Andrés; Cadena Zuluaga, José Antonio.
Título: Análisis histoquímico de células tumorales (cáncer de colon) tumor primario y metastásico mediante lectinas biotiniladas / Histochemical analysis on tumoral cells (colon cancer) primary and metastatic tumors by biotilinade lectines
Fonte: CES med;18(2):37-44, jul.-dic. 2004. tab, graf.
Idioma: es.
Resumo: De las etapas del desarrollo del cáncer la más amenazante es la metástasis, por lo que se han hecho esfuerzos en su estudio y comprensión. Nosotros estudiamos el glicocáliz de tumores primarios de colon y sus metástasis a sacro, ganglios linfáticos e hígado. Se utilizaron muestras tumorales de pacientes post quirúrgicos con cáncer de cólon. Los cortes fueron fijados e incubados en PSA, DBA, UEA1, jacalina y ELC. Como controles utilizamos azúcares inhibitorios específicos. La mayor intensidad correspondió a Jacalina en tumores primarios y metástasis. PSA,ECL, y UEA1 reaccionaron con intensidad menor. No se registraron diferencias entre los tumores primarios y metastáticos, y tampoco entre las diferentes metástasis. No hubo reacción con el DBA. Estos resultados no muestran diferencias en el Glicocáliz con la presencia de los carbohidratos estudiados entre el tumor primario y la metástasis. Es posible que se deban continuar los estudios con otras lectinas en la búsqueda de las moléculas que llevan a la selectividad por órgano de las metástasis tumorales...
Descritores: Neoplasias do Colo
Lectinas
Neoplasias Primárias Múltiplas
-Biotinilação
Carboidratos
Neoplasias
Tipo de Publ: Relatório Técnico
Responsável: CO83.1 - Biblioteca Fundadores


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Texto completo SciELO Brasil
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Id: lil-425790
Autor: Zander, T; Yunes, J. A; Cardoso, A. A; Nadler, L. M.
Título: Rapid, reliable and inexpensive quality assessment of biotinylated cRNA
Fonte: Braz. j. med. biol. res = Rev. bras. pesqui. méd. biol;39(5):589-593, May 2006. ilus, tab.
Idioma: en.
Projeto: Frauke Weiskam-Christel Ruranski Foundation; . NIH; . Leukemia and Lymphoma Society; . NIH.
Resumo: The interpretation of oligonucleotide array experiments depends on the quality of the target cRNA used. cRNA target quality is assessed by quantitative analysis of the representation of 5' and 3' sequences of control genes using commercially available Test arrays. The Test array provides an economically priced means of determining the quality of labeled target prior to analysis on whole genome expression arrays. This manuscript validates the use of a duplex RT-PCR assay as a faster (6 h) and less expensive (6 were chosen and classified as degraded cRNAs, and 31 samples with a ß-actin 3'/5' ratio <6 were selected as good quality cRNAs. Blinded samples were then used for the RT-PCR assay. After gel electrophoresis, optical densities of the amplified 3' and 5' fragments of ß-actin were measured and the 3'/5' ratio was calculated. There was a strong correlation (r² = 0.6802) between the array and the RT-PCR ß-actin 3'/5' ratios. Moreover, the RT-PCR 3'/5' ratio was significantly different (P < 0.0001) between undegraded (mean ± SD, 0.34 ± 0.09) and degraded (1.71 ± 0.83) samples. None of the other parameters analyzed, such as i) the starting amount of RNA, ii) RNA quality assessed using the Bioanalyzer Chip technology, or iii) the concentration and OD260/OD280 ratio of the purified biotinylated cRNA, correlated with cRNA quality.
Descritores: Análise de Sequência com Séries de Oligonucleotídeos/métodos
RNA Complementar/genética
Reação em Cadeia da Polimerase Via Transcriptase Reversa/métodos
-Biotinilação
Limites: Humanos
Tipo de Publ: Estudo de Validação
Responsável: BR1.1 - BIREME



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