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Effect of media and incubation periods on Mycoplasma gallisepticum strains differentiation by SDS-PAGE protein analysis
Arq. bras. med. vet. zootec ; 45(6): 543-56, dez. 1993. ilus, tab
Artigo em Inglês | LILACS | ID: lil-240155
Biblioteca responsável: BR68.1
RESUMO
Duas estirpes de Mycoplasma gallisepticum (F-K810, S6 (208)) foram incubadas a 37C, em dois diferentes meios de cultivo meio de Frey contendo soro de suíno (Frey-SS) e meio TP contendo soro de cavalo (TP-HS) e em três diferentes períodos de incubaçäo, quais sejam, 36, 72 e 144 horas. Os cultivos foram centrifugados e as proteínas analisadas por eletroforese em gel de poliacrilamida (SDS-PAGE). Para padronizar as análises, contagem de unidades formadoras de colônias (CFU/ml) e a determinaçäo da concentraçäo de proteínas foram realizadas antes da resoluçäo das bandas de proteínas por eletroforese. Análises das proteínas por eletroforese foram realizadas em dois diferentes tamanhos de gels de poliacrilamida. Um tamanho padräo (5h de corrida) e um mini-gel (35min. de corrida) para se verificar a eficiência deste último. Independentemente do meio de cultivo (FREY-SS ou TP-HS), encontraram-se consistentes diferenças de padröes de proteínas para as duas estirpes cultivadas (F-K810) e S6 (208). Diferenciaçäo mais acurada entre as estirpes foi obtida quando elas foram cultivadas em meio de FREY-SS. Para cada estirpes cultivada, independentemente do meio de cultivo, observaram-se algumas diferenças nos diferentes períodos de incubaçäo. Entretanto, elas näo foram suficientemente expressivas para que se elegesse um dos períodos de incubaçäo. Após a obtençäo destes resultados, cultivaram-se mais quatro diferentes estirpes de Mycoplasma gallisepticum, quais sejam, as estirpes F-F2F10, V503, PG31 e A5969. Estas foram incubadas a 37C também nos meios Frey-SS e TP-HS por um período de 72 horas. Após a determinaçäo da concentraçäo de proteínas, estes cultivos foram analisados por eletroforese em gel (SDS-PAGE). As estirpes mostraram para ambos os meios bandas que facilmente as identificavam. Em cultivos crescidos em meio de TP-HS observou-se uma banda de proteína a altura de 75 Kd. O mesmo näo foi observado em cultivos crescidos em meio de Frey-SS. Assim, sabendo-se que a estirpe F-K810 usada em vacinas apresenta uma banda a esta mesma altura (75Kd), o meio de Frey-SS é recomendado para se evitar confusäo com aquela estirpe vacinal. Os resultados da eletroforese, obtidos com o mini-gel, foram os mesmos para o sistema de tamanho regular, porém apresentaram uma resoluçäo bem pior
Assuntos
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Coleções: Bases de dados internacionais Base de dados: LILACS Assunto principal: Proteínas / Galinhas / Meios de Cultivo Condicionados / Eletroforese / Incubadoras / Mycoplasma Limite: Animais Idioma: Inglês Revista: Arq. bras. med. vet. zootec Assunto da revista: Medicina Veterinária Ano de publicação: 1993 Tipo de documento: Artigo
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Coleções: Bases de dados internacionais Base de dados: LILACS Assunto principal: Proteínas / Galinhas / Meios de Cultivo Condicionados / Eletroforese / Incubadoras / Mycoplasma Limite: Animais Idioma: Inglês Revista: Arq. bras. med. vet. zootec Assunto da revista: Medicina Veterinária Ano de publicação: 1993 Tipo de documento: Artigo
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