Estudos de expressão do HBsAg: hepatite B oculta, genótipos do HBV e quimeras de HBV e HCV

Araujo, Natalia Motta de

RESUMO

Introdução: O vírus da hepatite B (HBV) é classificado em oito genótipos (A-H), que apresentam uma distribuição geográfica característica nas diferentes regiões do mundo. No Brasil, são encontrados principalmente os genótipos A, D e F. A infecção pelo HBV é comumente diagnosticada pela presença do antígeno de superfície viral (HBsAg) no soro de indivíduos infectados. Mutações no HBsAg podem afetar os níveis de secreção deste antígeno, bem como, alterar a sua conformação, e conseqüentemente, inibir a sua detecção pelos testes imunoenzimáticos. A detecção do DNA viral em pacientes com sorologia negativa para o HBsAg caracteriza a ocorrência de infecção oculta pelo HBV. Partículas híbridas de HBsAg, também denominadas quimeras, têm sido utilizadas com bastante eficiência na apresentação de epítopos exógenos. Objetivos: Realizar estudos de expressão in vitro do HBsAg em células eucarióticas visando (i) associar infecção oculta pelo HBV com mutações de aminoácidos no HBsAg; (ii) avaliar possíveis diferenças na detecção do HBsAg relacionadas aos diferentes genótipos do HBV; e (iii) possibilitar a construção de quimeras de HBV e do vírus da hepatite C (HCV) para produção de proteínas híbridas imunizantes. Metodologia: A clonagem das regiões genômicas do envelope do HBV foi realizada utilizando-se os vetores de expressão em células eucarióticas pcDNA3 e/ou pCI. Para a inserção do segmento de HCV no HBsAg, foi utilizado um sítio de restrição natural localizado na região do epítopo neutralizante do HBsAg. Ensaios de transfecção transitória foram realizados em células CHO e/ou HuH7. O meio de cultura e os extratos celulares foram analisados quanto à detecção de HBsAg por ensaios imunoenzimáticos. Ensaios de imunofluorescência, utilizando um anticorpo monoclonal anti-HBs, foram realizados para detectar a localização intracelular do HBsAg. Resultados: 1) A infecção oculta pelo HBV foi detectada em 6/43 (14por cento) pacientes infectados pelo HIV. A ocorrência de...HBsAg.